《生物化学》课程教学大纲

1、生物化学（五）实验教学大纲课程代码：PHAR1008课程名称：生物化学（五） 英文名称：Experiment of Biochemistry and Molecular Biology （）实验室名称：苏州大学基础医学实验中心机能学实验课程学时：72实验学时：24一本课程实验教学目的与要求1、熟练掌握以下各项生物化学实验的基本操作技能各种常用玻璃仪器的洗涤和使用。滴管、吸量管、微量加样器、移液器的使用。各种离心机、分光光度计、紫外检测仪、PCR、层析系统、水浴箱、电泳仪等的使用。各种试剂的配制。2、掌握以下各项生化实验基本技术和基本原理蛋白质的颜色反应、比色分析法和紫外分光光度法测定蛋白质的含

2、量。血清-球蛋白提纯（盐析法、分子筛层析），醋纤膜电泳鉴定血清蛋白。聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化蛋白质，Western-blot鉴定蛋白质。琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白。DEAE-离子交换层析法分离血清蛋白质。各类常用生化指标的测定方法。酶促反应动力学有关方法（底物浓度、PH对反应速度的影响）。细胞核DNA、RNA的提取、纯化和鉴定。3、熟悉生物化学实验技术的有关理论分光光度法及比色分析法基本原理。离心理论。层析技术理论。电泳技术理论。核酸杂交、基因重组等部分分子生物学实验技术理论。生物大分子分离、纯化的一般实验设计相关理论 。实验误差、数据处理、有效数字相关理论。二、主要仪器设备及现有台套数7

3、22型分光光度计12台；水浴箱3台；电炉4台；试管及试管架2套/人；离心机10台；电泳仪2台；吸量管2套/人；层析缸70个；微量注射器10把；电泳槽8套三、实验课程内容和学时分配序号实验项目名称目的要求实验内容学时分配实验类型每组人数必开、选开1基本操作法掌握吸量管、离心机、分光光度计的使用。了解实验室基本操作和各项规章制度。正确使用吸量管、离心机、分光光度计。书写实验报告。4基础性2必开2酶的特异性和影响酶活性的因素加深对酶的化学本质的认识；了解温度、pH、无机离子对酶催化活性的影响。以唾液淀粉酶为例，通过不同的颜色反应来验证其在不同温度，pH值条件下，水解淀粉的活力大小，以及氯离子铜离子对

4、酶活力的提高和抑制作用。4基础性2必开3血糖定量掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理及方法利用5-羟甲基-a-呋喃甲醛(羟甲基糖醛)与邻甲苯胺缩合成蓝色的醛亚胺的呈色反应，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比, 绘制标准曲线并计算血样葡萄糖的含量。4基础性2选开4碱性磷酸酶Km值的测定掌握用双倒数作图法求酶的Km值。以碱性磷酸酶为例，掌握酶提取纯化的方法和技术。并测定不同浓度底物时酶的活性，再根据双倒数（Lineweaver-Burk二氏法）作图，计算其Km值。4基础性2选开5血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳定量测定了解电泳的一般原理、掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术。测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。使用醋酸纤

5、维素薄膜电泳法进行蛋白质的鉴定。并根据电泳图谱，使用洗脱法或光吸收扫描法测定各蛋白组分相对百分含量。4基础性2必开6蛋白质的分离提取、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western印迹了解蛋白质的提取，掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电法（SDS）测定蛋白质分子量及蛋白的鉴定方法。分离提取蛋白质，制作SDS-聚丙烯酰胺凝胶，应用Western印迹技术，分析经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离并转移到硝酸纤维素薄膜上的特定蛋白质成分。8综合性2选开7高密度脂蛋白中胆固醇含量测定通过高密度脂蛋白（HDL）中胆固醇含量的测定，深入了解高密度脂蛋白在脂类代谢中的作用。分离血清中的HDL， 用抽提液提取胆固醇。再用显

