单基因性继发性高血压的基因诊断

1、单基因性继发性高血压的基因诊断瑞金医院高血压科 上海市高血压研究所朱鼎良单基因性继发性高血压糖皮质激素抑制性醛固酮增多症（GRH）表征性盐皮质激素增多症（AME）11羟化酶缺乏症17羟化酶缺乏综合征Liddle 综合征Gordon 综合征孤立型嗜铬细胞瘤II A 型多发性内分泌瘤II B 型多发性内分泌瘤Von Hippel-Lindau综合征 I 型神经纤维瘤高血压伴短指畸形糖皮质激素抑制性醛固酮增多症表征性盐皮质激素增多症17羟化酶缺乏综合征11 羟化酶缺乏症Liddle 综合征II A 型多发性内分泌瘤II B 型多发性内分泌瘤I 型神经纤维瘤Von Hippel-Lindau 综合征G

2、ordon综合征CYP11B1/CYP11B2HSD11B2CYP17CYP11B1 SCNN1B, SCNN1GRET proto-oncogeneRET proto-oncogene NF1gene VHL tumour suppressor geneWNK1、WNK4致病基因（单基因性继发性高血压） 单基因性继发性高血压基因诊断（国内） 病名 Liddle 综合征IIa型多发性内分泌瘤糖皮质激素抑制性醛固酮增多症*Gordon综合征单位高研所、北医高研所内研所 高研所 历史 (Liddle 综合征) 1963 Liddle 首例报道1994 Shimkets 肾上皮钠通道亚单位 基因突变

3、 1995 Hansson 肾上皮钠通道亚单位 基因突变特征 (Liddle综合征) 遗传 临床表现 常染色体显性遗传病 （16p)肾上皮钠通道（ENaC) 基因突变高血压低醛固酮低血钾 低血浆肾素活性（PRA） Liddle 综合征家系-1Liddle综合征家系先证者的临床特征 男, 25 岁 18 岁发生高血压 血压：230/140 mmHg 血钾: 2.7mmol/L 高血压家族史: 母、兄弟、侄女 Liddle综合征家系先证者的临床特征低PRA: 0 ng/ml/h (0.1-5.5)低尿醛固酮 ：0.7 ug/24h (3.4-12.7)联合用降压药无效安替舒通治疗无效氨苯喋啶（tr

4、iamterene）治疗和低钠饮食后高血压和低血钾明显改善 1985年住院资料氨苯喋啶和低钠治疗前后血压和生化指标改变 血压 血钾 尿ald (mmHg) (mmol/L) (ug/24h) 治疗前 230/140 2.7 0.7 治疗后 110/84 4.2 6.4 Liddle家系一级亲属的临床及生化检查 病人 血压 年龄 发病年龄 (岁) (mmHg) (岁) 高血压 卒中-1 130/8076-1* 120/80 46 33 43-3* 126/9241 18 32-5* 138/106 37 18-7* 144/108 31 14 23-2* 160/120 24 15-3 105/

5、7521-4 110/8015-5 98/78 9病人 PRA 血浆 alt. 尿 ald 血钾 尿钾 (ng/ml /h) (ng/ml / h) (ng/dl) (mmol/l) (mmol/l) -1 4.03-1* 1.02 7.4 3.5 3.52 46.6-3* 1.24 10.1 1.3 3.54 40.4-5* 1.08 9.6 0.4 4.07 22.1-7* 0.77 7.7 2.7 3.37 42.0-2* 0 2.1 0.4 3.64 55.7-3 3.80-4 4.25-5 4.06Liddle家系一级亲属的临床及生化检查基因诊断方法 (Liddle综合征) 制备基因

6、组DNA 从外周血（5-10ml）白细胞中抽提DNADNA 直接测序 PCR 扩增 ENaC 513-638密码子 和 ENaC 524-631密码子 PCR纯化产物用 ABI 377 测序仪进行序列分析基因诊断结果 (Liddle综合征家系-1) 5名家系成员 (II-1,3,5,7, III-2)， ENaC基因616密码子存在CCC - CTC (pro-Leu)的错义突变 先证者父亲(I-1)和其他年青子女 (III-3,4,5)未检出这一突变Liddle家系成员 ENaC基因序列分析 II-1 II-3 II-5 II-7CCC-CTCP616L已报道的Liddle综合征ENaC基因

7、的致病突变 亚单位 密码子 碱基改变 蛋白改变 564 CGA-TGA Arg-stop codon 582 deletion stop codon 589 CAG-TGA Gln-stop codon 592 ACG-ACCG Thr-frame shift 594 CCC-CCCC Pro-frame shift 615 CCC-TCC Pro-Ser 616 CCC-CTC Pro-Leu 616 CCC-TCC Pro-Ser 618 CTA-TTA Tyr-His 574 TGG-TGA Trp-stop codon Liddle 综合征家系-2基因诊断结果 (Liddle综合征家系

8、-2) 3名家系成员 (II-5, III-1,4)， ENaC基因616密码子存在CCC - TCC （pro-Ser) 的错义突变 其他家系成员 (II-2,3,4,6,7,8, III-2,3)未检出这一突变基因诊断结果 (Liddle综合征家系-2) 3名CCC-TCC突变者同时存在632密码子的GAC-CAC（Asp-His)变异 150名无关个体测序未发GAC-CAC变异，证明这是一种突变。该突变与Liddle 综合征发病间关系有待研究Liddle 家系-2的 P616S突变 (CCC - TCC, Pro - Ser)Liddle 家系-2 D632H 突变(GAC - CAC,

9、 Asp - His)ENaC 亚单位 ENaCNH2COOH subunit突变位点Nedd 4 结合部位II型多内分泌腺瘤（MEN-II) MEN- IIa型：甲状腺髓样癌（MTC）、甲状旁腺腺瘤或增生、嗜铬细胞瘤 MEN- IIb型：MTC、嗜铬细胞瘤、粘膜神经节瘤、马凡氏体型II型多内分泌腺瘤（MEN-II) Sipple 1961年报道第一例 MEN-II a型（瑞金1998，2002） MEN-II b型（瑞金2002）多内分泌腺瘤病IIa型家系图MEN-II a 家系先证者（III-2） 女、51岁、“血压升高7年、阵发性心悸、多汗2年”、 97年入院、160/100 mm Hg B 超：双側甲状腺实质性肿块、双側肾上腺多发性占位 性病变 CT：双側甲状腺占位性病变、双側肾上腺占位性病变 甲状腺及颈前淋巴结穿刺：甲状腺髓样癌、颈前淋巴转移