前体脂质体型猪肺表面活性物质对整肺灌洗兔呼吸窘迫模型的治疗作

1、前体脂质体型猪肺外表活性物质对整肺灌洗兔呼吸窘迫模型的治疗作【摘要】目的：观察前体脂质体型猪肺外表活性物质PPPS对整肺灌洗兔呼吸窘迫模型的治疗作用。方法：将PPPS水化后，经气管滴入治疗整肺灌洗型成年兔呼吸窘迫模型，观察兔的生命体征、血气、动态肺顺应性等指标的变化。结果：整肺灌洗后模型兔的血气pH、Pa2急剧下降，Pa2轻度上升，心率明显减慢而呼吸频率增加，SBP和DBP均明显下降；支气管肺泡灌洗液中PS含量明显下降；病理检查提示出现肺出血、肺不张、肺泡萎缩、透明膜形成等病变，符合型重症呼吸衰竭临床诊断标准。经气管滴入PPPS后，可以使RDS模型兔的各项指标pH、Pa2、Pa2、HR、BR、

2、SBP、DBP明显改善，肺部的病理改变也明显减轻。统计学分析结果提示，治疗组和对照组pHF=4.572，P=0.046、Pa2(F=557.586，P=0.000)、Pa2F=96.798，P=0.000、TVF=117.851，P=0.000、ydnF=276.996，P=0.000、HRF=34.975，P=0.000、BRF=28.167，P=0.000、SBPF=124.751，P=0.000和DBPF=108.672，P=0.000比拟差异均有统计学意义；在治疗组中，各个时间点的pH、Pa2、Pa2、TV、ydn、HR、BR、SBP和DBP比拟差异均有统计学意义。结论：PPPS对实验

3、性PS缺乏和肺损伤造成的呼吸窘迫有显著的治疗作用。【关键词】肺外表活性物质；前体脂质体；呼吸窘迫综合症Abstratbjetive:Tbserveadultrabbitsithauterespiratrydistresssyndre(ARDS)treatedbytheprlipsesfpigpulnarysurfatant(PPPS).ethds:PPPSasinstilledintratraheally.Thentrlgrupasgivensalinenly.Results:Thefllingphenenaerebserved:thePh,Pa2fthedelrabbitsdesendeds

4、harply,thePa2inreasedlightly,theHRsleddnbviusly,buttheBRinreased,theSBPandDBPfthedelrabbitsdesendedarkedly,andthePSntentdereaseddraatially.Thepneunipathlgyhangesshedpneurrhagia,ateletasis,shrinkfalvelusandpulnaryhyalineebrane.TheabveresultsindiatedthatitardediththestandardfI-typefauterespiratrydistr

5、esssyndre(ARDS).AfterthePPPSasappliedtthedelrabbits,eahindexnearlyreahedthenrallevel,andpneunipathlgyhangeserealsalleviateddistintly.TheanalytiresultfstatistisindiatedthatthereasstatistialsignifianeinpH(F=4.572,P=0.046),Pa2(F=557.586,P=0.000),Pa2(F=96.798,P=0.000),TV(F=117.851,P=0.000),ydn(F=276.996

6、,P=0.000),HR(F=34.975,P=0.000),BR(F=28.167,P=0.000),SBP(F=124.751,P=0.000),DBP(F=108.672,P=0.000)beteenthentrlgrupandthetreatedgrup.ThisshsPPPShasagreattreatenteffetnthedelftherespiratrydisdresssyndreinvivlung-lavagedrabbits.nlusins:PPPShasagreaturativeeffetnthedelftherespiratrydistresssyndreinvivlu

7、ng-lavagedrabbits.KeyrdsPulnarysurfatant;Prlipses;Respiratrydistresssyndre肺外表活性物质Pulnarysurfatant，PS的缺乏可引起呼吸窘迫综合征，特别是早产儿的发病率和死亡率都很高。外源性肺外表活性物质的替代治疗已被证实是呼吸窘迫综合征最有效的治疗手段1，在其它肺部疾病的治疗中也具有潜在的应用价值2。本研究目的是理解实验室制备的前体脂质体型猪肺外表活性物质3对整肺灌洗兔呼吸窘迫模型的治疗作用。1材料和方法1.1前体脂质体型猪肺外表活性物质PPPS制剂为实验室自制，从新颖猪肺中提取粗品肺外表活性物质，通过SFE-2

