突发重大传染性疾病快速诊断体系的建立与溯源技术的研究课件

1、突发重大传染性疾病快速诊断体系的建立与溯源技术的研究突发重大传染性疾病快速诊断体系的建立与溯源技术的研究突发重大传染性疾病快速诊断体系的建立与溯源技术的研究 卢亦愚突发重大传染性疾病快速诊断体系的建立与溯源技术的研究 近20年来一些新的传染病却不断地出现，同时一些已控制地传染病死灰复燃，人类与传染病的斗争形势依然十分严峻。 近20年来一些新的传染病却不年代 病 毒 名 称 所 致 疾 病 1973 轮状病毒（Rotavius） 婴儿腹泻1975 甲肝病毒（HAV） 甲型肝炎1975 细小病毒B19（Parvoirus） 慢性溶血性贫血，特发性再障1977 埃博拉病毒（Ebola Virus）

2、埃博拉出血热1977 汉坦病毒(Hantaan Virus) 肾综合征出血热1978 丁肝病毒（HDV）因子（类病毒） 丁型肝炎1980 人T细胞嗜淋巴病毒型（HTLV-） T细胞白血病1982 人T细胞嗜淋巴病毒型（HTLV-） 毛细胞白血病 1983 人免疫缺陷病毒（HIV） 艾滋病 1986 人疱疹病毒-6（HHV-6） 猝发玫瑰疹1988 戊肝病毒（HEV） 戊型肝炎新确认的20种病毒及其所致疾病年代 病 毒 名 称 年代 病 毒 名 称 所 致 疾 病 1989 丙肝病毒（HCV） 丙型肝炎1990 人疱疹病毒-7（HHV-7） 发热皮疹及中枢神经感染1991 瓜纳里托病毒（Guan

3、arito Virus） 委内瑞拉出血热1993 辛农布雷病毒（SNV） 成人呼吸窘迫综合征1994 马麻疹病毒（EMR） 无菌性脑膜炎，间质性肺炎1994 萨比亚病毒（Sabia Virus） 巴西出血热1995 人疱疹病毒-8（HHV-8） 与卡波济肉瘤有关1995 庚肝病毒（HGV） 庚型肝炎1996 变异型克雅氏病（nvCJD）的感染性蛋白 海绵状脑病新确认的20种病毒及其所致疾病年代 病 毒 名 称 新确认的11种细菌等微生物及其所致疾病年代 微 生 物 名 称 所 致 疾 病1977 嗜肺军团菌（L.pneumophila） 军团菌病1977 空肠弯曲杆菌（C.jejuni） 肠炎

4、1981 金葡球菌产毒素 中毒性休克综合征（TSS）1982 大肠埃希氏菌O157：H7株 出血性结肠炎1982 布氏疏螺旋体（Borrelia burgdorferi） 莱姆病（Lyme）1983 幽门螺杆菌（Helicobacter Pylori） 与胃溃疡病、癌有关1992 O139霍乱弧菌 新型霍乱1992 汉式巴尔通体（Bartonella Henslae） 猫抓病1993 创伤弧菌（HHV-6） 食源性败血症1993 大肠杆菌O12：K1：H7株 泌尿道感染，败血症， 1997 立克次体（R.mongolotimonae） 蝉传淋巴结病新确认的11种细菌等微生物及其所致疾病年代 寄

5、 生 虫 名 称 所致疾病1976 微小隐孢子虫 急性和慢性腹泻 （Cryptosporidam Parvum） 1983 比氏肠细胞内原虫 顽固性腹泻 （Enterocytozoon Bieneusi）1986 卡宴环孢子虫 持续性腹泻 （Cyclospora Cayatanensis） 1991 Hellen脑胞内原虫 结膜炎、弥漫性疾病 （Encephalitozoon Helleni)1991 巴贝西虫新体 非典型巴贝西虫病 （Babesian.SP）1993 家兔脑胞内原虫 弥漫性疾病 （Encephalitozoon Cuniculi）新确认的7种寄生虫及其所致疾病新突发重大传染性

6、疾病快速诊断体系的建立与溯源技术的研究重大人类疾病病毒大多来自动物SARS病毒可能来自果子狸等禽流感病毒来自禽、鸟类艾滋病毒可能来自灵长类动物埃博拉病毒也可能来自灵长类动物亨德拉病毒来自狐蝠狂犬病毒来自犬重大人类疾病病毒大多来自动物鼠疫耶尔森氏菌 猪溶血性链球菌2型鼠疫耶尔森氏菌 猪溶血性链球菌2型Source: WHO/EIP 875,000例麻疹死亡 麻疹在儿童死亡中所占的比例西太区有17，000人死于麻疹Source: WHO/EIP 875,000例麻疹 麻疹在霍乱 世界范围内的第八次大流行 从1961年开始一直延续至今，涉及到110多个国家，1988年在新疆暴发流行，发病人数3961

