微生物和生物医学实验室生物安全及管理

1、微生物和生物医学实验室生物安全及管理WS233-2002生物和生物医学实验室生物安全通用准则发布时间：2002年12月3日实施时间：2003年8月1日GB 19489-2004 实验室生物安全通用要求颁布时间：2004年4月5日实施时间：2004年10月1日病原微生物实验室生物安全管理条例发布时间：2004年11月28日实施时间：公布之日起施行 ( GB 50345-2004 生物安全实验室建筑技术规范 )WHO Biosafety Manual and BMBL(USA) 实验室生物安全通用要求和管理条例世界存在生物威胁美国炭疽粉末事件人与实验室安全和SARS灾难经济的发展和国力的强大国际接

2、轨符合国情检测和验证软件先行内容全面范围和意义文件规定了微生物和生物医学实验室生物安全防护的基 本原则、实验室的分级、各级实验室的基本要求。本标 准为最低要求。文件适用于疾病预防控制机构、医疗保健、科研机构。生物样本, 工作人员, 周围环境意义: 分散管理到集中管理, 单位管理到政府管理, 专家管理到法治管理, 时紧时松到日常规范管理生物安全实验室的构成硬件： 一级防护屏障(生物安全柜和个人防护装备) 二级防护屏障(实验室的设施结构和通风系统)软件： 管理机构 规章制度 标准操作程序 良好的行为习惯生物危害微生物及生物标本,都有可能对人潜在危险.实验中若无相应设施相应设备,有可能对环境, 对人

3、员造成伤害.微生物危害评估当建设使用传染性或有潜在传染性材料的实验室前，必须进行微生物危害评估。应依据传染性微生物致病能力的程度、传播途径、稳定性、感染剂量、操作时的浓度和规模、实验对象的来源、是否有动物实验数据、是否有有效的预防和治疗方法等诸因素进行微生物危害评估。通过微生物危害评估确定对象微生物应在哪一级的生物安全防护实验室中进行操作。生物安全的分类WHO制定的实验室类型与危险类别危险类别实验室分类实验室实例微生物实例I对个体及公众危险较低基础基础教学枯草杆菌大肠埃希氏杆菌K12II对个体有轻度危险，对公众的危险有限基础（在必要时配备生物安全柜或其他适合个人防护的机械密闭设备）初级卫生单位

4、初级医院医生办公室诊断实验室大学教学单位及公共卫生实验室伤寒沙门氏菌乙型肝炎病毒淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒布鲁氏菌属结合分支杆菌III对个体有较高危险，对公众危险较低密闭特殊诊断实验室荚膜组织胞浆菌IV对个体及公众均有较高危险高度密闭危险病原体单位埃波拉病毒口蹄疫病毒拉沙热病毒生物安全包括生物安全设施生物安全设备良好的微生物学操作严格的管理定义 : 气溶胶 (aerosol)悬浮于气体介质中粒径一般为0.001m100m的固体、液体微小粒子形成的胶溶状态的相对稳定分散体系。定义 :生物安全柜 bio-safety cabinet处理危险性微生物时所用的箱形空气净化安全装置. 定义 :I级生物安

5、全柜 class bio-safety cabinet 至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作时柜正面玻璃推拉窗打开一半，上部为观察窗，下部为操作窗口，外部空气由操作窗口吸进，而不可能由操作窗口逸出。工作状态时保证工作人员不受侵害，但不保证实验对象不受污染。定义 :II级生物安全柜 class bio-safety cabinet 至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作空间为经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气。工作时正面玻璃推拉窗打开一半，上部为观察窗，下部操作窗口。外部空气由操作窗口吸进，而不可能由操作窗口逸出。工作状态下遵守操作规程时既保证工作人员不受侵害，也保证实验对象