8、的提纯后，用旋转蒸发仪将其制成颗粒状的前体脂质体，其化学成分、物理性质和体外活性方面已到达PS制剂的要求4，5。使用时加注射用水振荡混匀，使之形成等张的脂质体溶液。1.2整肺灌洗兔呼吸窘迫模型的建立6正常成年纯种日本大耳白兔20只，雌雄各半，体重2.650.31kg。固定四肢和头部。普鲁卡因部分麻醉左腹股沟部，别离暴露股动脉，右腹股沟部去毛，用新生儿血压袖带固定，针样监护电极插入胸前区规定位置皮下，接BS-830IKlifespe9型多功能生理监护仪。经耳缘静脉点滴321葡萄糖生理盐水1.4%碳酸氢钠液，输液泵控制输液速度20L/h。经喉镜气管插管，固定气管内导管，接hristina型呼吸机，

9、设定通气方式为PAP，压力为0.4kPa，Fi2在灌洗前为21，以后为60。按25L/kg体重从气管导管注入肺内37生理盐水，保持3040s后抽出，每隔5in1次，每只兔重复5次。每次灌洗前后用纯氧，以间歇正压通气方式，通气频率为40次/in，呼吸时间比为0.71.3，吸气峰压为3.0kPa，通气30s，再改为实验设定呼吸方式和参数。第一次灌洗后肌肉注射呋塞米2g/kg体重。1.3治疗方法1.3.1分组将灌洗兔随机分为两组，每组10只，各组间兔的体重和性别差异无统计学意义。治疗组第5次灌洗后给予PPPS剂量为100g5L/kg，对照组给一样体积的含5l/L氯化钙的生理盐水。1.3.2给药方法用

10、药前先加注射用水将PPPS水化成等张的脂质体溶液，分别稀释成含PS20g/L，于灌洗完毕5in后，经气管缓慢滴入肺内，均匀变动兔体位使之分布均匀。1.4观察指标灌洗前、灌洗后、给药后15in、2h分别记录各项指标。1.4.1取第1次和第5次灌洗液各1管，低速离心去除细胞杂物后，以氯仿-甲醇21萃取，定磷法自动分光光度计BEKANDU-65型测定灌洗液总磷脂含量。1.4.2各时点分别采取动脉血1L，密封置-4冰箱中保存。用NVA7型自动生化分析仪进展血气分析测定。1.4.3潮气量tidalvlue,TV和动态肺顺应性dynaipliane,dyn由呼吸机屏幕读出。dyn为VT除以吸气峰压与呼气末

11、正压差值所得的商。1.4.4生命体征、心率HR、呼吸频率BR、收缩压SBP和舒张压DBP均由监护仪读出。1.4.5给药后4h，静脉注射20乌拉坦致兔死亡后，立即剖胸取肺称重，作病理学观察。1.5统计分析采用SPSS11.0统计软件进展重复测量数据的方差分析，以0.05作为显著性差异的指标。2结果2.1灌洗液磷脂含量第1次和第5次灌洗液磷脂含量治疗组为171.2316.93g/L和16.711.62g/L；对照组为173.9618.09g/L和17.892.29g/L。统计学显示，同组两次含量差异均有统计学意义P0.01，同次两组间含量差异无统计学意义P0.05。2.2肺灌洗兔血气指标变化结果见

12、表1。灌洗后两组pH、Pa2均下降明显，Pa2上升，到达型重症呼吸衰竭临床诊断标准。开场治疗后，治疗组pH、Pa2均呈上升趋势，Pa2呈下降趋势；给药后，治疗组自第15in起开场恢复，第120in，pH、Pa2和Pa2均根本恢复好转。统计学显示，两组pHF=4.572，P=0.046、Pa2F=557.586，P=0.000)、Pa2F=96.798，P=0.000比拟差异均有统计学意义；在治疗组中，治疗后15in、120in时pH、Pa2、Pa2与灌洗后比拟差异均有统计学意义。表1实验期间肺灌洗兔血气变化略2.3肺灌洗兔肺功能指标变化结果见表2。灌洗后两组兔肺潮气量、动态肺顺应性均明显下降。

