基因多态性与宁夏汉族乳腺癌遗传易感性研究

1、基因多态性与宁夏汉族乳腺癌遗传易感性研究【摘要】目的分析宁夏汉族yp1a1*2a基因多态性与乳腺癌遗传易感性的关系。方法应用聚合酶链反响限制性片段长度多态性pr-rflp技术分别对144例乳腺癌患者和154例对照的yp1a1*2a基因多态性进展测定，分析两组基因型及等位基因频率的分布特点。结果yp1a1*2a等位基因t、在乳腺癌组和对照组分布的差异无显著性(p0.05)，其中等位基因的乳腺癌发病风险比值比r为1.34(95%i：0.971.86)。yp1a1*2a各基因型分布两组间差异也无显著性(p0.05)，杂合子突变t、纯合子突变分别与野生型tt相比，乳腺癌发病风险r分别为1.32(95%

2、i：0.802.18)和1.86(95%i：0.923.78)。结论yp1a1*2a基因多态性其突变纯合子和杂合子有增加乳腺癌风险的趋势，但未到达显著程度。yp1a1*2a基因多态性可能与宁夏汉族人群乳腺癌的发病有关系。【关键词】乳腺肿瘤studyfyp1a1*2ageneplyrphisandsuseptibilitytbreastanerinthehannatinalityinningxiaguei-dng1,raning-lian2,liuhun-lian1,etal.abstrat:purpsetinvestigatetheassiatinbeteenyp1a1*2ageneplyrp

3、hisanditssuseptibilitytbreastanerinthehannatinalityinningxia.ethdsyp1a1*2ageneplyrphisin144asesithbreastanerand154ntrlseredetetedbypr-rflp.thefrequeniesfgentypeandalleleereanalyzed.resultsthefrequeniesfalleletandshednsignifiantdifferenebeteenthetgrups(p0.05).theddsrati(r)fbreastaneriththealleleas1.3

4、4(95%i:0.971.86).thereasnsignifiantdiffereneinthegentypett,t,beteenthetgrups(p0.05)t.paredtildtypett,therfbreastanerithgentypesfheterzygtetandhzygteere1.32(95%i:0.802.18)and1.86(95%i:0.923.78),respetively.nlusinitispssiblethattheyp1a1*2ageneplyrphisislinkedithbreastanerinthehannatinalityinningxia.hz

5、ygteandheterzygteightinreaseriskfrbreastaner,butithutsignifiantbeteenbreastanerandntrls.keyrds:breastneplass;ythrep4501a1*2a;geneplyrphis;ningxia;hanppulatin目前已确认的乳腺癌危险因素只能解释30%40%的发病原因1。除家族性乳腺癌主要与bra1、bra2有关外，散发性乳腺癌的发生可能与环境致癌物的代谢有关。个体之间的患癌差异性被称为肿瘤遗传易感性。研究说明相与相代谢酶基因多态性与个体肿瘤易感性差异有关。yp1a1是体内重要的相代谢解毒酶之

6、一，能代谢活化多种环境致癌物或致突变物2，国外报道显示其遗传多态性与乳腺癌的易感性有关3。本研究对144例乳腺癌患者和154例对照的细胞色素p4501a1yp1a1基因3端*2a多态性的分析，讨论yp1a1*2a基因多态性与宁夏汉族乳腺癌易感性的相关性。1材料与方法1.1研究对象于2022年5月2022年8月，搜集经宁夏医学院第一附属医院临床病理检查确诊的女性乳腺癌患者144例，年龄2875岁，平均年龄52.27岁；来自该院的安康体检女性对照者154例，年龄3070岁，平均年龄52.69岁。所有研究对象均无乳腺炎等乳腺疾病史、无放射和化学药物治疗史、无自身免疫性疾病史；两组研究对象均为在宁夏地

7、区生活15年以上且无血缘关系的汉族居民。以上研究对象为排除pr扩增失败的样本。1.2实验方法抽取静脉血35l，edta抗凝，低渗溶血法别离白细胞,酚、氯仿法提取基因组dna，并用乙醇沉淀，溶解于保存液(tae)中(浓度为0.1g/l)，置-4冰箱保存。pr扩增：体系总体积为25l，包括10pl/l的引物溶液各1.25l，4dntp(含各种dntp2.5l/l)溶液2.0l，10buffer2.0l，25l/lgl2溶液1l，tag酶1u购自华美生物工程公司，基因组dna溶液2.0l，再加去离子水至25l配成反响体系。应用bi-rad公司的pe2400pr仪进展基因扩增。反响条件为94预变性5i

8、n，循环周期依次为解链9435s，退火6035s，延伸7260s，33个循环周期后72再延伸7in。1%琼脂糖凝胶电泳，检查聚合酶链反响pr扩增产物，扩增片段大小为343bp。pr扩增产物置-4冰箱保存待用。酶切与电泳：pr扩增产物10l，sp(prega)0.5l(10u)，10buffer2.0l，bsa2.0l，用去离子水补足至20l，37水浴，转摇40转，消化4h。2%琼脂糖凝胶电泳40in。酶切结果经电泳后，于紫外灯下断定其基因型，yp1a1*2a野生型tt显示为343bp一条带；杂合突变型t为343bp、200bp、143bp三条带；纯合突变型为200bp、143bp两条带。另取t