6、不受污染 定义 :III级生物安全柜 class III bio-safety cabinet 至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作空间为经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气，正面上部为观察窗，下部为手套箱式操作口。箱内对外界保持负压可确保人体与柜内物品完全隔绝。 定义 :物理抑制设备 physical containment device 用物理或机械方法防止致病微生物逸出的设备。生物安全柜是最重要的安全设备，形成最主要的防护屏障。 实验室应按要求分别配备、级生物安全柜。所有能使致病微生物及其毒素溅出或产生气溶胶的操作，除实际上不可实施外，都必须在生物安全柜内进行。不得用超净工作台

7、代替生物安全柜。实验室内的布置和准入a）在主实验室应合理设置清洁区、半污染区和污染区；b）非实验有关人员和物品不得进入实验室；c）在实验室内不得进食和饮水，或者进行其他与实验无关的活动；d）实验室工作人员、外来合作者、进修和学习人员在进入实验室及其岗位之前必须经过实验室主任的批准。实验室工作人员的资格和培训实验室的工作人员必须是受过专业教育的技术人员。在独立进行工作前还需在中高级实验技术人员指导下进行上岗培训，达到合格标准，方可开始工作；实验室的工作人员必须被告知实验室工作的潜在危险并接受实验室安全教育，自愿从事实验室工作；实验室的工作人员必须遵守实验室的所有制度、规定和操作规程。三级和四级生

8、物安全防护实验室的工作人员在开始工作前必须留本底血清进行有关检测，以后定期复检。如有疫苗必须进行免疫注射。一级生物安全防护实验室 一般无须使用生物安全柜等专用安全设备一级生物安全防护实验室实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。 二级生物安全防护实验室 可能产生致病微生物气溶胶或出现溅出的操作均应在生物安全柜(II级生物安全柜为宜)或其他物理抑制设备中进行，并使用个体防护设备。 二级生物安全防护实验室实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。 三级生物安全防护实验室 实验室结构和设

9、施、安全操作规程、安全设备适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有预防传染的疫苗。 艾滋病病毒的研究(血清学实验除外)应在三级生物安全防护实验室中进行。 三级生物安全防护实验室 实验室中必须安装级或级以上生物安全柜 所有涉及感染性材料的操作应在生物安全柜中进行。当这类操作不得不在生物安全柜外进行时，必须采用个体防护与使用物理抑制设备的综合防护措施。 在进行感染性组织培养、有可能产生感染性气溶胶的操作时，必须使用个体防护设备。 当不能安全有效地将气溶胶限定在一定范围内时，应使用呼吸保护装置 三级生物安全防护实验室生物安全柜安装位置 级或级生物安全柜的安装

10、位置应远离实验间入口，避开工作人员频繁走动的区域，且有利于形成气流由“清洁”区域流向“污染”区域的气流流型。(三区二缓: A, B和C区; A-B和B-C之间的缓冲区) ABC三级生物安全防护实验室通风空调 必须安装独立的通风空调系统以控制实验室气流方向和压强梯度。该系统必须确保实验室使用时，室内空气除通过排风管道经高效过滤排出外，不得从实验室的其他部位或缝隙排向室外；同时确保实验室内的气流由“清洁”区域流向“污染”区域。进风口和排风口的布局应使实验区内的死空间降低到最小程度。 通风空调系统为直排系统，不得采用部分回风系统。 为确保实验室内的气流由“清洁”区域流向“污染”区域，实验室内不应使用

11、双侧均匀分布的排风口布局。不应采用上送上排的通风设计。由生物安全柜排出的经内部高效过滤的空气可通过系统的排风管直接排至大气，也可送入建筑物的排风系统。应确保生物安全柜与排风系统的压力平衡。不得在实验室内安装分体空调器 实验室的进风应经初、中、高效三级过滤 实验室的排风必须经高效过滤或加其他方法处理后，以不低于12ms的速度直接向空中排放。该排风口应远离系统进风口位置。处理后的排风也可排入建筑物的排风管道，但不得被送回到该建筑物的任何部位。 三级生物安全防护实验室通风空调 四级生物安全防护实验室 实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不