13、给药后，治疗组自第15in起开场恢复，第120in兔肺潮气量、动态肺顺应性均恢复好转。统计学显示，两组TVF=117.851，P=0.000、ydnF=276.996，P=0.000比拟差异均有统计学意义；在治疗组中，治疗后30in、120in时TV、ydn与灌洗后比拟差异均有统计学意义。表2实验期间肺灌洗兔肺功能变化略2.4肺灌洗兔呼吸频率和心率变化结果见表3。灌洗后两组心率明显减慢而呼吸频率均明显增加，生命体征严重异常，符合RDS模型要求。治疗组给药后至第15in，心率缓慢增加，但随后又缓慢下降；对照组灌洗后心率逐渐减慢。治疗组给药后呼吸频率逐渐减慢；对照组呼吸频率继续增加至治疗后15in

14、时间点后开场缓慢下降。统计学显示，两组间HRF=34.975，P=0.000、BRF=28.167，P=0.000比拟差异均有统计学意义P0.01；在治疗组中，治疗后15in、120in时HR、BR与灌洗后比拟差异均有统计学意义P0.01。2.5肺灌洗兔收缩压和舒张压的变化结果见表4。灌洗后两组的收缩压和舒张压均明显下降。给药后，治疗组SBP和DBP均缓慢上升；对照组SBP和DBP均缓慢下降。统计学显示，SBPF=124.751，P=0.000和DBPF=108.672，P=0.000，SBP和DBP的数值变化在治疗组和对照组之间差异均有统计学意义；在治疗组中，治疗后15in、120in时SB

15、P和DBP的数值与灌洗后的数值比拟差异均有统计学意义。表3实验期间肺灌洗兔呼吸与心率变化略表4实验期间肺灌洗兔血压变化略2.6两组肺湿重比拟对照组17.123.37g/kg体重，治疗组9.040.35g/kg体重，两组间比拟差异有统计学意义P0.01。2.7病理检查H-E染色结果见图1、图2、图3。对照组可见肺出血、肺不张、肺泡萎缩、肺透明膜形成，而治疗组肺改变相对较轻。图1正常兔肺组织HE染色40图2对照组兔肺组织HE染色40图3治疗组兔肺组织HE染色403讨论国外研究说明7，用整肺灌洗法建立ARDS模型较合适ARDS的PS改变后PS的替代治疗的研究。实验过程中，第1次和第5次灌洗液磷脂含量

16、结果，在治疗组和对照组之间、同组两次含量比拟差异均有统计学意义P0.01，同次两组间含量比拟差异无统计学意义P0.05。提示灌洗造成肺PS急剧减少程度在两组间相近。由肺灌洗兔的血气指标变化、肺功能指标变化、呼吸频率和心率变化、收缩压和舒张压的变化、病理检查等结果可见：灌洗后两组的pH、Pa2均下降明显，Pa2上升，到达型重症呼吸衰竭临床诊断标准；兔肺潮气量、动态肺顺应性均明显下降，呼吸功能极度损害；灌洗后两组的心率明显减慢而呼吸频率均明显增加，生命体征严重异常；灌洗后两组的收缩压和舒张压均明显下降。给药后，治疗组SBP和DBP均缓慢上升；对照组SBP和DBP均缓慢下降。统计学显示，两组pHF=

17、4.572，P=0.046、Pa2(F=557.586，P=0.000)、Pa2F=96.798，P=0.000、TVF=117.851，P=0.000、ydnF=276.996，P=0.000、HRF=34.975，P=0.000、BRF=28.167，P=0.000、SBPF=124.751，P=0.000和DBPF=108.672，P=0.000比拟差异均有统计学意义；在治疗组中，各个时间点的pH、Pa2、Pa2、TV、ydn、HR、BR、SBP和DBP比拟差异也均有统计学意义。病理检查对照组可见肺出血、肺不张、肺泡萎缩、透明膜形成，而治疗组肺改变相对较轻。因此，本实验用兔成功制备了ARDS模型；PPPS对此模型有显著的治疗作用。本实验所制模型已形成严重呼吸窘迫，其灌洗液磷脂成分的减少和病理检查说明其发病机制可能是PS系统急剧严重受损和肺损伤。【参考文献】1陈超.肺外表活性物质在新生儿肺部疾病中的应用J.中国实用儿科杂志,2022,18(11):652.2李正红.肺外表活性物质的研究进展J.新生儿科杂志,2022,18(1):42-44.3武荣,封志纯,杜江,等.前体脂质体型猪肺外表活性物质的制备和研究J.广东医学,2022,26(3):320-321.4武