HPLC法测定安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量

1、HPLC法测定安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量【摘要】目的建立安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量测定方法。方法采用氨基柱，以乙腈-水体积比7822为流动相，检测波长是202n，流速是1Lin-1，柱温是30。结果盐酸水苏碱在5.62528.125g内有良好的线性关系，r0.9992，回收率为100.3，RSD为2.4。结论本法专属性强，准确、简便，可为安坤益母草片的质量标准提供根据。【关键词】安坤益母草片；高效液相色谱法；盐酸水苏碱安坤益母草片是由作者经由安坤益母草膏改剂型而得，由益母草、川芎、白芍、地黄、当归等药材组成。具有养经调血、化淤生新的成效，临床上主要用于血淤气滞引起的月经不调、行经腹痛、

2、量少色暗、产后淤血不净等症，获得满意效果。益母草是方中君药，盐酸水苏碱是有效成分之一，其测定方法有雷氏盐沉淀溶解比色法1、紫外分光光度法2、薄层扫描法3、HPL法4等。为更好地控制制剂质量，确保临床疗效，本文采用HPL法测定盐酸水苏碱的含量，结果说明方法专属性强、精细度高、别离度好，可用于控制安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量测定。1仪器与试药ATERS2695-2996型高效液相色谱仪美国。安坤益母草片自制；盐酸水苏碱对照品批号：712-9903，中国药品生物制品检定所；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：氨基柱2504.6,5，大连依利特公司；流动相：乙腈

3、-水体积比7822；流速：1Lin-1；检测波长：202n；柱温：30；进样量：15L。在此条件下，供试品中盐酸水苏碱峰能到达基线别离，理论板数按盐酸水苏碱峰计应不低于4000，别离度均是3.6。见图13。图1盐酸水苏碱对照品HPL图谱略Fig.1HPLhratgrafstahydrinehydrhlride图2安坤益母草片HPL图谱略Fig.2HPLhratgrafAnkuntherrttablets图3安坤益母草空白片HPL图谱略Fig.3HPLhratgrafblankntrlfAnkuntherrttablets2.2溶液的配制2.2.1对照品溶液的制备精细称取盐酸水苏碱对照品11.2

4、5g置10L量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，得到1.125g/L的盐酸水苏碱对照品溶液。2.2.2供试品溶液的制备取本品5片0.25g/片，除去薄膜衣，研细，精细称取0.25g，置具塞锥形瓶中，精细参加20L乙醇，超声处理30in，滤过，滤渣及容器用20L乙醇分次洗涤，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加乙醇溶解并转移至10L的量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，离心5000r/in，5in，取上清液作为供试品溶液。2.2.3盐酸水苏碱空白供试液的制备按处方称取除益母草外的药材提取，取处方比例辅料，按安坤益母草片制备工艺制得安坤益母草空白片，再按“2.2.2项下制备方法制得空白对照供试液。转贴于论文联

5、盟.ll.2.3标准曲线的制备精细量取盐酸水苏碱对照品溶液(1.125g/L)5、7、10、15、20、25L注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定盐酸水苏碱色谱峰面积，以盐酸水苏碱微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进展线性回归，得回归方程：y=5.89104x-1.52104(r=0.9992)，线性范围：5.62528.125g。2.4干扰试验按“2.1色谱条件，取盐酸水苏碱对照品溶液、供试品溶液、空白供试液，分别注入液相色谱仪，结果说明供试品色谱在与对照品色谱相应位置上，有一一样的色谱峰，而空白供试液在此保存时间内不出峰，说明其他成分对测定盐酸水苏碱无干扰。2.5精细度试验取对照品溶液(

6、1.125g/L)15L，重复进样6次，记录盐酸水苏碱的峰面积。结果盐酸水苏碱峰面积RSD0.8。2.6稳定性试验取上述供试品溶液15L，分别在0、2、4、8、16、24h进样，记录盐酸水苏碱的峰面积，结果盐酸水苏碱峰面积的RSD=1.2%(n=6),说明供试品溶液在制备后24h内测定根本稳定。2.7重复性试验取同一批安坤益母草片(批号:20220412)6份,按“2.2.2项方法处理样品并测定盐酸水苏碱峰面积,计算盐酸水苏碱含量，结果RSD=1.7%，说明此方法测定盐酸水苏碱含量重复性好。2.8加样回收试验精细称取含量的样品(批号20220406，盐酸水苏碱含量10.8g/片)6份，每份取样

7、量为供试品取样量0.25g/片的50，按“2.2.2项方法操作，以当前取样含量的11，分别精细参加盐酸水苏碱对照品溶液1.08g/L5L，制备加样回收供试品溶液，按含量测定条件测定，计算回收率，结果见表1。表1盐酸水苏碱回收率试验结果(n=6)略Tab.1ReveryfStahydrineHydrhlride2.9样品测定取5批批号20220510、20220513、20220520、20220517、2022051910个样品，按“2.2.2项方法制备供试品溶液，进样测定。结果安坤益母草片盐酸水苏碱平均含量是10.33g/片。3讨论盐酸水苏碱构造中既含有碱性的NH4+，又含有酸性的H-，分子

8、量小，极性大，在常规的18柱中难保存5。以常规的生物碱分析方法很难将盐酸水苏碱别离，最后参考文献6改用氨基柱，以乙腈-水体积比7822为流动相，在此条件下，盐酸水苏碱不仅能得到较好的保存，而且与其他峰完全别离，别离度到达要求。【参考文献】1徐履琴.用硫代氰酸铬铵剩余比色法测定益母草中生物碱J.中草药,1985,(11):7-8.2卢日刚.分光光度法测定益母草冲剂中生物碱的含量J.药学学报，1986,21(9):522-524.3周世玉，徐智明.薄层扫描法测定益母草膏中盐酸水苏碱的含量J.华西药学杂志,1999,14(5-6):395-396.4杨雪萍，何召允.HPL法测定安宫止血颗粒中盐酸水苏碱的含量J.江西中医药，2022，382：51.5