临床免疫学检验：超敏反应及其检测

1、1 超敏反应及其检测 2概念超敏反应(Hypersensitivity)即变态反应（allergy）：是已致敏的机体再次受到相同抗原刺激后发生的一种以生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的异常免疫应答。由此引起的疾病为超敏反应性疾病。引起超敏反应的抗原物质称为变应原（Allergens）3分型I型 速发型超敏反应型 细胞溶解型或细胞毒型超敏反应型 免疫复合物型或血管炎型超敏反应型 迟发型超敏反应4Type hypersensitivity特点发生机制临床常见疾病免疫学检验5特点发作快、消退也快常引起生理功能紊乱，但无严重组织损伤由特异性IgE介导,无补体参与有明显个体差异和遗传素质主要病变为毛细血管

2、扩张、通透性增加、平滑肌收缩6发生机制 7肥大细胞脱颗粒 8临床常见疾病过敏性休克 药物过敏性休克、血清过敏性休克皮肤变态反应 皮肤寻麻疹、湿疹、血管性水肿消化道变态反应 恶心、呕吐、腹痛、腹泻呼吸道变态反应 支气管哮喘和变应性鼻炎9免疫学检验体内试验 皮肤试验（皮内、挑刺） 肥大细胞活性+IgE（肥大细胞结合的）体外试验 IgE测定（总IgE、特异性IgE）、吸入物变应原过筛试验 、相关细胞及其它因素测定 没有一种单一的试验能保证其结果的准确，体内和体外试验互为补充，以得到准确的特异性诊断。10皮肤试验皮内试验（intracutaneous test）: 是我国目前应用最广泛的一种试验方法。

3、将试验用变应原提取液和对照液各0.02ml分别用皮试针头注入皮内，使局部形成直径23mm的圆形皮丘。反应须观察1520分钟，根据风团、红晕大小判定结果。11皮肤点刺试验 将变应原和对照液分别滴于试验部位皮肤（前臂掌侧）用点刺针垂直刺入皮肤表层，以刺破皮肤而不出血为度。15分钟后观察结果。安全、易于操作、临床相关性好，推荐为最佳皮肤试验方法阳性反应：红晕 12I型超敏反应皮肤试验结果的判定标准反应程度 皮内试验 挑刺试验 无反应或小于对照 无反应或小于对照 + 风团35mm,红晕对照,20mm,无风团 + 风团1015mm,伴红晕 红晕伴风团 + 风团15mm,红晕伴伪足 红晕伴伪足和风团 13

4、皮试应用：寻找变应原预防药物或疫苗过敏评价：属于活体内试验，能反映机体各种因素综合作用的实际免疫状况。操作简便，结果可信度大注意：若已知对某种物质高度过敏，则不宜再做皮试；身体虚弱、哮喘发作期及不合作的儿童也不宜做皮试。皮试时应配备常规的抢救药品和设施。14血清IgE的检测总IgE测定方法：双抗体夹心法( ELISA、化学发光法等)影响总IgE水平的因素：年龄、性别、种族、寄生虫感染等总IgE水平高不一定是过敏过敏者总IgE水平不一定高15特异性IgE测定 特异性IgE（Specific IgE,sIgE）是指能与某种变应原特异性结合的IgE。需用纯化的变应原去检测相应的IgE抗体，是体外确定

5、变应原的重要方法。16方法放射性变应原吸附试验（radioallegosorbent test，RAST） 酶联免疫测定法 免疫印迹测定法CAP变应原检测系统（CAP system） 17RAST： 载体-过敏原+待检血清 Ag-IgE+同位素标记的抗人IgE固相放射性计数与标本IgE含量成正比 特异性强、敏感性高、影响因素少、对患者安全、与皮试和支气管激发试验的符合率高、有助于寻找过敏原ELISA：原理同RAST，标记物改为酶标记的抗人IgE。国内应用较多。18CAP system瑞典Pharmacia公司推出的一种根据RAST原理设计的新型全自动检测血清特异性IgE的荧光固相免疫检测系统。

6、 CAP是一个很小的塑料帽状物，内置纤维素粒（具有多孔性、弹性和亲水性 ）单价变应原CAP：只结合一种变应原多价变应原CAP：同时结合几种变应原19ImmunoCAP图28-3 CAP的外形20 变应原CAP+待测血清和IgE标准品 -半乳糖苷酶标记的抗人IgE 4-甲基伞形酮-半乳糖苷 荧光分光光度计读取吸光 值 荧光强度与sIgE呈线形关系 整个检测步骤，简便、快速，敏感性高，可信性强。 21嗜酸粒细胞阳离子蛋白（ECP）的测定方法同CAP system测定sIgE，不同的是CAP中包被的不是变应原，而是抗ECP抗体 ECP反映了嗜酸粒细胞激活的程度及其分泌毒性蛋白的能力，可作为监测气道炎