12、明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素。与上述情况类似的不明微生物，也必须在四级生物安全防护实验室中进行。待有充分数据后再决定此种微生物或毒素应在四级还是在较低级别的实验室中处理。 实验脊椎动物生物安全防护三级实验脊椎动物生物安全防护实验室中的动物必须置于带有净化通风装置的负压箱笼系统内。 生物安全柜（BSCs）只是整个生物安全程序的一部分，只有当采用了适当的操作和程序时，BSC才能：提供人员，环境和产品的保护。 水平层流的洁净台水平层流的洁净台不是生物安全柜。 他们通过工作表面排放HEPA高效过滤的空气并直接吹向操作者。这些设备仅仅提供产品保护。他们可以用于某些洁净的工作，诸如

13、无菌设备或电子设备的无尘组装。当处理细胞培养材料或药物合成时或当操作可能传染的材料时，这些洁净台是绝对不能使用的。操作人员在使用洁净台操作这些材料时（包括蛋白抗原）可能暴露于这些材料中，它可能导致过敏。水平层流的洁净台决不能代替生物安全柜用在生物医学或兽医实验室。 水平层流的洁净台原理图垂直层流“洁净台” 垂直层流的洁净台同样不是生物安全柜。他们可能在医院药房中是有用的，例如在准备静脉注射药物时需要一个洁净的区域。由于这些设备一般有一个观察窗，空气通常从观察窗下排放到房间。它和水平层流的洁净台一样会导致同样的潜在危险。 垂直层流“洁净台”原理图ULPA高效空气过滤器 ULPA过滤器清除粒子等于

14、和大于0.2 um粒子（这个粒径基本上包括了所有的细菌、孢子和病毒）的效率为99.9999%。典型的ULPA过滤器的介质是单层的硼硅酸盐纤维。摺皱的滤材又用铝盖板分开。滤材被粘合到木头、金属或塑料框架上。粗心的处理滤器（例如，不合适的储藏或摔落）能损坏粘接的滤材，或者造成漏洞或破裂导致破漏。这就是安全柜在初次安装和重新移位后必须进行滤器整体检验的原因。Direct Interception 直接攔截Air stream brings particle within one particle radius of a filter fiberParticle touches fiber surfa

15、ce and captured Inertial Impaction 慣性撞擊Particle too large to adjust to changes in air stream directionParticle continues by inertia and hit filter fiberPredominant in high gas velocities and dense packing of filter mediaDiffusion 擴散Result of random Brownian motion of gas moleculesSmall particles (0.

16、1 m) hit fiber after bumped by gas moleculesPredominant with low gas velocities and smaller particlesTheoretical HEPA FilterCollection Efficiency微粒大小與纖維濾網效率99.9599.9699.9799.9899.99100.000.0010.010.1110100Velocity = 0.035 m/sVelocity = 0.013 m/sCollection Efficiency %Particle Size mVelocity = 0.024

17、m/sExtrapolated curves Based on measurementExtrapolated curvesATMOSPHERIC DUSTVIRUSESTOBACCO SMOKEMYCOBACTERIUM TUBERCULOSISBACTERIAHUMAN SKIN CELLPOLLENSCorona Virus高效空氣微粒過濾確實有效Common Particle Size DistributionProper Installation and Maintenance of HEPA Filters洽當維修及裝置HEPA過濾器Types of BSCSClass I-Per

18、sonnel & Environment ProtectionClass II-Product, Personnel & Environment ProtectionType A1 30% Exhaust (75 FPM)Type A2 30% Exhaust (100 FPM)Type B1 70% Exhaust to the OutsideType B2 100% Exhaust to the OutsideClass III-Glove Box生物安全柜的选择表1 通过危害评估选择生物安全柜 估计的生物危险级别提供的保护 应选用的生物安全柜级别人员产品环境BSL 1-3 是 不是IBS

