临床免疫学检验：第11章 固相膜免疫分析技术

1、第十一章 固相膜免疫分析技术(Chapter 11 Solid Phase Membrane-based Immunoassay)临床免疫学检验 固相膜免疫分析技术：是以微孔膜作为固相载体，利用液体可以流过微孔膜也可以通过毛细管作用在膜上向前移行的特性，以酶标记或各种有色微粒子标记抗体或抗原作为标记物，通过抗原抗体反应进行抗原或抗体检测的快速检验方法。第十一章 固相膜免疫分析技术不需大型设备；易掌握操作要求和判定标准；家庭式保健检测和床旁检测。 固相膜免疫分析技术：是以微孔膜作为固相载体，利用液体可以流过微孔膜也可以通过毛细管作用在膜上向前移行的特性，以酶标记或各种有色微粒子标记抗体或抗原作为

2、标记物，通过抗原抗体反应进行抗原或抗体检测的快速检验方法。第十一章 固相膜免疫分析技术胶体金免疫技术；斑点酶免疫吸附试验；免疫印迹试验。第一节 胶体金免疫技术(Section 1 Colloidal Gold Immunoassay) 胶体金免疫技术：是以胶体金作为示踪标记物或显色剂，应用于抗原抗体反应的一种标记免疫检测技术。 胶体金：由金盐还原而得，胶体金颗粒由一个基础金核（原子金Au）及包围在外的双离子层（内层为负离子层AuCl2-，外层是带正电荷的H+）构成。由于静电作用，金颗粒之间互相排斥而悬浮成为一种带负点的稳定疏水胶体。第一节 胶体金免疫技术胶体金的性质颗粒大小多在1100nm，稳

3、定，均匀，单一分散状悬浮；对电解质敏感；大小不同，呈色不同。 胶体金粒径 1枸橼酸三钠 胶体金特性 （nm） 加入量（ml）* 呈色 max 16 2.00 酒红色 518nm 24.5 1.50 橙红色 522nm 41 1.00 红色 525nm 71.5 0.70 紫红 535nm*还原100ml 0.01HAuCl4所需量 第一节 胶体金免疫技术胶体金的性质免疫金 免疫金：是指胶体金与抗原或抗体等大分子物质的结合物。一般认为是胶体金颗粒表面的负电荷与蛋白质表面带正电荷的基团借静电吸附而形成牢固的结合。第一节 胶体金免疫技术 以硝酸纤维素膜为载体，并包被了抗原或抗体的渗滤装置中，依次滴加

4、标本、免疫金及洗涤液。因微孔滤膜贴置于吸水材料上，故溶液流经渗滤装置时与膜上的抗原或抗体快速结合并起到浓缩作用，达到快速检测的目的（5min）。一、斑点金免疫渗滤试验（一）原理第一节 胶体金免疫技术一、斑点金免疫渗滤试验（二）方法类型双抗体夹心法；间接法（少用）。第一节 胶体金免疫技术（三）操作要点操作示意图装置分解图盖微孔膜吸水垫料底加标本、免疫金、洗涤液一、斑点金免疫渗滤试验第一节 胶体金免疫技术 是将胶体金标记技术和蛋白质层析技术相结合的以硝酸纤维素膜为载体的快速的固相膜免疫分析技术。滴加在膜一端的标本溶液受到载体膜的毛细管作用向另一端移动，被分析物与固定于载体膜上某一区域的抗体或抗原结

5、合而被固相化，无关物则越过该区域而被分离，然后通过胶体金的呈色条带来判读实验结果。二、斑点金免疫层析试验（一）原理GTC第一节 胶体金免疫技术（二）方法双抗体夹心法竞争法间接法 （少用）二、斑点金免疫层析试验第一节 胶体金免疫技术G区：金标抗体C区：抗金标抗体T区：包被抗体 吸水纸标本AB二、斑点金免疫层析试验第一节 胶体金免疫技术标本G区：金标抗体C区：抗金标抗体T区：包被标准抗原 吸水纸阳性结果AB二、斑点金免疫层析试验第一节 胶体金免疫技术标本G区：金标抗体C区：包被抗抗体T区：标准抗原 吸水纸阴性结果AB二、斑点金免疫层析试验第一节 胶体金免疫技术（三）操作要点试剂条标记线一端加入标本

6、；一条棕红线、两条棕红线、无棕红色线。二、斑点金免疫层析试验第一节 胶体金免疫技术三、临床应用及评价方法简便、快速、无需特殊仪器设备，试剂稳定；该技术不能准确定量，只能作为定性试验；本法灵敏度不及酶免疫测定。第一节 胶体金免疫技术第二节 其他膜载体免疫分析技术(Section 2 Other Solid Phase Membrane-based Immunoassay)一、斑点酶免疫吸附试验（Dot-ELISA）（一）原理（二）技术要点抗原包被NC膜后，需封闭；抗原抗体反应，先加待测抗体，洗涤后再加酶标二抗；显色：染色斑点。第二节 其他膜载体免疫分析技术一、斑点酶免疫吸附试验（Dot-ELISA）（三）方法学评价NC膜吸附力强，微量抗原吸附完全，灵敏度高；试剂用量节约；操作简单，不需特殊设备；-20可长期保存。第二节 其他膜载体免疫分析技术一、斑点酶免疫吸附试验（Dot-ELISA）二、免疫印迹试验（IBT） 是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的技术，具有分析容量大、敏感性高、特异性强等优