高效液相色谱法测定奈韦拉平的血药浓度

1、高效液相色谱法测定奈韦拉平的血药浓度【关键词】色谱法,高压液相；奈韦拉平；血药浓度【关键词】色谱法，高压液相；奈韦拉平；血药浓度奈韦拉平nevirapine是人体免疫缺陷病毒(HIV1)的非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI).奈韦拉平与HIV1的逆转录酶(RT)直接连接并通过使此酶的催化端断裂来阻断RNA依赖和DNA依赖的DNA聚合酶活性1-2.奈韦拉平不与底物或三磷酸核苷产生竞争.我们旨在探究一种简便、快速、专属性高的测定奈韦拉平血浆浓度的方法.1材料和方法1.1材料安捷伦1100液相色谱仪美国安捷伦公司消费；低温高速离心机德国SIGA公司消费；振荡器美国科尔帕默仪器公司消费；万分之一天平上

2、海衡平仪器仪表厂消费.甲醇、乙腈，色谱纯，erk公司消费；磷酸、磷酸二氢钠、三氯乙酸、三乙胺，AR级，上海化学试剂公司消费.受试制剂：国产奈韦拉平胶囊剂商品名艾极，批号0309001，每粒200g，浙江华海药业股份消费；国产奈韦拉平片剂商品名艾太，批号0402022，每片200g，浙江华海药业股份消费；参比制剂：进口奈韦拉平片商品名维乐命，批号304185d，每片200g，德国勃林格殷格翰消费；奈韦拉平标准品，批号556503002，含量99.8%，浙江华海药业股份提供.1.2方法1504.6,0.5；流动相：乙腈:0.01l/L磷酸二氢钠含0.01l/L三乙胺，磷酸调pH至5.0=18:82

3、；流速：1.0L/in；柱温：45；检测波长：240n；进样量：25L；灵敏度：0.01AUFS.参加标准品的血浆样品和待测血浆样品的二维色谱图，比拟所测成分的保存时间及检测波长是否一致.参加20L500L/L三氯乙酸，漩涡振荡，4下离心5in15000r/in，取上清液25L进样，作HPL分析.参加A对药物浓度进展线性回归，计算回归方程.浓度相比，计算血样中奈韦拉平的相对回收率和日内、日间精细度.2结果2.1色谱别离与定性从参加标准品的血浆样品的二维色谱图可知，奈韦拉平在12.165in出峰，比拟空白血浆、参加标准品的血浆样品和待测血浆样品的色谱图，奈韦拉平的保存时间根本一致，证明定性成功图

4、1.A：空白血浆；B：参加标准品的血浆样品；：待测血浆样品.图1人血浆中奈韦拉平的高效液相色谱图2.2线性关系回归方程：=81.45A+58.65,相关系数r2.3专属性本方法专属性高，在该色谱条件下，测得奈韦拉平保存时间为12.165in，药物峰形良好，血浆中内源性杂质不干扰奈韦拉平的测定.2.5血药浓度时间曲线采用二重3*3拉丁方设计，24名受试者按照随机顺序承受3种药物奈韦拉平国产胶囊剂、片剂与进口片剂200g后的平均血药浓度时间曲线见图2.结果显示，血样中奈韦拉平实测浓度均在本试验线性范围内.图2奈韦拉平的平均血药浓度时间曲线3讨论测定人血浆中奈韦拉平浓度的方法有高效液相色谱法3-4和

5、离子对色谱法5.我们采用高效液相色谱法，血浆内源性杂质不干扰药物的测定.采用磷酸盐缓冲溶液，调节pH=5，以获得较好的别离度和较短的保存时间.该方法符合人体药代动力学研究生物样品测定的方法学要求.本实验中，对于流动相的选择和药物的萃取进展了大量探究工作，固相萃取可得到较高和较稳定的回收率6，却代价昂贵，应用500L/L三氯乙酸作为萃取溶剂，回收率高而且稳定，以乙腈和磷酸盐溶液作为流动相7，药物峰受到血浆内源性杂质峰干扰，磷酸盐溶液中参加三乙胺，消除杂质峰的干扰，实验方法有较高专属性.奈韦拉平是一种抗艾滋病新药，有较多不良反响，会引起肝毒性和耐受性8-9.本次试验过程因志愿者出现不良反响而脱落4

6、例.【参考文献】1TebasP,YarasheskiK,HenryK,etal.EvaluatinfthevirlgialandetablieffetsfsithingprteaseinhibitrbinatinantiretrviraltherapytnevirapinebasedtherapyfrthetreatentfHIVinfetinJ.AIDSResHuRetrviruses,2022,20(6):589-594.2ansuthi,SungkanuparphS,VibhaglA,etal.Nevirapineversusefavirenzbasedhighlyativeantire

7、trviraltherapyregiensinantiretrviralnaivepatientsithadvanedHIVinfetinJ.HIVed,2022,5(2):105-109.4LpezR,PuL,GezR,etal.SipleandrapiddeterinatinfnevirapineinhuanserubyreversedphasehighperfraneliquidhratgraphyJ.JhratgrBBiedSiAppl,2001,751(2):371-376.5FanB,SteartJT.Deterinatinfzidvudine/laivudine/nevirapi

8、neinhuanplasausinginpairHPLJ.JPharBiedAnal,2002,28(5):903-908.6lbS,BeguinA,arzlini,etal.DeterinatinfthenvelnnpeptidiHIVprteaseinhibitrtipranavirbyHPLUVafterslidphaseextratinJ.JhratgrBAnalytTehnlBiedLifeSi,2022,832(1):138-143.7NtariS,BediA,IpplitG,etal.Siultaneusdeterinatinf16antiHIVdrugsinhuanplasabyhighperfraneliquidhratgraphyJ.JhratgrBAnalytTehnlBiedLifeSi,2022,831(12):258-266.8GkenginD,YaazhanT.Hepatiadverseeventsduringhighlyativeantiretrviraltherapyntainingnevirapine:AasereprtJ.AnnlinirbilAntiirb,2002,1:1.9ansuthi,hupathatN,havavanihA,etal.Safetyandtler