7、人；军团病 是嗜肺性军团菌引起的 呼吸系统疾病艾滋病 从1981年美国发现后迅速在138个国家蔓延，我国是1986年报道。2002年底全球4200万HIV/AIDS，其中15岁以下儿童320万；2002年死亡310万。霍乱 世界范围内的第八次大流行 从1961年开始一直延续至今 二十世纪三次世界性流感大流行 二十世纪三次世界性流感大流行突发重大传染性疾病快速诊断体系的建立与溯源技术的研究 死亡（9） 救治中（2） 出院（2） 公布动物疫情（3） 确诊 病例（12） 临床诊断病例（1）11.30，刘某某，女，31，农民，黑山县11.2，周某某，女，24，农民，枞阳县11.11，许某某，女，35，

8、农民，休宁县10.10，贺某某，男，9，学生，湘潭县11.23，唐某某，女，10，学生，资源县我国人禽流感病例分布情况截止2006年02月21日12.4，郭某某，男，35，个体商贩，遂川县12.6，周某某，女，41，工人，三明市12.17，欧阳某某，男，6，学生，桂阳县1.3，魏某某，女，35，农民，资阳县1.13，曹某，女，29，农民，成都武侯区1.27，龙某某，女，20，农民，邵阳市1.6，林某某，女，26，农民，漳浦县10.8，贺某，女，12，学生，湘潭县2.21有某，女，9岁,学生,安吉县 死亡（9）11.30，刘某某，女，31， 肠道病毒引起的感染 肠道病毒引起的感染急性出血性结膜炎

9、急性出血性结膜炎 腺病毒引起的一些疾病 腺病毒引起的一些疾病炭疽皮肤表现炭疽皮肤表现突发重大传染性疾病快速诊断体系的建立与溯源技术的研究埃博拉病毒感染者埃博拉病毒感染者2005 West Nile virus activity data, reported as of July 5th, 2005美国2005年西尼罗河病毒感染地区分布2005 West Nile virus activity 形态和染色性有明显特征的病原菌Northern Blot核酸杂交免疫荧光形态和染色性有明显特征的病原菌Northern Blot核酸PCR 检测病毒分离荧光定量PCR快速检测基因溯源PCR 检测病毒分离荧

10、光定量PCR快速检测基因溯源基因芯片基因芯片突发重大传染性疾病快速诊断体系的建立与溯源技术的研究吕祖善省长视察本实验室吕祖善省长视察本实验室吕祖善省长视察本实验室吕祖善省长视察本实验室提高对病原体检测能力加强对各种病原体及其特性的研究开展各种早期诊断试剂、特异性诊断方法的研究提高对病原体检测能力加强对各种病原体及其特性的研究 人类疾病中很大一部分是由传染性疾病所引起，随着世界人口的增长，人口的聚集与流动的频繁，加之人口老龄化、城市化进程的加快，生态环境与气候的改变；同时由于病原基因在自然选择与人群免疫压力下产生的变异，使人类面临传染性疾病的严重威胁。 尤其是通过呼吸道与肠道传染的病原体更为猖獗

11、，呼吸道病原通过飞沫与气溶胶传染,传播面广、传播迅速。同时，随着国际间交流的频繁，烈性传染病随时可能传入我国；加上由于生态环境与人类行为的改变，使新发传染病发生的危险加大，全世界60亿人口中，有一半受到新老传染病的威胁。这种现状已经并进一步对我省人民的健康构成了巨大的威胁。突发重大传染性疾病快速诊断体系的建立与溯源技术的研究 当不明原因的传染病暴发流行时，对传染原及时发现、有效鉴别、快速诊断和提出预警，是现代传染病防治体系的必要保证，也是公共卫生应急诊断的前沿技术。 研究快速诊断方法，不仅要敏感、特异，还要全面，为此建立各种传染病病原体的菌种、毒种库、血清库，同时建立起相应的基因信息库，开展相

12、关传染病的分子流行病学研究，这对诊断与鉴别新发、输入、变异以及未知病原体有着十分重要的意义。这样才能快速正确地对不明原因的病原作出正确诊断，并根据变异与基因毒力进行风险评估与预警，为政府部门提供决策依据，及时采取有效的预防与控制措施。 当不明原因的传染病暴发流行时，对传染原及时发现、有效 面对传染病的严峻形势，我省乃至我国的技术储备显得远远不足，存在很大的隐患，目前迫切需要解决以下关键问题： 面对传染病的严峻形势，我省乃至我国的技术储备显得远远不 对于传染性疾病，尤其是暴发疫情的快速诊断，是公共卫生应急检测与传染病突发事件处理的关键，只有对传染病作出了正确诊断，才能提供政府部门进行决策，及时采

