生物样本样品前处理

1、关于生物样本样品前处理第一张，PPT共十五页，创作于2022年6月简介第二张，PPT共十五页，创作于2022年6月前处理技术1、直接稀释法：简单、回收率高、成本低，但选择性差，应用有限2、超滤法：多用于测定游离药物浓度3、蛋白沉淀法：几乎适用于所有小分子化合物，简单快速，回收率高，但选择性差，基质效应严重4、液液提取法：基质效应降低，低成本，重复性好；但难以自动化，不适用于水溶性化合物的提取，极性相差较大的化合物同时提取困难5、固相萃取法：可实现自动化，基质效应降低，同时完成样品的富集与净化；但成本较高第三张，PPT共十五页，创作于2022年6月液液提取法 利用目标化合物在生物基质和与水不互溶

2、的有机溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从生物基质中转移至有机相中。两相的分离需借助两相的密度差来实现原理：相似相溶分配系数：kA=yA/xA yA和xA分别表示在萃取相和萃余相中的质量比率选择性系数（分离系数）：=kA/kB=萃取剂的选择：1、选择性好：表现为选择性系数大。2、萃取容量大：表现为分配系数大。3、萃取剂与原溶剂的互溶度。4、萃取剂和原溶剂有较大的密度差。5、化学稳定性耐酸耐碱、抗氧化还原、耐热、无腐蚀。6、安全性好。7、经济性好。Tips: PH和温度对萃取有一定影响。第四张，PPT共十五页，创作于2022年6月常用液液提取溶剂溶剂名称分子量沸点（）密度（g/mL)偶极矩（

3、D)二氯甲烷84.9401.331.60乙酸乙酯88.177.10.901.78氯代正丁烷92.6770.89乙醚74.134.50.711.15戊烷72.236.10.630 环己烷84.280.70.780正己烷86.2690.660.08甲苯92.2110.60.870.36异丙醇*60.182.40.791.66四氢呋喃*72.1660.891.63乙腈*41.181.60.783.92正丁醇*74.11171.001.50水*18.01001.001.84注：“*”表示与水互溶偶极矩越小，极性越小第五张，PPT共十五页，创作于2022年6月固相提取法HLB(Hydrophilic-L

4、ipophilic Balance Copolymer)材料的优点水可浸润反相保留PH1-14范围内稳定没有裸露硅羟基第六张，PPT共十五页，创作于2022年6月固相提取法第七张，PPT共十五页，创作于2022年6月固相提取法第八张，PPT共十五页，创作于2022年6月固相提取法改变化合物PH，酸性保留，碱性洗脱第九张，PPT共十五页，创作于2022年6月固相提取法改变化合物PH，碱性保留，酸性洗脱第十张，PPT共十五页，创作于2022年6月固相提取法改变吸附剂PH，碱性保留，酸性洗脱第十一张，PPT共十五页，创作于2022年6月固相提取法改变吸附剂PH，酸性保留，碱性洗脱第十二张，PPT共十

5、五页，创作于2022年6月LC-MS-MS方法需考虑的问题基质效应样品中除被检测化合物外的成分，对化合物测定造成影响的效应。两种方式检测基质效应：柱后灌流法（定性），样品处理比较法（定量）。解决方案：1、改变样品前处理方法。（液液提取和固相提取法可降低基质效应）2、优化色谱条件。（将干扰物和待测物分离）3、优化质谱条件。（更换离子源，APCI源优于ESI源）4、同位素内标。（终极办法，最有效）生物基质中的磷脂化合物易导致基质效应，大多数表现为基质抑制。建议：LC-MS-MS方法时监测 m/z184 m/z184离子对。第十三张，PPT共十五页，创作于2022年6月LC-MS-MS方法需考虑的问题非特异性吸附在低蛋白含量的生物基质（尿液，脑脊液，透析液等）中，化合物在存放/转移过程中与容器材料发生特异性结合的现象。在相应的生物基质中或水中测试，做转管实验。通常更换储存材料，或者在基质中加入一定量表面活性剂可消除非特异性吸附现象。 常见表面活性剂：Triton-X-100，吐温等1、表面活性剂需确立一个浓度范围而不是单一浓度。2、