脓汁和粪便标本中病原菌的检测3课件

1、脓汁和粪便标本中病原菌的检测3课件脓汁和粪便标本中病原菌的检测3课件空气的细菌学检查（结果录入）组号采样时间(min)采样地点菌落形成单位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU /m3 50,000NAT 86N、66N、52N(直径7cm、8cm、9cm平板）N：平板上的菌落数 A：平板面积(厘米）T：采样时间(15分钟) CFU：colony forming unit 牛牛文库文档分享空气的细菌学检查（结果录入）组号采样时间(min)采样地点菌WHO推荐的医院各部门空气细菌标准级别cfu/m3适用范围级区10器官移植、心血管、矫形等外科手术室，保护性

2、隔离室等，灌注或配制注射液实验室级区200无菌室、手术室、供应室、婴儿室、中心灭菌单位、术后恢复室、早产儿及产房、重症监护病房级区200500一般病房、治疗室、放射室、衣帽室、按摩室、盥洗室、小手术室浴室级区传染病科、同位素室级区卫生间、贮藏室、太平间等 牛牛文库文档分享WHO推荐的医院各部门空气细菌标准级别cfu/m3适用范围我国公共场所空气卫生细菌学标准（GB96639673-1996，GB16153-1996,平皿直径9cm）撞击法cfu/m3沉降法个/皿适用范围10001035星级宾馆、饭店1500202星级以下宾馆和非星级带空调宾馆、饭店250030普通饭店、招待所、酒吧、茶座、咖啡

3、厅、图书馆、博物馆、美术馆、飞机客舱400040音乐厅、影剧院、游艺厅、舞厅、理发店、美容院（店）、游泳馆、体育馆、医院候诊室、候机室、旅客列车车厢、轮船客舱、饭馆（餐厅）700075展览馆、商场（店）、书店、候车室、候船室 牛牛文库文档分享我国公共场所空气卫生细菌学标准撞击法cfu/m3沉降法个/皿手指皮肤的细菌学检查甲和乙、丙和丁共用1个平板上:甲、丙常规洗手下:乙、丁标准洗手第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。 在培养基表面触摸23厘米甲（丙）乙（丁）1 2 3 4 牛牛文库文档分享手指皮肤的细菌学检查甲和乙、丙和丁共用1个平板上:甲、丙常手指皮肤细菌检查结果

4、分析 比较洗手前后细菌的种类。洗前细菌种类多。洗后细菌种类少。洗手能洗掉大多数暂住菌。 比较常规和标准洗手的细菌数量。常规（简单）洗手，平板上细菌数量少。标准洗手，平板上细菌数量多。原因：常住菌数量大，牢固附着在皮肤上，常洗不掉， 可洗松动，经摩擦接种、脱落到培养基上，显示细菌更多？外科手术人员洗手？ 碘酒和酒精棉球消毒以后，有没有细菌生长？空白对照有没有细菌生长？洗手前没有细菌生长？ 牛牛文库文档分享手指皮肤细菌检查结果分析 比较洗手前后细菌的种类。www.n脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验流程(6次课12学时）培养基的制备细菌的分离培养细菌的纯培养细菌的形态学检查细菌的生化试验等细菌的血清

5、学试验、结果分析实验论文撰写 牛牛文库文档分享脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验流程(6次课12学时）培菌落特征 Bacterial Colony Characteristics大小：大(直径约3mm以上)，中(直径约13mm)，小(直径约1mm以下)。形状：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规则等。边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。表面：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、湿润或干燥。色素：一般为无色或灰白色，特殊色素有两类：脂溶性色素(菌落本身着色，培养基不着色)和水溶性色素(菌落及培养基均着色)。溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不透明)，溶血(菌落周围出现透明环)。 牛

6、牛文库文档分享菌落特征 Bacterial Colony Characte金黄色葡萄球菌菌落特征X-SA琼脂培养基添加了显色酶基质，金黄色葡萄球菌形成淡蓝色菌落 。血琼脂菌落直径约2mm、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐，菌落周围有透明的溶血环，溶血菌株大多有致病性。 Baird-Parker琼脂菌落黑色，奶油状，表面光滑，湿润，圆形，凸起，有光泽，边缘整齐，周围绕以不透明圈 ( 沉淀 ), 其外常有一清晰带 ( 卵磷脂环 ) 。 牛牛文库文档分享金黄色葡萄球菌菌落特征X-SA琼脂血琼脂 Baird-Pa链球菌菌落特征血琼脂甲型溶血性链球菌，菌落周围有12mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或