19、L 1-3 是是是II（A，B1，B2） BSL 4 是是是IIIB1，B2级、 级和级BSC的差异BSC 排气 循环 进风 送风 排处 连接 100% 0% 0.38 0 室外 硬管 A1 30% 70% 0.4 0.38 室内 无 A2 30% 70% 0.4 0.38 室外 套管 B1 70% 30% 0.51 0.38 室外 套管 B2 100% 0 0.51 0.38 室外 硬管 100% 0 不适 不适 均可 均可所有生物学污染的管道均为负压状态，或由负压 的管道通风系统包围.I级生物安全柜 功能：提供人员和环境的保护，但不提供产品保护。环境保护：它的空气运动类似于化学通风柜，但是

20、在排风系统有一个HEPA过滤器保护环境。人员保护：是通过向柜内进风的气流提供的，通过前开口处的最小气流线速度保持在75 fpm。用途：在许多情况下，I级生物安全柜被用作特殊的密封设备（例如，离心，收获设备或小的发酵设备）或可能产生气溶胶的操作过程（例如倒笼子的垃圾，通气培养或组织搅拌）。II级生物安全柜 功能：II级（A，Bl，B2，和B3型）生物安全柜提供人员、环境和产品保护。人员保护：气流从操作者的周围抽到安全柜前面的格栅，提供人员保护。产品保护：HEPA高效过滤的空气以单向流的形式沿着安全柜的工作表面向下流动，使交叉污染的机会最小，提供产品保护。环境保护：因为安全柜的空气经过排风HEPA

21、高效过滤器，对环境没有污染（环境保护），排风可以循环回到实验室（A型）或通过管道排放到建筑物外（B型）。 生物安全柜性能的比较 安全柜级别 进风面速度 气流流型 应 用 非挥发性毒物、化学和放射性物质 挥发性毒物、化学和放射性物质 I级 75前面进风；排风通过HEPA过滤器排到室外或实验室内 是是(1)II级A型 7570%的风经HEPA过滤后循环到安全柜的工作区域；30%的平衡气流可以通过HEPA过滤后排放到室内或通过套管排到室外 是不II级B1型 100排风必须通过专用管道经HEPA过滤后排放到室外 是是(最小量(2) II级B2型100排风不循环；排风全部通过硬管道和HEPA高效过滤后排

22、到室外是是(少量) II级B3型 100类似于II级A型，但风道相对于房间为负压；排风经HEPA高效过滤后通过套管排到室外 是是(最小量(2)III级 无开口进风 进风通过HEPA高效过滤器，排风经2个串联的高效过滤器通过硬管道排放到室外 是是(少量) II级A型生物安全柜 通过一个内部风机（图）抽取足够的房间空气，在安全柜的前操作口处维持75 lfpm的最小平均进风速度（计算的或实际检测的）。送风经过HEPA高效空气过滤器向工作台面提供无颗粒物的空气。单向气流减少工作区内气流的扰动并且使交叉污染的可能性降到最小。II级A型生物安全柜原理图Room airContaminatedairHEPA

23、-filteredair气流形式工作区域内向下流动的气流在接近工作台面时分成2路；一部分通过前面的格栅抽走，剩余的一部分经过后面的格栅抽走。污染空气通过后面的回风夹道回到位于安全柜顶部的送风和排风过滤器之间的空间。没有排风管道的II级A型生物安全柜不能用于含有易挥发或有毒的化学品的工作。通过循环在安全柜内和通过排风在实验室形成的化学蒸汽可能产生安全和健康的危险 II级B1型生物安全柜气流形式II级B2生物安全柜 这种安全柜为全排风式生物安全柜；没有空气在安全柜内循环。这种安全柜同时提供基本的生物和化学围护。送风机从安全柜顶部抽取房间空气或室外空气，通过HEPA高效滤器向下送到安全柜的工作区域。

