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1、同济大学附属同济医院检验科血液组项目操作指导书TJYYJYKMY/XMZ117第2版标题: 抗碱血红蛋白测定第1章 第17节第 PAGE 4 页 共 NUMPAGES 4 页 目的:保证抗碱血红蛋白测定结果准确、可靠。 适用范围;检测抗碱血红蛋白 项目名称:抗碱血红蛋白测定(抗碱Hb) 检测方法:比色法 原理:受检血液置于碱性溶液0.083mol/l NaOH中,作用1分钟。用酸化的半饱和硫 酸铵溶液终止反应,混匀过滤,检测滤液中抗碱血红蛋白的含量。HbF具有抗碱能力,在碱性溶液中不变性,加入硫酸铵不沉淀,过滤后滤液中,HbF的量呈正相关。HbA无抗碱能力,在碱性滤液中变性,加入硫酸铵沉淀,过
2、滤除去。 试剂:6.1 品牌: NaOH 上海试剂三厂 硫酸铵 上海试剂三厂 生理盐水 上海同济医院 6.2 货号 NaOH 13-2010278125II 硫酸铵 13-001-0802-113II 生理盐水 B916.3 包装规格: NaOH 500mL 硫酸铵 50g 生理盐水 500mL6.4 内含物: 0.083mol /L NaOH 饱和硫酸溶液:硫酸铵 390g 蒸馏水 加至500ml 酸性半饱和硫酸铵溶液:饱和硫酸铵 200ml 1mol/L HCL 10ml 加蒸馏水至400ml 仪器:分光光度仪 操作步骤:8.1 标本为05真空管采集的抗凝血3mL制备成10%Hb溶血液。(
3、同Hb电泳)8.2 取一支试管,加入0.083mol/LnaOH1.6ml,加入10%Hb溶血液0.1ml,同时开动秒表用吸管上下吸匀56次,随即轻轻摇动试管10秒钟,使血红蛋白液和NaOH溶液充分混匀。8.3 准备至1分钟,加入酸性半饱和硫酸铵溶液3.4ml,立即颠倒混匀56次,静置10分钟后,用定量滤纸过滤。此管为测定管,每个标本做2管取平均值。8.4 另取一支试管,加入H2O 5.05ml,再加入0.05mlHb溶血液,充分混匀,此管为100%血红蛋白管为对照管。8.5 用蒸馏水调零,在540nm波长处比色。 计算: 测定管OD值抗碱Hb(%)=100% 100%测定管OD值X2 线性范
4、围:无10. 参考范围:正常人的HbF浓度在2%以下 不同年龄的HbF含量年龄 抗碱Hb含量(%) 年龄 抗碱Hb含量(%)早生儿 70.691.4 13 1.024.73足月儿 4589 46 0.93.18新生儿 48.492.8 711 0.41.713月 7.4981.7 1216 0.41.546月 2.4339.4 成年人 2712月 1.377.811. 临床意义:抗碱血红蛋白增高可见于:B地中海贫血、遗传性胎儿血红蛋白持续增高症及白血病、再障、铁粒幼细胞性贫血,PNH,MDS,恶性贫血。 病人准备标本要求:无溶血无脂血 注意事项: Hb溶液必须当天新鲜配制。13.2 试验时浓度应控制在201,温度过低,Hb变性不完全,结果偏高。13.4 严格控制
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