医学免疫学检验-免疫荧光技术课件

1、医学免疫学检验-免疫荧光技术课件 PriCells-免疫荧光技术（Immunofluorescencetechnique） 光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术 是标记免疫技术中发展最早的一种。将抗原或抗体用荧光素进行标记，标 记的抗原或标记的抗体与相应的抗体或抗原反应后，测定复合物中的荧光 素，这种免疫技术称为免疫荧光素技术。免疫荧光细胞化学分直接法、夹 物质吸收外界能量而进入激发状态，在回复基态时多余的能量以电磁 辐射的形式释放，即发光，这种光称为荧光。这种物质，称为荧光素。由 光激发所引起的荧光，为光致荧光；由化学反应所引起的荧光，为化学荧 品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于

2、水和酒精溶剂。有两种异构体，其中 应用最广泛的荧光素。其主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标 于水，易溶于酒精和丙酮，性质稳定，可长期保存。最大吸收光波长为 PerCP是在甲藻和薄甲藻的光学合成器中发现的，是一种蛋白复合物，分 激光激发后，发射光的峰值约为677nm。FL3探测器检测PerCP。）： （DNA、RNA）的双螺旋碱基对中。在对DNA染色时，需用RNase对细胞进 PI的发射光谱为610-620nm。FL2探测器检测PI。 B-GMUGMU360450APMUPMU360450酶作用后产生荧光的物质某些化合物本身无荧光效应，一旦经酶作用 铕(Eu3+)、铽(Tb3+)等的螯合

3、物可发射特征性的荧光，而且激发光波长范 围宽、发射光波长范围窄、荧光衰变时间长，最适合于时间分辨荧光免疫 复合物，可通过经典途径激活补体形成攻膜复合体而导致细胞膜穿孔。因 此，水溶性染料如台盼蓝可进入受损细胞，染成蓝色，为阳性反应；不带 镊子夹住胸腺反复轻轻研磨单个细胞 加入5%小牛血清PBS制备细胞悬液调节细胞浓度至3-4107/ml 细胞膜穿孔的细胞呈蓝色，细胞膜完整的活细胞不着色。细胞毒 性作用的判断标准如下：阴性反应()死细胞占0-10%可疑阳性反应() 抗体能形成抗原抗体免疫复合物，通过经典途径激活补体，形成攻膜复合 物，从而导致细胞膜穿孔，细胞受损，台盼蓝进入细胞，染成蓝色，呈阳

4、不能形成抗原抗体免疫复合物，也无补体，因此不能形成攻膜复合物，不 所以没有抗原抗体免疫复合物的形成，补体不能被激活，不能形成攻膜复合物，细胞无受损，台盼蓝不能进入而不被染色，呈阴性反应。说明CDC 物的形成，也无补体，细胞无受损，台盼蓝不能进入而不被染色，呈阴性 第一节第二节第三节第四节第五节第六节抗原抗体反应免疫学检测常 用标记技术免疫细胞的检测免疫分子的检测免疫相关基因的检测免疫学检 抗原抗体反应:抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。 应用已知抗体或抗原检测未知抗原或抗体，可以对感染性、非感染性致病 一种抗原一般只能与由它刺激所产生的抗体结合，这种抗原抗体结合 或亲合力(avi

5、dity)来表示。亲和力是指抗体分子上一个抗原结合部位与相应的抗原决定基之间的结合强度。亲合力是指整个抗体分子与整个抗原在抗原抗体特异性反应时，当抗原与抗体达到最适比例时，沉淀物形 根据抗原性质、出现结果的现象、参与反应成分的不同，可将抗原抗 体反应分为：凝集反应沉淀反应补体参加的反应采用标记物的抗原抗体反 颗粒性抗原(细菌、红细胞等)与相应抗体结合后形成凝集团块，这一 在定量抗体中分别加入不同浓度的抗原，经一定时间后可形成免疫复 合物。用浊度计测量反应液体的浊度，复合物形成越多，浊度越高，可根 据标准曲线计算出样品中的抗原含量。该法快速简便，可取代免疫扩散法 火箭电泳单向扩散试验对流电泳双向

6、扩散试验免疫电泳 AgAbAg第二节免疫学检测常用的标记技术 定量甚至定位测定，结果易于观察、适合自动化检测等很多优点。广泛用 根据标记物与检测方法不同，标记技术可分为:免疫荧光技术放射免疫测定免疫酶标技术发光免疫分析免疫金标记技 术 用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待检标本中的抗原反应，抗原 性高，制备一种荧光素标记的二抗可用于多种抗原的检查。缺点：非特异 入补体，使之与抗原-抗体复合物结合；再用荧光素标记的抗补体抗体进 还可对同一细胞的多种参数(如DNA、RNA、蛋白质和细胞体积等)进行多 FPIA)荧光物质经偏振光蓝光照射而跃入激发态，在恢复至基态后可释放 用具有潜在荧光的物质作为酶的底物，经过酶解反应产生高强度荧光，可 放射免疫测定法(rad