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1、同济大学附属同济医院检验科血液组项目操作指导书TJYYJYKMY/XMZ130第2版标题: 碱性磷酸酶染色第1章 第30节第 PAGE 3 页 共 NUMPAGES 3 页 目的:保证碱性磷酸酶染色检测结果准确、可靠。 适用范围:碱性磷酸酶染色 项目名称:碱性磷酸酶(AKP)染色 检测方法:偶氮偶联法 原理:在PH9.5时,底物被白细胞的酶水解,释放磷酸根和芳香萘胺,后者于偶氮盐偶和,形成有色沉淀。 试剂:6.1 品牌:上海虹桥乐翔医用试剂技术公司6.2 货号:6.3 包装规格:5人份/盒6.4 内含物: 固定液(保存于4)冰箱 1瓶0.05M缓冲液(PH9.4-9.6)保存于冰箱 15ml底
2、物 1管二甲基甲酰胺 1管固紫B(FAST VIOLETB) 1管 仪器:显微镜 操作步骤:8.1 血片或髓片放置4固定液中30秒,流水冲洗,空气凉干。8.2 工作液:8.2.1 用二甲基甲酰胺溶解底物后,倒入缓冲液中。8.2.2 再加入固紫B液8.3 把固定后的玻璃片放入工作液中,置37水温箱45分钟。8.4 流水冲洗。8.5 苏木精复染3-8分钟8.6 流水洗,凉干8.7 直接油镜观片8.8 结果:酶活动处呈亮红色颗粒8.8.1 碱性磷酸酶的积分标准如下;(-)或0分:阴性反应(+)或1分:胞浆呈均匀的灰黑色或胞浆1/2以下区域出现黑色至棕黑色(+)或2分:全部胞浆呈均匀灰黑色或胞浆1/2
3、-3/4的区域出现棕黑色(+)或3分:全部胞浆呈棕黑色或黑色或胞浆3/4的区域充满致密的深黑色沉淀(+)或4分:全部胞浆充满致密的深黑色团块沉淀,甚至将核盖住 8.8.2 成熟中性粒细胞碱性磷酸酶积分值的计算:用油镜计算100个成熟中性粒细胞,包括中性分叶核和中性带状核,分别记录其分布情况将每个细胞的积分相加,记算出总分值。 线性范围:无10. 参考范围:6.8-50.48 临床意义:11.1 正常血细胞的染色反应:碱性磷酸酶主要存在于成熟中性粒细胞(包括中性分叶核和中性带状核),除巨嗜细胞也可呈阳性反应外其他血细胞均呈阴性反映。11.2 区别慢性粒细胞性白血病及反应性白细胞增生。 病人准备标本要求:采取病人末梢血 注意事项:13.1 标本新鲜13.2 染色时间要充分。13.3 冲洗要干净。14 参考资料:全
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