核医学教学课件：02-体外分析技术

1、体外分析技术体外分析技术体外放射分析体外非放射分析放射性竞争结合分析放射性非竞争结合分析放射免疫分析免疫放射分析酶免疫分析化学发光免疫分析荧光免疫分析(RIA)(IRMA)(EIA)(CLIA)(FIA) 利用放射性核素标记的示踪剂在体外测定从体内采取的样品中的微量生物活性物质的含量第 一 节放射免疫分析法(Radioimmunoassay)Dr. Yalow 一、基本原理 Ag-Ab + Ag *Ag AbAg+*Ag-Ab + *Ag(B)(F) *Ag与Ag的免疫活性相同*AgAg AbAg= * Ag , AgAb=*AgAbAg *Ag , *AgAb (B) *Ag(F)Ag 90

2、%2）半衰期足够长3）保持原有抗原的特性125I大分子、3H or 125I小分子（一）基本试剂1、抗体2、标记抗原3、非标记抗原 （标准品）二、基本方法化学结构、免疫活性与被测抗原相同高纯度（二） B和F的分离1、第一类2、第二类双抗体沉淀法PEG沉淀法固相第二抗体法二、基本方法+AgAb(1)Ab(2)试管Ab(2)Ab(1)Ag可溶性复合物可沉淀复合物三、质量控制（quality control） 1、精密度（precision） 变异系数（ CV ）7%10%2、准确度（accuracy） 回收率=测定值/真实值100% 90%110% 3、灵敏度 （sensitivity）方法的最小

3、可测量4、特异性（specificity）交叉反应率5、健全性（perfectly）平行性试验6、稳定性（stability）B0%，NSB，ED25，ED50，ED75 ABCRIA 小 结灵敏度高特异性好精确的定量方法操作简便第二节免疫放射分析法*Ab+Ag-*Ab + *Ab（immunoradiometric assay,IRMA）B%Ag（B）（F）IRMA与RIA工作原理的主要区别RIAIRMA竞争性抗原抗体结合反应非竞争性抗原抗体结合反应采用标记抗原采用标记抗体三种主要反应试剂二种主要反应试剂所用抗体是限量的所用抗体是过量的*AgAb的量与待测Ag的量呈负相关Ag*Ab的量与待测

4、Ag的量呈正相关反应到达平衡慢反应到达平衡快非特异结合主要影响高剂量区非特异结合主要影响低剂量区低剂量区有不确定因素低剂量区无不确定因素B%B%拟合的标准曲线拟合的NSB拟合的标准曲线拟合的NSBIRMA的标准曲线及非特异结合曲线RIA的标准曲线及非特异结合曲线IRMA与RIA工作原理的主要区别RIAIRMA竞争性抗原抗体结合反应非竞争性抗原抗体结合反应采用标记抗原采用标记抗体三种主要反应试剂二种主要反应试剂所用抗体是限量的所用抗体是过量的*AgAb的量与待测Ag的量呈负相关Ag*Ab的量与待测Ag的量呈正相关反应到达平衡慢反应到达平衡快非特异结合主要影响高剂量区非特异结合主要影响低剂量区低剂

5、量区有不确定因素低剂量区无不确定因素RIAIRMA+或IRMA和RIA低剂量区的不确定因素示意图011IRMA与RIA工作原理的主要区别RIAIRMA竞争性抗原抗体结合反应非竞争性抗原抗体结合反应采用标记抗原采用标记抗体三种主要反应试剂二种主要反应试剂所用抗体是限量的所用抗体是过量的*AgAb的放射性与待测Ag的浓度呈负相关Ag*Ab的放射性与待测Ag的浓度呈正相关反应到达平衡慢反应到达平衡快非特异结合主要影响高剂量区非特异结合主要影响低剂量区低剂量区有不确定因素低剂量区无不确定因素第三节非放射性标记免疫分析技术酶标记免疫分析技术化学发光免疫分析技术时间分辨荧光免疫分析技术时间分辨荧光免疫分析技术（time-resolved fluoroimmunoassay）一、基本原理镧系元素（15）：铕（Eu），钐（Sm），镝（Dy），鋱（Te）Eu+EuEu+增强液+Eu“解离增强镧系荧光免疫分析”时间分辨荧光检测的基本原理示意图荧光衰退时间铕：730000 ns钐：50