创伤性休克兔复苏后肾功能的变化及亚甲蓝的影响通

1、创伤性休克兔复苏后肾功能的变化及亚甲蓝的影响通【摘要】目的研究亚甲蓝(ethyleneblue，B)对创伤性休克兔肾脏的保护作用及其可能机制。方法选用安康日本长耳大白兔18只，随机分为对照组(N组)、生理盐水复苏组(NS组)、B处理组(B组)，每组6只。NS组及B组观察休克前(T1)、休克末(T2)、复苏末(T3)及复苏后2h(T4)、4h(T5)、6h(T6)、8h(T7)时间点平均动脉压(AP)的动态变化，测定各时间点血浆尿素氮(BUN)、肌酐(r)程度。观察各组兔肾组织光镜下病理形态学变化。结果NS组复苏末及复苏后各时间点AP均未到达根底值程度(P0.05);复苏末及复苏后各时间点AP与

2、N组比拟差异有统计学意义(P0.05);复苏后2h、6h、8h的AP与B组比拟差异有统计学意义(P0.05)。B组休克末及复苏后2hAP与根底值比拟差异有统计学意义(P0.05)，与N组比拟差异有统计学意义(P0.05)。兔创伤性休克复苏后各时间点NS组、B组BUN、r程度较N组升高(P0.05)，但B组BUN、r程度较NS组明显降低(P0.05)。光镜下NS组和B组肾脏可见细微的病理改变，但两组之间无明显差异，较对照组亦无明显改变。结论创伤性休克可致兔肾功能损害，B能显著改善休克后兔血流动力学、肾功能，保护肾脏组织。【关键词】创伤性休克;亚甲蓝;尿素氮;肌酐;平均动脉压Abstrat：bje

3、tiveTstudytheprtetiveeffetfethyleneblue(B)nthekidneysinrabbitsithtrauatishkandtheptentialehanis.ethds18Japaneserabbitsererandizedint3grups(n=6eah):ntrlgrup(Ngrup),resusitatinithnralsalinegrup(NSgrup)andethylenebluegrup(Bgrup).InNSgrupandBgrup,thedynaivariatinsfeanarterialpressure(AP)atdifferenttiepi

4、ntsasrerded,i.e.,befreshk(T1),attheendfshk(T2),attheendfresusitatin(T3),2h(T4),4h(T5),6h(T6)and8h(T7)afterresusitatin,andthelevelfbldureanitrgen(BUN)andreatinine(r)intheplasaateahtiepintsasdeterined.Tissuesaplesfthekidneybtainedfrexperientserebservedfrpathrphlgialhangesunderthelightirspe.ResultsInNS

5、grup,theAPlevelattheendfresusitatinandateahtiepintafterresusitatindidntreahthebasalvalue(P0.05);andtheAPlevelatthesetiepintshadsignifiantstatistialdiffereneasparetNgrup(P0.05);theAPlevelsatT4,T6andT7hadsignifiantstatistialdifferenevs.Pgrup(P0.05).InBgrup,theAPlevelatT2andT4hadstatistialdifferenevs.t

6、hebasalvalue(P0.05)andvs.Ngrup(P0.05).IntheNSandBgrups,thelevelfplasaBUNandrarkedlyinreased,parediththatinNgrup(P0.05),hilethelevelfBUNandrasbviuslylerinBgrupthanthatinNSgrup(P0.05).LightirspyrevealedslightpathlgialhangesinkidneytissuesinNSandBgrups,butthediffereneserentsignifiantbeteenNSandBgrupsan

7、dangthe3grups.nlusinThekidneyfuntinfrabbitsuldbevulnerablettrauatishk.Banntablyaeliratethehedynaisandfuntinfthekidneyinrabbitsithtrauatishkandprtettherenaltissues.Keyrds:trauatishk;ethyleneblue;bldureanitrgen;reatinine;eanarterialpressure创伤性休克是临床上常见的休克类型，是导致多器官功能障碍综合征(DS)的重要原因之一。低血压休克致肾脏血管收缩，血流减少，持续