7、症、指导哮喘抗炎治疗的指标 22Type hypersensitivity &特点&发生机制&临床常见疾病&免疫学检验23特点抗体（主要为IgG或IgM类）与靶细胞表面抗原结合，在补体、吞噬细胞和NK细胞参与下，导致靶细胞损伤或破坏。 靶细胞表面抗原：同种异型抗原、共同抗原、变性的自身抗原、外来抗原。24发生机制 细胞膜固有抗原或吸附的抗原半抗原刺激机体产生抗体IgG或IgM抗体结合细胞表面抗原激活补体调理吞噬ADCC刺激或阻断作用溶解破坏靶细胞靶细胞功能紊乱2526临床常见疾病输血反应溶血性输血反应 ABO血型不符的输血非溶血性输血反应 反复输入含异型HLA血液 新生儿溶血症母胎Rh血型不符

8、 母胎ABO血型不符 免疫性血细胞减少症 药物过敏性血细胞减少症 自身免疫性溶血性贫血 抗肾小球基底膜型肾小球肾炎和风湿性心肌炎 自身免疫性甲亢 2728 2930II型超敏反应的免疫学检测Rh抗体的检测:酶介质法抗球蛋白检测: 直接Coombs试验:直接检测红细胞表面不完全抗体(检测红细胞是否已致敏) 间接Coombs试验:用已知不完全抗体检测红细胞上相应的抗原,或用已知抗原的红细胞检测受检血清中相应的不完全抗体.31 直接法Coombs试验RBC为Rh+7S的IgG体内发生+抗IgG体外测试抽血作用：检测红细胞表面结合的不完全抗体。临床意义：新生儿溶血症和自身免疫性溶血性贫血的诊断。32间

9、接法Coombs试验RBC为Rh+ 受检血清(不完全抗体?)+抗IgG作用：检测游离在血清中的不完全抗体。临床意义：输血前的交叉配血、不相溶输血后的抗体检测。检测母体 Rh（D）抗体有助于及早发现及避免新生儿溶血症。33Type hypersensitivity 特点发生机制临床常见疾病 免疫学检验34特点致敏诱发的抗体与细胞外游离抗原结合后，形成中等分子可溶性免疫复合物（immune complex,IC）沉积于全身或局部血管壁基底膜，激活补体，引起以中性粒细胞浸润为主的炎症反应和组织损伤。故此型又称为免疫复合物型或血管炎型超敏反应35发生机制 中性粒细胞浸润释放生物活性介质激活凝血系统释放

10、血管活性胺类中分子可溶性IC沉积于组织激活补体系统产生C3a、C5a、C3b嗜碱粒细胞、肥大细胞脱颗粒活化血小板血管内皮细胞间隙增大吞噬免疫复合物、释放溶酶体酶形成微血栓血管内皮细胞间隙增大血管通透性增加水肿组织炎性损伤局部缺血、出血水肿局部或全身免疫复合物病36临床常见疾病局部免疫复合物病 Arthus反应 人类局部过敏反应 全身免疫复合物病 血清病（serum sickness） 急性免疫复合物型肾小球肾炎 类风湿关节炎 系统性红斑狼疮 37免疫学检验循环免疫复合物的检测 组织固定免疫复合物的检测 免疫复合物检测的意义及应用 38循环免疫复合物的检测循环免疫复合物是指存在于血液中的IC 抗

11、原特异性检测技术：检测已知抗原与相应抗体形成的IC难以常规应用非抗原特异性检测技术：检测血清中IC的总量，并不考虑形成IC的抗原性质 39物理测定法（PEG比浊法 ）补体相关测定法（C1q固相法 ）抗球蛋白测定法（mRF固相抑制试验 ）细胞技术测定法（Raji细胞试验 ）40 41PEG法简便易行，敏感度20mg/LHAHG。但不能反映小分子IC的情况，结果易受多种大分子蛋白质的干扰及温度影响，故特异性和重复性较差；低密度脂蛋白高球蛋白血症和标本反复冻融也可引起浊度增加，应予注意。42C1q固相法 43C1q固相法敏感性高，达0.1 mg/LHAHG，重复性好C1q制品不易精制，且纯品不稳定尚

12、需注意的是，待检血清需先5630min处理，以灭活其中的补体和破坏已与CIC结合的C1q，空出补体结合点。44mRF固相抑制试验 固相mRF + 血清标本 同位素标记的热聚合IgG 固相中放射性与CIC的含量呈负相关本法敏感性较高，但mRF来源困难，操作费时，难于常规应用 45Raji细胞试验固相Raji细胞 + 标本 离心沉淀荧光标记抗人IgG或同位素标记抗人IgG 测沉淀细胞的放射活性方法简单、敏感性高、特异性强，但易受血清游离IgG影响，且Raji细胞 培养较困难。46Type hypersensitivity 特点 发生机制 临床常见疾病 免疫学检验47特点由致敏T细胞再次接触相应抗原后所致的以单个核细胞浸润为主的炎症反应。反应发生迟缓，一般在4872小时反应才达高峰，无抗体、补体参与，过程同细胞免疫应答。细胞免疫缺陷者或无胸腺的裸鼠不会发生该型变态反应。48发生机制抗原机体致敏淋巴细胞TDTHCTL单个核细胞浸润为主的炎症反应清除抗原损伤自身细胞免疫迟发型超敏反应