24、建筑物或安全柜的排风系统通过后部和前面的格栅抽入空气，吸取所有的送风空气和所需要的房间空气，在前操作口处产生一个100 lfpm吸入气流面速度。所有进入安全柜的空气在排出室外之前都要经过一个HEPA高效滤器（也可能是其它空气净化设备，如活性炭滤器）。每分钟排出1200立方尺经过空调的房间空气使得这种安全柜的运行费用很昂贵。 II级B2型生物安全柜原理图II级B3型生物安全柜这种生物安全柜是最小吸入气流为100 lfpm的带有排风管道的A型安全柜。安全柜内的所有的正压污染风道都被负压风道所包围。这样，污染风道的泄漏将被吸入到安全柜而不会泄漏到环境中去。 Expanded Definition S

25、ection (3)Class II, Type A1 (Formerly Type A)Minimum 75 fpm Average Inflow VelocityMay have Positive Pressure Contaminated PlenumsClass II, Type A2 (Formerly Type B3)Minimum 100 fpm Average Inflow VelocityMust have Negative Pressure Surrounding Contaminated Positive Pressure PlenumsA1、A2的区别Performan

26、ce Testing, Annex APressure Decay/Soap Bubble/Tracer Gas Leak TestType B Exhaust AlarmOnce the cabinet is set or certified in its acceptable airflow range, audible and visual alarms shall be required to indicate a 20% loss of exhaust volume within 15 seconds.Serial Labels or Data Plates Shall Contai

27、n All Airflow Setup InformationBiological TestsManufacturer must submit method to unbalance cabinet for all tolerance pointsTemperature Rise Test Eliminated特殊应用：II级生物安全柜可以经过改进进行某些特殊任务。例如，前面观察窗可以由生产厂家改成带有显微镜目镜的形式，或将工作台面设计成能放置大的容器、离心机或所需要的其它设备等。如果需要，还可以在刚性的面板上增加手臂孔。好的安全柜设计需要在改进后进行微生物学气溶胶示踪试验和适当的认证（见第七

28、节），以确保系统的基本性能。 只有严格地遵守合理的操作和程序才能达到最大可能的围护效应。 III级生物安全柜 III级生物安全柜（图8）是为操作4级生物安全水平的微生物病原体而设计的，对环境和操作者提供最大的保护。它是一个没有开放式观察窗的气密性的结构。向安全柜内传递物品要经过一个浸泡池或能在2次使用之间消毒的双门传递箱（像高压锅那样）。反过来，也可以安全地从III级生物安全柜内向外清除物品。送风和排风都是经过HEPA高效过滤器过滤的。排风空气在排放到室外大气之前必须经过两级HEPA过滤器，或一个HEPA过滤器和一个空气焚烧器。使用专用的独立排风系统维持柜内外的气流，它可以保持安全柜始终维持在

29、负压（通常约为0.5英寸水柱压力）下。 III级生物安全柜原理图III级生物安全柜III级生物安全柜III级生物安全柜的特点长臂耐磨的橡胶手套以一种气密性的方式安装到安全柜的袖套孔上，可以在与内部隔离的条件下对柜内的材料进行操作。虽然这些袖套限制了手臂的运动，但是他们可以防止操作者与这些危险的材料直接接触。这种设计很明显可以最大限度地提高个人防护的安全性。依靠安全柜的设计，尽管有点乱流，送风HEPA滤器可以提供安全柜内无颗粒物的工作环境气流。组合式系列生物安全柜几个III级生物安全柜可以首尾相接连接在一起提供一个大的工作区域。这种组合式系列生物安全柜可由用户自行组合；系列安全柜内安装的设备（例