7、溶血。血琼脂乙型溶血性链球菌，菌落周围有24mm宽、红细胞完全溶解、透明的溶血环，称乙型溶血或溶血。血琼脂丙型链球菌，不产生溶血素，菌落周围无溶血环，称不溶血性链球菌或溶血。甲型乙型丙型 牛牛文库文档分享链球菌菌落特征血琼脂血琼脂血琼脂甲型乙型丙型www.niuw伤寒沙门菌菌落特征HE琼脂Hektoen Enteric Agar沙门菌产生蓝绿色、黑色中心菌落 XLD琼脂Xylose Lysine Desoxycholate Agar沙门菌产生较小黑色菌落SS琼脂Salmonella Shigella Agar沙门菌产生较小黑色菌落 牛牛文库文档分享伤寒沙门菌菌落特征HE琼脂XLD琼脂SS琼脂w

8、ww.niuw志贺菌菌落特征HE琼脂Hektoen Enteric Agar形成不发酵乳糖的深绿色菌落。麦康凯琼脂MacConkey Agar 形成较小的，无色半透明不发酵乳糖的菌落。SS琼脂Salmonella Shigella Agar 菌落圆形、液滴状、边缘整齐，湿润，无色半透明。 牛牛文库文档分享志贺菌菌落特征HE琼脂麦康凯琼脂SS琼脂www.niuwk.大肠埃希菌菌落特征麦康凯琼脂MacConkey Agar含乳糖及中性红指示剂，菌落呈红色。伊红美蓝琼脂eosin methylene blue Agar分解乳糖产酸，使伊红与美蓝结合而形成紫黑色菌落，具有金属光泽。SS琼脂Salmon

9、ella Shigella Agar分解乳糖产酸，使胆盐呈胆酸析出，形成中心浑浊的深红色菌落（中性红指示剂） 。 牛牛文库文档分享大肠埃希菌菌落特征麦康凯琼脂伊红美蓝琼脂SS琼脂www.ni细菌的纯培养 Pure Cultures脓汁标本在普通平板上有金黄色、白色两种菌落，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色。菌落直径2mm左右、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明。37培养24小时 牛牛文库文档分享细菌的纯培养 Pure Cultures脓汁标本在普通平板粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落色素是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖

10、产酸，酸使伊红与美蓝结合，形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落，菌落直径23mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红的颜色，淡粉红色，半透明，直径12mm。37培养24小时 牛牛文库文档分享粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落色若培养、放置时间过长或者平板上某个部位细菌比较多、菌落比较密集，大肠杆菌菌落颜色可能会发生改变。因为大肠杆菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白质，蛋白质分解大多产生碱性物质，中和了乳糖分解时产生的酸。大肠杆菌菌落可能会由原来的紫黑色变成粉红色，或者菌落中心黑色，边缘粉红色。菌落中心黑色，边缘粉红色。大肠埃希菌菌落特征改变 牛牛文库文档分享若培养、放置

11、时间过长或者平板上某个部位细菌比较多、菌落比较密划线分离失败！没有典型单菌落 牛牛文库文档分享划线分离失败！没有典型单菌落 菌落分布稀疏的区域单菌落较多。菌落分布密集的平板CFU(不同种属)较多。紫黑色1/2,粉红色1/2。 牛牛文库文档分享菌落分布稀疏的区域单菌落较多。菌落分布密集的平板CFU(不同 在菌落分布最稀疏的区域，选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落。单菌落与菌落形成单位辨认比较困难 牛牛文库文档分享 在菌落分布最稀疏的区域，选择平板上相同的菌落数多斜面接种分工甲普通平板金黄色菌落(auratus，golden yellow)1支斜面 黄色菌落可能是空气污染的微球菌

12、、黄色小球菌，不能挑选。乙普通平板白色菌落(albus，white)1支斜面 丙 EMB平板紫黑色菌落(atropurpureus)1支斜面 丁 EMB平板粉红色菌落(pink) 1支斜面戊 EMB平板粉红色菌落(pink)1支斜面斜面正面上2/3作标记： 组号 + 金黄、白色、紫黑、粉红。 牛牛文库文档分享斜面接种分工甲普通平板金黄色菌落(auratus，gol 在平皿底部玻璃上，画个大圈选取菌落。得到同组一致认可，才能挑取。 牛牛文库文档分享 在平皿底部玻璃上，画个大圈选取菌落。得到同组一致认可，接种环套住菌落轻刮取菌甲金黄色乙白色丙紫黑色丁粉红色 牛牛文库文档分享接种环套住菌落轻刮取菌甲

13、金黄色乙白色丙紫黑色丁粉斜面接种法 Streak Slant Method甲金黄, 乙白色。丙紫黑, 丁粉红。标记：组号，颜色接种环取菌后，伸入斜面底部，自下向上先拉一条细菌接种线。再伸入底部，自下向上，作蜿蜒划线。细菌涂布接种在斜面培养基的表面。 牛牛文库文档分享斜面接种法 Streak Slant Method接种环取生物安全警告接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。气溶胶粒径100um沉降很快,50um在0.4s内扩散开,5um通过呼吸道直接到达肺泡。Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。实验时应坐着，在火焰周围

