临床免疫学检验：第8章 酶免疫技术

1、第八章 酶免疫技术(Chapter 8 Immunoenzyme Technique) 酶免疫技术：是将酶高效催化反应的专一性和抗原抗体反应的特异性相结合的一种免疫标记检测技术。第八章 酶免疫技术(Chapter 8 Immunoenzyme Technique) 利用酶标记抗原或抗体作为主要试剂，检测样品中相应的抗体或抗原，既具有抗原抗体反应的特异性，又具有酶促催化反应的敏感性，是免疫反应和酶的催化放大作用相结合的技术。 酶免疫技术：是将酶高效催化反应的专一性和抗原抗体反应的特异性相结合的一种免疫标记检测技术。第八章 酶免疫技术(Chapter 8 Immunoenzyme Techniqu

2、e)灵敏度高特异性强准确性好操作简便酶标试剂能较长时间保存对环境无污染1辣根过氧化物酶（HRP）第八章 酶免疫技术(Chapter 8 Immunoenzyme Technique)常用的酶邻苯二胺（OPD）反应液显橙黄色，硫酸终止反应后呈棕黄色。最大吸收峰波长为492nm。应用最早，但不稳定，易变色，具有致癌性。1辣根过氧化物酶（HRP）第八章 酶免疫技术(Chapter 8 Immunoenzyme Technique)常用的酶四甲基联苯胺（TMB）反应液呈蓝色，硫酸终止反应后呈黄色。最大吸收峰波长为450nm。稳定性好、呈色过程无需避光、无致癌性。2碱性磷酸酶（ALP）第八章 酶免疫技术

3、(Chapter 8 Immunoenzyme Technique)常用的酶对-硝基苯磷酸酯（p-NPP）磷酸盐缓冲液对ALP有抑制作用。难获得ALP高纯度制剂，稳定性差，价格高。反应液呈黄色，NaOH终止。最大波长为405nm。3-半乳糖苷酶（-Gal）第八章 酶免疫技术(Chapter 8 Immunoenzyme Technique)常用的酶4-甲基伞形酮-D半乳糖苷（4MUG）-Gal来源于大肠埃希菌，最适PH6.08.0。人缺乏此酶，不易受干扰，特异性强，常用于均相酶免疫测定。酶促反应后生成4-MU，灵敏度较HRP高3050倍。测量时需用荧光检测仪。第八章 酶免疫技术(Chapter

4、 8 Immunoenzyme Technique)基本原理和分类基本原理： 酶标抗体（抗原）与抗原（抗体）的特异性反应 酶对底物的显色反应 对抗原或抗体进行定性、定量或定位分析 Ab-E + Ag AgAb-E 加底物显色第八章 酶免疫技术(Chapter 8 Immunoenzyme Technique)基本原理和分类酶免疫技术酶免疫组化酶免疫测定均相 异相固相酶免疫测定液相酶免疫测定细胞或组织切片中抗原的定位分析 液体标本中抗原或抗体的定性和定量第八章 酶免疫技术均相酶免疫分析 均相酶免疫分析是利用酶标记物与相应的抗原或抗体结合后，标记酶的活性会发生改变的原理，可以在不将结合酶标记物和游

5、离酶标记物分离的情况下，通过测定标记酶活性的改变，从而确定抗原或抗体的含量。 主要用于小分子激素、药物等的测定，适于自动化测定。分为酶放大免疫分析技术、克隆酶供体免疫分析。第八章 酶免疫技术均相酶免疫分析一、酶放大免疫分析技术（EMIT）常用葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和溶菌酶第八章 酶免疫技术均相酶免疫分析二、克隆酶供体免疫分析（CEDIA）-D-半乳糖苷酶（2EA+2ED）酶供体酶受体第八章 酶免疫技术异相酶免疫分析 异相酶免疫分析是抗原抗体反应平衡后，采用适当的方法分离游离酶标记物和结合酶标记物，然后对底物的显色程度进行测定，再推算出样品中待测抗原（或抗体）的含量。 分为液相酶免疫分析和固相酶

6、免疫分析。第八章 酶免疫技术异相酶免疫分析一、液相酶免疫分析平衡法：待测抗原（或标准品）、酶标抗原、特异性抗体相继加入反应体系，温育，反应达平衡后，加入分离剂，离心沉淀后弃上清，测定沉淀物中酶活性。非平衡法：先将待测抗原（或标准品）、特异性抗体加入反应体系，反应达平衡后再加入酶标抗原继续反应。最后加入分离剂，离心沉淀后弃上清，测定沉淀物中酶活性。第八章 酶免疫技术异相酶免疫分析二、固相酶免疫分析利用固相载体预先吸附抗原或抗体，使测定时的免疫反应在其表面进行。这样只需经过洗涤即可分离IC。酶联免疫吸附试验第八章 酶免疫技术异相酶免疫分析二、固相酶免疫分析酶联免疫吸附试验1基本原理第八章 酶免疫技

7、术异相酶免疫分析二、固相酶免疫分析酶联免疫吸附试验2方法类型第八章 酶免疫技术+-第八章 酶免疫技术异相酶免疫分析二、固相酶免疫分析酶联免疫吸附试验2方法类型第八章 酶免疫技术异相酶免疫分析二、固相酶免疫分析酶联免疫吸附试验2方法类型竞争法第八章 酶免疫技术异相酶免疫分析二、固相酶免疫分析酶联免疫吸附试验2方法类型间接法第八章 酶免疫技术异相酶免疫分析二、固相酶免疫分析酶联免疫吸附试验2方法类型双抗原夹心法第八章 酶免疫技术异相酶免疫分析二、固相酶免疫分析酶联免疫吸附试验2方法类型ELISA在预防医学、临床医学的应用 病原体及其抗体 蛋白质 非肽类激素 药物 尿中毒品 在食品检测中的应用 微生物 毒素