13、取有效的应对措施。因此，从微量、快速、敏感和淮确出发，建立常见传染性疾病的基因诊断体系是很有必要的。而目前在我省乃至我国，尚未建立起系统的针对常见病毒性疾病与细菌性疾病的应急检测体系，从而难以应对各种各样复杂的暴发疫情。 1、建立与完善常见传染病疫情的快速应急诊断体系 对于传染性疾病，尤其是暴发疫情的快速诊断，是公共卫生 随着公共卫生应急体系建设的不断深入，我们必须对在国外局部暴发，危害严重，但尚未传入我国的一些重大传染病给事予高度的关注和警惕，如埃博拉 、尼巴 、西尼罗河病毒病等等。目前，尽管这些传染性疾病尚局限于世界部分地区，未形成全球性的流行，我国也尚未见到报道，但由于频繁的国际交往、发

14、达的现代化交通和时有发生的生物恐怖事件，此类传染病输入我国的危险随时存在， 2、对国外输入性传染病快速检测与溯源方法的技术储备 随着公共卫生应急体系建设的不断深入，我们必须对在 当不明原因的传染病暴发流行时，我们必须尽快作出判断与确认，才能为政府部门提供决策依据，并及时采取有效的预防与控制措施。2003年，新的传染病SARS在我国流行与肆虐近半年之久，许多部门都查明不了病因，这一切都给我们带来了深刻的教训。近二、三十年来，新发传染病真正由我国发现确认的除B型轮状病毒极个别的以外，均为由欧美与日本等国家首先发现，这一局面亟待变。 3、未知及新发传染病的病原检测与确认技术储备 当不明原因的传染病暴

15、发流行时，我们必须尽快作出判断与 这近十多年以来，尤其近年来传染病疾病谱的变化如何，这些暴发或流行的毒株或菌株的变异对病原体的毒力影响如何，以及病原变异对引起我省我国疾病的暴发流行之间的关系如何，如何根据菌毒株的基因变异与特异性，进行传染性疾病流行的预警，省内与国内至今还是一个空白。 4、传染病病原的菌毒种资源库、基因信息库与预警体系的建立 这近十多年以来，尤其近年来传染病疾病谱的变化如何研究内容与技术关键主要研究内容研究内容与技术关键（1）对常见呼吸道传染病病原，包括甲1、甲3、乙型流感、风疹、麻疹、腮腺炎、IIV型副流感、呼吸道合胞病毒、腺病毒以及猪链球菌、军团菌等；常见肠道传染病病原，包

16、括霍乱、O157出血性大肠杆菌、引起无菌性脑膜脑炎及出血性结膜炎的肠道病毒等；常见虫媒传染病病原，包括I型登革热病毒、乙型脑炎病毒等建立荧光定量RT-PCR快速检测方法，并进行检测体系的优化与完善，开展方法的灵敏度、特异性比较以及在临床标本检测中的评价，形成全面的应对突发公共卫生事件的应急快速检测体系。1、建立与完善常见传染性疾病的快速诊断体系（1）对常见呼吸道传染病病原，包括甲1、甲3、乙型流感、风疹(2）建立、优化与完善针对我省已出现的重大传染病，包括SARS、禽流感H5N1等病原体的常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR快速检测方法。（3）以荧光定量PCR、胶体金以及ELISA等技术为基

17、础，研发适合我省各市县CDC进行常个见传染病检测的快速诊断方法，并进行效果评价与初步临床应用。 (2）建立、优化与完善针对我省已出现的重大传染病，包括SAR 2、建立与完善输入性传染病快速检测体系以及病原溯源技术。 针对国内外已有但我省情况不明的传染病病原体，如西尼罗河病毒、埃博拉病毒、尼巴病毒等建立包括RT-PCR、荧光定量RT-PCR、基因测序和RFLP等在内的快速检测技术；同时，针对上述输入性传染病做好鉴别诊断技术和病原学检测的技术储备；建立病原溯源技术储备。 2、建立与完善输入性传染病快速检测体系以及病原溯源技术。3、未知及新发传染病的病原检测与确认（1）为了应对可能出现的原因不明性传