30、如，冰箱、小型升降机、小动物笼架子、显微镜、离心机、孵箱等）一般来说也是用户自己安放的。III级安全柜通常只是在最高围护功能的实验室内安装，这些实验室具有控制出入和特殊通风要求或其它支持系统（例如高压蒸汽）。读者可以查询有关这些系统更确切的文献（16，21，23）。 实验室危险和危险评估 在实验室里会遇到在许多化学、放射学和生物学危险，为了减少暴露，采用基本的围护设备是一项重要的策略。表所示为各种级别的生物安全柜，每种安全柜所提供的防护水平和适当危险评估。微生物学危险确定为生物安全水平1-4级，在BMBL（6）中做了详细的说明。如果要在生物安全柜中使用化学和放射性材料，则要求对安全柜中的设计进

31、行修改，或在建筑物排风系统增加活性炭过滤器，因为HEPA过滤器不能阻留汽化或升华的物质。 生物安全柜中的化学物质 传染性微生物的工作经常要求使用各种化学试剂，而许多化学物质通常容易汽化。因此，在选择生物安全柜时，必须将对化学品的固有危险的评价作为危险评估的一部分。易挥发或有毒的化学品不能在没有排风管道的II级A型安全柜中使用，因为在安全柜内部产生的蒸汽会造成火灾危险。为了确定由于意外或溢出进入气流最大的化学浓度，有必要评估其用量。II级安全柜的电器系统不是防火的，所以，不允许化合物的浓度达到较低爆炸的界限。而且，由于II级A型安全柜将化学蒸汽循环到安全柜的工作空间和房间，他们可能使工作人员和其

32、他人员暴露到有毒化学蒸汽中。 化学通风柜是设计用来操作挥发性化学物质的，所以在操作挥发性的化学物质时，应该考虑使用化学通风柜，而不是使用生物安全柜。化学通风柜连接到建筑物的排风系统，并且用通风管道直接将空气排放到建筑物之外，没有空气循环。当操作化学致癌物时，同样可以使用通风柜。可是，因为I级和II级B2生物安全柜也是使用管道向室外排风，当小量的易挥发性的化学品作为微生物学研究的添加剂使用时，也可以使用这2种生物安全柜。II级Bl型安全柜也可以用于微量的或作为示踪剂量的非挥发性化学物质的操作。 在使用II级B3型（带有排风管道的A型）安全柜操作易挥发有毒的化学物质时应该小心，因为在安全柜和建筑物

33、排风系统之间的平衡会改变，可能导致这些化学蒸汽释放到实验室内。如果微量易挥发有毒的化合物要在II级B3型安全柜中使用，那么，建筑物排风系统与安全柜风机之间必须监控并精确的互锁。许多液体化学品，包括非挥发性抗肿瘤和化学治疗药物和低水平的放射性核材料，可以在II级A型安全柜内安全地处理。A型安全柜可以用于操作人类病原体，包括那些空气传播途径的病原体。II级生物安全柜不能用于以放射性碘标记的生物危险材料。要进行这类工作，需要使用硬管连接向室外排风的，在排风管道上同时装有HEPA高效过滤器和活性炭过滤器通风围护设备。 改进的II级生物安全柜或I级生物安全柜可以用于以I125标记的传染微生物 国家癌症研

34、究所（National Cancer Institute）的研究安全办公室以前的推荐（现在仍然有效）中规定的某些涉及使用一些化学致癌物（离体过程）的工作满足以下参数时可以在II级安全柜中进行：（1）排风气流在安全柜的前操作口处足以提供一个100 lfpm的向里流动的气流；（2）在正压下的污染风道没有漏气；（3）安全柜的空气排放到室外；（4）如同NSF 49号标准当前推荐的那样，II级B型安全柜使所有的生物污染管道和通风夹道都处于负压状态下，或被负压管道或风道所包围。许多病毒学和细胞培养实验室使用稀释过的化学致癌物和其它有毒的物质。在维护之前，要结合安全柜的消毒和排风系统存在的潜在问题仔细的评价

