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文档简介

1、多聚酶链式反应扩增片段讲课第1页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二第2页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二第3页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二第4页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二细胞内和细胞外DNA复制环境的区别体内DNA的复制体外的模拟模板（母链）细胞内源外源加入引物引物合成酶外源加入底物dNTP细胞内源外源加入聚合酶细胞内源外源加入反应环境细胞内环境缓冲液第5页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二PCR仪第6页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二微量离心管

2、微量移液器第7页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二靶序列靶序列PCR 循环第一步 ：加热变性第8页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二靶序列靶序列引物 引物 53553533PCR 循环第二步 ：引物与靶序列退火第9页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二靶序列靶序列引物引物53553533Taq DNA聚合酶PCR 循环第三步 ：引物延伸第10页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二靶序列 靶序列第1个 PCR 循环完成后 ：得到两个拷贝的靶序列第11页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二循环次

3、数DNA数量122438201,048,576301,073,741,8243、30次循环后靶序列扩增的数量第12页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二循环数变性复性延伸第一次94C，10min30次4，30s55，30s72，1min最后一次72，10min第13页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二计算DNA含量（ g ）50 x (260nm的读数）x 稀释倍数50：1 g /ml的DNA在厚度为1cm比色杯中的吸光值为0.02第14页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二比色杯第15页，共19页，2022年，5月20日，14点1

4、6分，星期二葡萄RS基因的RT-PCR扩增葡萄RS基因的RT-PCR扩增图谱M. DNA Marker 2000；1.RS 基因约1300bp第16页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二第17页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二第18页，共19页，2022年，5月20日，14点16分，星期二实验小结 PCR仪加热使（ ）变性, 复性使引物与模板DNA（ ）,延伸需将反应温度升至中温( ),在（ ）的作用下,以 （ ）为原料,以（ ）为复制的起点,合成新链。 如此重复改变反应温度,经（ ）三个阶段为一个循环,每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍,一般样品是经过30次循环,最终使基因放大了数百万倍; 将扩增产物进行电泳,经溴化乙锭染色,在紫外灯照射下肉眼能见到扩增特异区段的

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