18、染病的暴发，建立未知病毒、细菌等病原体的快速基因鉴定技术。以已知病原体及临床样本为对象，通过对其随机扩增、产物的分子克隆、筛选、测序及生物信息学比对等，验证未知病毒快速基因鉴定体系的可行性和准确性；其次，并将该体系用于临床样本的检测，评价其敏感性、特异性和可行性。（2）建立相关哨点医院，对不明原因的传染性疾病样本，尤其是人兽共患疾病的样本，进行病原体的实验室检测与确认。3、未知及新发传染病的病原检测与确认（1）针对在我省暴发的各种常见及新发病毒和细菌性传染病，采集标本进行病原分离和鉴定；（2）对病原分离和鉴定方法进行优化，提高其敏感性和特异性；（3）菌（毒）种冻干保存技术的研究；（4）对历年浙

19、江省流行的重要菌（毒）种分离株的主要抗原基因进行序列测定，并分析其抗原和基因变异特性；（5）建立重要菌（毒）种的分子流行病学数据库；（6）开展重要传染病的人群血清流行病学调查，建立血清样本库；（7）血清流行病学资料的统计分析与数据库的建立。4、传染病病原的菌种、毒种资源库与基因信息库建立4、传染病病原的菌种、毒种资源库与基因信息库建立（1）O139、O157出血性大肠杆菌毒力基因毒力评估；流感病毒基因变异与流感暴发的关系；麻疹病毒基因变异与病毒抗原性变异研究。（2）开展重大传染病病原体的动物毒力试验，掌握其致病力和致病特性。（3）整合传染病监测、病原体基因抗原变异、菌群耐药监测、人群免疫水平监

20、测等信息，开展重大传染病流行的风险评估，建立预警体系；（4）制定控制重大传染病流行的应急措施与应急预案。5、传染病病原体相关基因风险评估与预警体系的建立5、传染病病原体相关基因风险评估与预警体系的建立预期目标1、建立与完善我省常见和重大传染病的快速检测方法，形成突发公共卫生事件应急检测体系；根据我省传染性疾病谱，针对常见传染病建立一适合于不同层次、不同类型的快速诊断方法，为我省传染病暴发疫情的病原和免疫学针对提供快速检测的技术手段，并为开发相应试剂盒做好技术支撑。2、对国外局部流行与暴发，但目前尚未传人我国的重大传染病，建立快速诊断与鉴别诊断体系，开展病原溯源技术研究。3、探索和建立未知病原体

21、的基因确认与鉴定体系，用于不明原因传染病的病原诊断；建立不明原因传染病病原体的溯源技术。预期目标4、建立浙江省常见与新发传染病的菌毒种库、血清库和血清流行病学数据库，为重要传染病的基础与应用型研究提供有力的支撑平台，为重大传染病免疫预防研究提供重要的本底信息资料；掌握重要菌毒种的抗原变异、基因变异趋势，建立重要毒种的分子流行病学数据库，为重大传染病预警系统的建立提供及时、科学、可靠的依据。5、建立重大传染病病原的毒力和致病特性研究；重大传染病的预警体系和应急控制体系。4、建立浙江省常见与新发传染病的菌毒种库、血清库和血清流行病1、对25种我国常见的传染病建立快速诊断体系，即建立常见传染病的荧光

22、定量PCR检测方法，并形成程序性文件；2、检测时间从收到样本到得出检测结果在3小时之内，检测灵敏度大于目前所采用的经典与常规方法，并具有良好的特异性；3、建立国内尚未建立的输入性传染病埃博拉、西尼罗河和尼巴病毒等建立快速诊断与鉴别诊断方法；4、对上述输入性传染病病原的重要基因建立测序和溯源技术；（二）技术指标1、对25种我国常见的传染病建立快速诊断体系，即建立常见传染5、已知病原体盲样检测或考核正确率达100；6、建立浙江省常见与新发重要传染病菌种与毒种(10种以上)的数据库资料与档案；7、建立浙江省流感、麻疹、病毒性肝炎、艾滋病等重大传染病的人群血清流行病学调查资料；8、建立58种重要菌（毒

23、）种主要基因的序列分析与抗原变异的分子进化数据库；9、建立重大传染病预警体系的组成结构及运行体制，并对其敏感性、及时性、高效性、可操作性和可拓展性进行评估的标准；5、已知病原体盲样检测或考核正确率达100； 该项目由浙江省疾病预防控制中心、浙江大学病原微生物所、浙江大学相关医院、宁波市疾病预防控制中心共同合作，全省其他11各市级疾病预防控制中心协助完成。 本项目针对本省25种常见和重大传染病建立快速检测方法，形成完整的应对突发公共卫生事件的应急检测体系；针对国内外现有但我省情况不明的各种病原体，包括埃博拉、西尼罗河和尼巴病毒等引起的新发及输入性传染病建立核酸快速诊断及鉴别诊断方法，以及传染病病原体的溯源技术的建立；未知病原基因鉴定与溯源技术的建立；通过对