8、的低血压会使细胞能量减少，尿液不能浓缩，导致肾小管上皮坏死和肾功能衰竭1。本实验采用Lasns法建立创伤性休克动物模型，观察创伤性休克兔复苏后及亚甲蓝(ethyleneblue,B)干预后血流动力学、血浆尿素氮(BUN)及肌酐(r)程度的变化，讨论B对创伤性休克肾损伤的保护作用，为临床应用B治疗创伤性休克肾损伤提供动物实验根据。1材料和方法1.2主要试剂和仪器亚甲蓝(江苏济川制药)，低温离心机(TGL-16G型，日本SANY公司)，BL420E+生物机能实验系统(成都泰能仪器)，BUN、r试剂盒(南京建成生物工程研究所)。1.3模型制作及复苏方法采用Lasns法建立创伤性休克动物模型。3%戊巴

9、比妥钠溶液30g/kg经耳缘静脉注射麻醉后，将兔仰卧并固定于兔台，行右侧颈动脉、股动脉插管术，经耳缘静脉注射肝素(6g/kg)将兔全身肝素化，股动脉导管接换能器与BL420E+生物机能实验系统连接，监测平均动脉压(AP);颈动脉插管用于放血和采取血液标本。上述手术完成后，用3kg铁锤在0.5高处垂直下落，击打兔股骨中段，致粉碎性骨折;再经右颈动脉快速放血(约10in)使AP降至3545Hg(1Hg=0.133kPa)，并维持90in。然后，NS组经耳缘静脉回输全部失血及等量生理盐水;B组回输全部失血及等量生理盐水，并加B(3g/kg)进展复苏，复苏时间约需30in。N组动物仅做颈动脉、股动脉插

10、管及全身肝素化，未行击打及放血。1.4观察指标NS组及B组分别在休克前(T1)、休克末(T2)、复苏末(T3)及复苏后2h(T4)、4h(T5)、6h(T6)和8h(T7)等时间点测定AP，并采集血液标本备测血浆BUN、r浓度。N组在各对应时间点同步测定AP并采血。实验完毕后，放血处死动物，开腹取右肾，4%多聚甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片，脱蜡，H-E染色，光镜观察形态学变化。1.5血浆BUN、r程度的测定经颈动脉于各时间点采血2l，4低温3000r/in离心15in，取上清液置于-80冰箱冷藏。血浆BUN、r程度的测定严格按照试剂盒说明书进展操作。1.6统计学处理所有数据以s表示，采用SPS

11、S13.0软件进展统计学处理，多组间两两比拟采用单因素方差分析，Levene方差齐性检验，方差不齐采用秩和检验。P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1血流动力学变化3组动物AP根底值无明显差异;N组各时间点AP较根底值无明显变化。NS组复苏末及复苏后各时间点AP均未到达根底值程度(P0.05);复苏末及复苏后各时间点AP与N组比拟，差异有统计学意义(P0.05)，复苏后2h、6h、8h的AP与B组比拟差异有统计学意义(P0.05)。B组休克末及复苏后2hAP与根底值比拟差异有统计学意义(P0.05)，与N组比拟差异有统计学意义(P0.05)。见表1。表13组兔不同时间点AP程度的比拟(n=

12、6，s，Hg)与T1比拟：*P0.05;与N组比拟：#P0.05;与B组比拟：P0.05转贴于论文联盟.ll.2.2血浆BUN、r的变化3组动物血浆BUN、r根底值差异无统计学意义(P0.05)。兔创伤性休克后，NS组及B组各时间点的血浆BUN、r程度比休克前和N组均有显著升高，差异有统计学意义(P0.05)，但B组动物复苏后各时间点血浆BUN、r程度升高幅度明显低于NS组，差异有统计学意义(P0.05)。N组各时间点血浆BUN、r程度无明显变化，无统计学意义(P0.05)。见表2。表23组兔不同时间点血浆BUN和r程度的比拟(n=6，s)与T1比拟：*P0.05;与N组比拟：#P0.05;与

13、NS组比拟：P0.052.3肾组织病理学改变光镜下NS组和B组肾组织肾小球及肾小管构造大致正常，有细微的病理改变(图14)：NS组可见肾小球毛细血管扩张、充血，少量炎性细胞浸润或正常，B组可见肾小管上皮细胞正常或细微水肿。但两组之间无明显差异，较对照组(图5、6)亦无明显改变。3讨论本实验结果显示，兔创伤性休克复苏后，肾功能受到损害，予以B复苏后，能明显改善血流动力学，降低血浆BUN、r程度，保护肾脏组织。一氧化氮(N)是一种不稳定的小分子气体，近年来发现其同时是一种生物活性物质，存在于多种组织和细胞，尤其是血管平滑肌细胞、心肌细胞、内皮细胞、单核巨噬细胞，均能通过L-精氨酸(L-Arg)在一