14、1020厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。 牛牛文库文档分享生物安全警告接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒灭菌 收集平板 灭菌桶内（平板底部朝下，盖朝上放置） 速送灭菌室 高压蒸汽灭菌 洗刷。 牛牛文库文档分享灭菌 收集平板 灭菌桶内（平板底部朝下，盖朝上放置） 奥林巴斯 CX21型 生物显微镜 牛牛文库文档分享奥林巴斯 CX21型 生物显微镜 显微镜的搬运A.请按图所示，以双手抓住镜臂孔的两侧，小心搬运。B.搬运时，不得拿住载物台和镜筒，以免造成损坏。 牛牛文库文档分享显微镜的搬运A.请按图所示，以双手抓住镜臂孔的两侧，小心搬运开关与调整光强A.开

15、或关之前，必须将亮度调整旋钮按箭头相反方向转动到最小位置，以免损坏灯泡。B.电源开关拨到侧为开，拨到侧为关闭。 牛牛文库文档分享开关与调整光强A.开或关之前，必须将亮度调整旋钮按箭头相反调整聚光镜位置和孔径光阑A.用聚光镜上下移动旋钮，将聚光镜转到最上面。B.观察时，将孔径光阑环的10或100放到正面，与使用物镜相对应的倍率一致。 牛牛文库文档分享调整聚光镜位置和孔径光阑A.用聚光镜上下移动旋钮，将聚光镜转换物镜A.旋转物镜转盘，将希望使用的物镜（10、100）转到标本的上方。 牛牛文库文档分享转换物镜A.旋转物镜转盘，将希望使用的物镜（10、100聚焦注：10倍物镜的工作距离为10.5mm。

16、油镜的WD为0.13mm。A.从显微镜侧面观察，按箭头方向转动粗调旋钮，使载物台上的标本尽可能接近物镜。B.一边看目镜，一边慢慢逆箭头方向转动粗调旋钮， 使载物台下降。C.看到标本以后，用微调旋钮来正确对焦。 牛牛文库文档分享聚焦注：10倍物镜的工作距离为10.5mm。油镜的WD为0.100倍浸油物镜使用方法A.油镜放入光路之前，一定要在标本的观察部位上加一滴浸油。B.旋转物镜转盘，使油镜进入光路，用微调旋钮对好焦距。C.如果浸油内有气泡，会影响观察，可稍微旋转物镜转盘，使油镜来回通过12次浸油，排除油内气泡。 牛牛文库文档分享100倍浸油物镜使用方法A.油镜放入光路之前，一定要在标本的香柏油

17、折射率n=1.515空气的折射率n=1.000玻璃的折射率n=1.520油浸镜的原理光线 滴加香柏油可使光线更多进入物镜,避免光线通过折射率低的空气而散失,以提高物镜的分辨率,使物象明亮清晰。 放大倍数：目镜10倍物镜90或100倍。 牛牛文库文档分享香柏油折射率n=1.515空气的折射率n=1.000玻璃的折奥林巴斯 CX21型 生物显微镜（实验柜内，每人一台）注意：只能横放，不得竖放。 牛牛文库文档分享奥林巴斯 CX21型 生物显微镜注意：只能横放，不得竖放。w显微镜油镜的使用P13将标本放置、移动到光路上，用“黄色圈”的10物镜找到、看清楚标本。将聚光器调到最高处。调整孔径光阑,将与物镜

18、相对应倍率调到正面（10100）在标本观察部位上滴加一滴香柏油。将“白色圈”100物镜放入光路，浸泡于香柏油中，可看到模糊物象。调整亮度及微调旋钮，直到物象清晰为止观察物象，记录结果关闭电源。油镜处理：擦镜纸拭去香柏油 擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3）混合液擦拭擦镜纸擦拭油镜。显微镜罩上防尘罩 横放在实验柜内。 (顺德校区）实验台两侧的电源插座，只能插入一个插头，请选择离你最近的电源插座。（校本部）实验台中间，三个位的插座，中间那位插孔没有电，不能使用，只能用两侧的插座。 牛牛文库文档分享显微镜油镜的使用P13将标本放置、移动到光路上，用“黄色圈”医学微生物学实验综合性实验三、一空气、手指皮肤的细菌学检查结果分析脓汁和粪便标本中病原菌的检测菌落特征观察P11细菌纯培养P10油镜使用方法（讲解）脓汁标本检验 （录像）肠道致病菌的分离鉴定（录像） 牛牛文库文档分享医学微生物学实验综合性实验三、一空气、手指皮肤的细菌学检查试管用毛刷，上下、旋转刷洗内壁和管底。字迹用湿纱布，粘去污粉擦拭。管口朝向相同，流水冲洗10次。洗干净的试管，倒扣在筐内，晾干。平皿用纱布，旋转擦拭内外侧，字迹用纱布粘去污粉擦拭。流水冲洗10次。逐个倒扣在筐内，晾干。 牛牛文库文档分享试管用毛刷，上下、旋转刷洗内壁和管底。字迹用湿纱布，粘去思考题在