35、。空气处理系统，如可能要求使用袋进袋出的活性炭过滤器，以便充分满足使用规定。在生物安全柜中的放射性危险 易挥发的放射性核材料如I125不应该在II级A型安全柜内使用（见表2）。 当在生物安全柜内使用非挥发性的放射性材料时，就和在桌上型安全柜内使用放射性材料一样存在着潜在的固有危险。对于那些可能造成喷溅或气溶胶化的工作可以在生物安全柜内进行，但必须进行放射性监控，需要的时候，生物安全柜应该进行消毒。在专门用作放射性物质的操作时，在生物安全柜内部可以使用一个垂直的（不能倾斜）放射性屏蔽罩来保护工作人员。 生物安全柜的使用操作和程序 II级生物安全柜内的准备工作 在开始工作之前，准备一张特别的活动所

36、需的材料检查清单，在生物安全柜内的放置必要的材料。因为安全柜的气幕防护屏障是很脆弱的，做好充分的准备是为了在正式工作时减少手臂穿越气幕的运动次数。操作者手臂横向快速地进出安全柜会干扰气幕，并损害安全柜所提供的局部防护屏障。手臂垂直于安全柜的操作口，进出时缓慢的移动，将减少这种危险。房间其他人员的活动（例如，迅速运动，开、关房间门等）也同样可以干扰安全柜的空气保护屏障。在开始工作之前，操作者应该调整凳子高度，使自己的脸在前操作口之上。在手臂放进安全柜内大约一分钟之后，才能进行实验操作。这样可以使安全柜稳定，并且能让气流“清扫”掉手和臂表面的微生物污染物。当操作者的胳膊横放在前面的格栅上的时候，房

37、间空气可能直接流动到安全柜的工作区域，而不是通过前面的格栅进风。轻微地提高胳膊会缓和这个问题。前面的格栅绝对不能让研究记录、废弃的塑料包装和吸液装置等阻挡。所有的操作应该在距离前面的格栅4英寸里面的工作面上进行。 工作前的净化在开始工作之前要让安全柜的风机至少运行3-5分钟使安全柜内的空气进行净化。安全柜的工作台面、内壁（不包括送风滤器扩散板）和观察窗的内表面用消毒剂擦拭。再用无菌蒸馏水进行擦拭以清除残余的消毒剂。 放到安全柜的容器和材料的表面应该以70%的乙醇擦拭，以减少将环境的杂菌带到安全柜内。定期的对孵箱和冰箱进行消毒生物安全柜内部材料的放置在安全柜的工作台面上可以放一块塑料衬底的能吸水

38、的毛巾。所有的材料应该放在离安全柜前面的格栅和后面工作台面的边缘尽可能远的位置（图11）。容易产生气溶胶的设备（例如，旋转搅拌器，台式离心机）应该靠近安全柜的后部放置。操作时的动作应该从工作台面的清洁区到污染区。安全柜内材料的放置洁净培养物（左边）可以进行接种（中心）；用过的污染吸管放在浅的平底盘里，而其它污染的材料可以放在生物危害包（右边）中。这安排对于习惯于左手操作的人要颠倒过来。 洁净污染直立式的吸管收集容器不应该放在生物安全柜内，也不要放在安全柜之外的地板上。经常地向这些容器内放东西所造成的频繁地进出安全柜的运动，会破坏安全柜空气屏障的整体性，损害人员和产品保护的性能。 II级生物安全柜内的操作 在生物安全柜内所进行的许多普通过程可能产生喷溅或气溶胶。应该始终采用良好的微生物学技术，减少喷溅和气溶胶产生。II级生物安全柜的设计可以使水平方向喷出的孢子在14英寸的传播距离以内被安全柜向下流动的气流所俘获。 因此，保持干净的材料离开产生气溶胶的活动至少1英尺以外将会减少交叉污染的可能性。虹吸抽气装置吸气瓶或虹吸瓶