14、氧化氮合酶(nitrixidesynthase，NS)作用下合成N。创伤性休克后机体生成的大量N主要是TNF-、IL-6、IL-8等细胞因子激活诱导型一氧化氮合酶(induiblenitrixidesynthase，iNS)的结果。iNS在创伤、休克、感染等病理情况下活性增加，合成大量N，参与对各脏器功能的损害。N的大量合成可引起血管扩张、低血压和血管对收缩剂的低反响2。在创伤失血性休克时，外周血N升高可直接作用于外周毛细血管平滑肌细胞，激活鸟苷酸环化酶，降低血管平滑肌内a2+的浓度，导致血管持续舒张，血压进展性降低3。创伤、内毒素、炎症介质和细胞因子刺激血管平滑肌和心肌细胞内的NS，异常合成

15、和释放大量N，N活化鸟苷酸环化酶(G)，增加细胞内3,5-环单磷酸鸟苷(GP)，开放钾钙通道，使大量钙离子外流，血管平滑肌和心肌收缩乏力，血管舒张，血压下降，心肌舒缩功能受到抑制，作功才能降低。B是一种鸟苷酸环化酶抑制药，可阻断N的后续作用。B通过氧化G活化起关键作用的亚铁血红蛋白和(或)巯醇，选择性强抑制G，阻断GP的升高和钙离子的外流，逆转血管平滑肌和心肌细胞的舒张，增加血管阻力，升高血压，增强心室作功4。国外研究发现5-6，感染性休克后，单剂注入中小剂量(110gkg-1)的B，明显改善感染性及失血性休克引起的血流动力学紊乱，改善心肌功能和呼吸功能。王厚清等7-8前期的研究发现，B能改善

16、创伤性休克兔血流动力学，降低血浆N程度。国内亦有临床报道，B能改善感染性休克患儿血流动力学方面异常，进步感染性休克治愈率9。N已经成为了脓毒性休克发病机制中一个重要的致病因素，肾脏N的产生与患者全身性炎症对近端小管的损伤有关10。Heeskerk等11发现，对脓毒性休克患者，予以持续静脉注射B1g/(kgh)，能减少N代谢产物和肾小管损伤标记物的尿排泄。其中，N代谢物较根底值减少了75%90%，肾小管损伤标记物细胞溶质谷胱甘肽S-转移酶A1-1和P1-1的尿排泄分别较根底值减少了45%和70%。在第1个24h，肌酐去除率较根底值改善了51%。但是，在B注射完毕后，以上指标均有不同程度的上升。B

17、对肾脏的保护作用机制如下：稳定血流动力学，进步组织灌注压，改善组织氧合，从而保护肾脏功能;降低血浆N程度;去除氧自由基，减少致炎细胞因子的合成与释放。另外，在实验中我们观察到，对创伤性休克兔给予B复苏后，所有NS组兔均有排尿现象出现，而生理盐水组复苏后那么一直无尿，考虑与B改善血流动力学，进步肾小球滤过率有关。本研究中虽然NS组和B组肾脏组织病理学有一些细微的改变，但较对照组变化不明显，考虑与兔肾脏对缺血的耐受性较强有关。创伤性休克是许多因素亲密联络、互相影响、综合作用的复杂病理生理过程，B作为一种价廉、易得且有多位点作用的药物，对创伤性休克兔复苏后肾功能的变化有一定影响，但其确切作用机制尚需

18、进一步研究。【参考文献】1吴崇天.创伤性休克J.中华麻醉学杂志,2002,22(7):444-446.2KuhlSJ,RsenH.Nitrixideandseptishk.FrbenhtbedsideJ.estJed，1998，168(3):176-181.3王占科,王白岚，陈自力，等.创伤失血性休克患者血清一氧化氮程度变化及其临床意义研究J.急诊医学,2000,9(6):382-384.4刘少华,许戟,徐鑫荣.亚甲蓝对感染性休克犬血液动力学和氧合功能的影响J.江苏医药,2022,29(2):110-112.5EvgenvV,SvEinbjrnssnB,BjertnaesLJ.ntinuuslyinfusedethylenebluedulatestheearlyardipulnaryrespnsetendtxininaakesheepJ.AtaAnaesthesilSand，2001，45(10):1246-1254.6EIngartnerR,liveiraE,liveiraES,etal.Blkadeftheatinfnitrixideinhuanseptishkinreasessysteivasularresista