9、t和的pr扩增样本数例送测序，检验基因分型的准确性。1.3统计学处理采用spss11.5软件对所得数据进展统计分析。测得的基因型、等位基因频率与hardy-einberg平衡的符合程度采用卡方检验。两组之间等位基因与基因型频率比拟用2检验，p0.05为差异有统计学意义。用r和95%i确定yp1a1*2a多态性与乳腺癌发病的相对危险度。2结果2.1酶切和测序结果经电泳后，于凝胶成像系统摄影记录，以直接计数法分别统计两组各基因型的个数。经聚合酶链反响限制性片段长度多态性pr-rflp技术挑选出野生型和纯合突变型pr的扩增产物各1例，由北京利嘉生物公司测序，见图1。2.2群体代表性检验两组研究对象y

10、p1a1*2a基因型分布，经2检验，p0.05,符合hardy-einberg平衡，说明研究对象来自同一群体，具有较好的代表性。2.3yp1a1*2a基因多态性分布情况3讨论yp1a1由yp1a1基因编码,该基因位于染色体15q2224，含7个外显子和6个内含子，目前已发现4个重要的多态性位点。其中等位基因yp1a1*2a，位于yp1a1基因3端非翻译区，由3801t多聚a位点下游约264bp突变所引起。除野生型纯合子tt，突变型杂合子t和突变型纯合子均具有sp识别的酶切位点。3种基因型在不同人群中的分布表现出较大的差异。在亚洲人群基因型和基因型t频率分别是2%18%和32%55%，而在欧洲和

11、美洲白种人群两种基因型的频率那么分别是05%和9%28%4。环境致癌物如多环芳烃(pahs)5通过胞浆内芳烃受体(ahr)介导而高度诱导yp1a1表达。前致癌物与受体结合后，ahr与hsp90解离，在芳烃受体核转运蛋白(ahreeptrnuleartranslatr，arnt)协助下进入细胞核内，ahr/arnt复合物迅速结合于yp1a1的5区的外源物反响元件(xenvitirespnsiveeleents,xre)上，通过强有力的转录激活构造域激活yp1a1基因的表达。yp1a1可催化多环芳烃等环境致癌物的羟基化等反响，所形成的亲电子的中间代谢产物可与dna共价结合,形成dna与致癌物的加合

12、物,引起癌基因与抑癌基因的突变，启动致癌或诱变过程。本研究结果显示yp1a1*2a多态位点的基因型分布和等位基因频率分布在乳腺癌组与对照组之间无显著性差异。但突变等位基因使患乳腺癌的危险度增加了1.34倍；突变基因型与野生型tt相比，患乳腺癌的危险度增加了1.86倍，说明yp1a1*2a多态性与乳腺癌易感性可能有关，突变基因型可能通过上述的机制增加了环境毒素的毒性作用，为乳腺癌发生的原因之一。目前国外对该基因多态性与乳腺癌的相关性研究较多，但结果不相一致。自从taili等31995年报道了yp1a1*2a多态位点与美国黑人女性乳腺癌的危险有显著关联以来，相继有近10项研究报道了该位点与乳腺癌危

13、险的关系，在早期的研究中倾向于该位点与一些特殊人群如黑人女性、绝经妇女的乳腺癌发病关联，r值在29左右，且有统计学意义，但当时研究样本较小(n200)。20世纪90年代末期美国学者bailey6和ishibe7在两项大型的乳腺癌病例对照研究中未发现yp1a1*2a与乳腺癌关联。令众多学者困惑的是，后来在日本大阪8、德国和奥地利9的2项研究认为yp1a1*2a杂合子和纯合子反而对乳腺癌有保护作用，r为0.60.7左右，并且有统计学意义。结合本研究结果分析，提示yp1a1*2a基因多态性其突变纯合子和杂合子有增加乳腺癌风险的趋势，但未到达显著程度。因此yp1a1*2a多态性在散发性乳腺癌发生、开展

14、中的机制还有待进一步研究。只有在广泛考虑到遗传异质性作用、环境因素影响以及种族群体差异的根底上进一步扩大样本，并结合其它连锁分析方法，才能真正确定yp1a1基因多态性与乳腺癌发生的内在联络。【参考文献】1hendersni.riskfatrsfrbreastanerdevelpentj.aner,1993,71(6suppl):2127-2140.2reehk,ntleyl,unshr,etal.etablisftaxifenbyrebinanthuanythrep450enzyes:fratinfthe4-hydrxy,4-hydrxyandn-desethyletablitesandise

15、rizatinftrans-4-hydrxytaxifenj.drugetabdisps,2002,30(8):869-874.3tailie,trahanj,henx,etal.ayp1a1restritinfragentlengthplyrphisisassiatedithbreastanerinafrian-aerianenj.anerres,1995,55(17):3757-3758.4assnlf,sharpl,ttns,etal.ythrep4501a1geneplyrphissandriskfbreastaner:ahugereviej.ajepideil,2022,161(10):901-915.5alexandieak,arhl,arstensenu,etal.yp1a1andgst1plyrphissaffeturinary1-hydrxypyrenelevelsafterpahexpsurej.aringenesis,2000,21(4):669-676.6baileylr,rdin,verriers,etal.breasta