6、色液和浓硫酸与胆固醇作用生成紫红色化合物，与同样处理的标准液进行比色测其含量。4基础性2选开8Folin-酚试剂法测定蛋白质Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理和方法。利用蛋白质-铜络合物还原Folin试剂，生成深蓝色的化合物，且颜色深浅与蛋白质的含量成正比关系的关系，绘制标准曲线来测定样品蛋白质含量。4基础性选开9乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的分离掌握乳酸脱氢酶同工酶的分类，熟悉其显色原理，了解各种乳酸脱氢酶同工酶的主要组织部位及临床意义。提取大鼠脏器中乳酸脱氢酶，以琼脂糖凝胶为支持物进行电泳分离乳酸脱氢酶同工酶。4基础性2选开10氨基酸的薄层层析熟悉用层析技术分离不同物质的原理；掌握薄层

7、层析的基本操作方法。制备薄层板，并利用各种氨基酸结构和性质的不同，其在吸附剂表面的吸附能力的各异，分离氨基酸，并通过茚三酮反应显色作鉴别。4基础性2选开11细胞核的分离和纯化掌握细胞核的分离和纯化的一般原理和操作方法。使用离心技术，从新鲜大鼠肝细胞中分离细胞质和细胞核。4综合性2必开12核酸含量的测定了解测定DNA和RNA含量的原理和方法。通过分别测定细胞质和细胞核中两类核酸的含量，了解DNA和RNA在细胞中的分布。提取细胞质和细胞核水解液中的RNA和DNA，并绘制RNA和DNA的标准曲线，通过比色获得细胞质和细胞核水解液中的RNA和DNA的含量及比值。4综合性2必开13实验考试考查学生生化实

8、验基本操作技术和综合分析能力。4基础性1必开四、考核方式1、实验报告：包括实验名称、日期、目的、要求、原理、操作、结果、分析、讨论等。（1）目的要求、原理及操作，应简单扼要的叙述，但必须写清楚操作的关键环节；（2）一般实验要有结论，扼要简单的说明本次实验获得的结果；（3）实验数据结果，应归纳整理成各种图表（如标准曲线图、对照与实验组的比较表等）；（4）分析讨论是对实验方法、结果、异常现象的探讨和评论及对实验设计的认识、体会、建议，不是对结果的重述。（5）书写报告时应实事求是，字迹清楚、工整，杜绝抄袭。2、考核方式：实验课成绩占本课程总成绩的30%。由实验理论卷面成绩、实验操作技能考核及实验报告

9、成绩组成。对缺实验成绩者，本课程不予通过。五、实验教材、参考书1、教材：生物化学与分子生物学实验教程 、钱晖、周亚军 科学出版社、2004年8月2、参考书：（1）药立波主编. 医学分子生物学技术. 第一版. 人民卫生出版社, 2002.（2）钱小红, 贺福初主编. 蛋白质组学: 理论与方法. 第一版, 北京. 科学出版社，2003.（3）, 王武康, 王尉平主编. 生物化学与分子生物学实验教程. 第一版, 苏州. 苏州大学出版社, 2001.（4）王文霞主编, 临床生化检验技术. 第一版. 南京大学出版社, 1995.（5）姜泊主编, 分子生物学常用实验方法. 人民军医出版社, 1998.（6

10、）顾晓松主编, 分子生物学理论与技术. 北京科学技术出版社, 2002.（7）药立波主编, 分子生物学常用实验技术. 人民卫生出版社, 2002.（8）(美) J.萨母布鲁克, E.F.弗里奇, T.曼尼阿蒂斯著. 黄培堂等译. 分子克隆实验指南, 第三版. 科学出版社, 2002年.（9）卢圣栋主编. 现代分子生物学实验技术. 高等教育出版社, 1993年.（10）任邦哲主编. 生物化学与临床医学. 湖南科学技术出版社, 1993年.（11）李永明, 赵玉琪等编. 实用分子生物学方法手册. 第11版, 北京: 科学出版社, 2000.（12）黄如彬主编. 生物化学实验教程. 第2版, 北京: 世界图书出版社, 1998.（13）张龙翔等主编. 生化实验方法和技