四章维生素类药物的分析(与“维生素”有关PPT文档)

1、四章维生素类药物的分析(与“维生素”有关PPT文档)四章维生素类药物的分析(与“维生素”有关PPT文档)优选第十四章维生素类药物的分析第2页，共172页。优选第十四章维生素类药物的分析第2页，共172页。 维生素的发现是20世纪的伟大发现之一。1897年,C.艾克曼在爪哇发现只吃精磨的白米即可患脚气病，未经碾磨的糙米能治疗这种病。并发现可治脚气病的物质能用水或酒精提取,当时称这种物质为“水溶性B”。 Christiaan Eijkman1929 诺贝尔生物医学奖The Discovery of Vitamin第3页，共172页。 维生素的发现是20世纪的伟大发现之一。1897年,C发现简史第4

2、页，共172页。发现简史第4页，共172页。必需维生素 13种 维生素A，维生素B，维生素C，维生素D，维生素E，维生素K，维生素H（生物素），维生素P，维生素PP，维生素M，维生素T，维生素U，水溶性维生素。第5页，共172页。必需维生素 13种 维生素A，维生素B，维生素C，维生素D，分类第6页，共172页。分类第6页，共172页。AB1CDEVitaminsContents第7页，共172页。AB1CDEVitaminsContents第7页，共172第18页，共172页。挥发性低、不稳定、极性强衍生化。硫色素反应每1ml碘滴定液(0.344g全反式维生素A醋酸酯第151页，共172页。

3、第75页，共172页。第一节 维生素A的分析第105页，共172页。求本品中维生素A的含量？(四)残留溶剂：环己烷的检查第一节 维生素A的分析第97页，共172页。VD2、VD3区别01mol/L HCl维生素A的简介是鱼类肝脏中提取的一种不饱和脂肪醇，又称鱼肝油。目前主要采用人工合成。在体内以视黄醇的形式储存，缺乏会影响视色素的合成，导致夜盲症，视力减退。第一节 维生素A的分析第8页，共172页。第18页，共172页。维生素A的简介是鱼类肝脏中提取的一种不第9页，共172页。第9页，共172页。全反式第一节 维生素A的分析结构共轭多烯醇侧链的环己烯黄色棱形，62-64 淡黄色棱形，57-58

4、无定型，28-29第10页，共172页。全反式第一节 维生素A的分析结构共轭多烯醇侧链的环己烯去氢维生素VitA2去水维生素VitA3易发生脱氢、脱水、聚合反应第一节 维生素A的分析第11页，共172页。去氢维生素去水维生素易发生脱氢、脱水、聚合反应第一节 溶解性:与三氯甲烷、乙醚、环已烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。 不稳定性：含有多个不饱和键，性质不稳定，易被空气中氧或氧化剂氧化，易被紫外光裂解，特别是在加热和金属离子存在时更易氧化变质从而失活。第一节 维生素A的分析性质第12页，共172页。 溶解性:与三氯甲烷、乙醚、环已烷或石油醚能任意混合，在乙醇紫外吸收：共轭多烯醇侧

5、链结构，在325-328nm之间有最大吸收，可用于鉴别。第一节 维生素A的分析第13页，共172页。紫外吸收：共轭多烯醇侧链结构，在325-328nm之间有最大max 相对生物效价顺反异构维生素A325.5100%全反式新维生素Aa32875%2顺新维生素Ab320.524%4顺新维生素Ac310.515%2，4顺异维生素Aa32321%6顺异维生素Ab32424%2，6顺第一节 维生素A的分析天然维生素A主要是反式第14页，共172页。max 相对生物效价顺反异构维生素A325.5100%全CHCl3可用于鉴别和含量测定 与三氯化锑呈色:三氯甲烷+三氯化锑=不稳定的蓝色第15页，共172页。

6、CHCl3可用于鉴别和含量测定第15页，共172页。与三氯化锑呈色反应第一节 维生素A的分析鉴别实验Vit ASbCl3CHCl3(无水无醇)蓝色紫红色（一）Carr-Price反应第16页，共172页。第一节 维生素A的分析鉴别实验Vit ASbCl3CH蓝色紫红第一节 维生素A的分析第17页，共172页。蓝色紫红第一节 维生素A的分析第17页，共172页。条件： 无水、无醇SbCl3水SbOCl乙醇可使碳正离子的正电荷消失第一节 维生素A的分析要求仪器和试剂必须干燥无水，三氯甲烷必须无醇第18页，共172页。条件： 无水、无醇SbCl3水SbOCl乙醇可使碳正离第一节 维生素A的分析第19

7、页，共172页。第一节 维生素A的分析第19页，共172页。max为326nm一个吸收峰max为350390nm三个吸收峰五个共轭双键六个共轭双键最大吸收峰红移（二）UV法第一节 维生素A的分析第20页，共172页。max为326nmmax为350390nm五个共轭双键第一节 维生素A的分析维生素A在无水乙醇溶液中溶解,立即进行UV扫描,在360nm处有一最大吸收峰.当盐酸水浴加热30s,迅速冷却,此过程发生脱水反应,扫描时出现三个吸收峰第21页，共172页。第一节 维生素A的分析维生素A在无水乙醇溶液中溶解,立USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值BP 对照品法 显色剂 三氯化锑（三）

8、TLC法第一节 维生素A的分析展开剂： 环己烷-乙醚（80：20）均显蓝色斑点，维生素醇（ Rf= 0.1） 维生素醋酸酯（ Rf= 0.45） 维生素棕榈酸酯（ Rf= 0.7） 第22页，共172页。USP 显色剂 磷钼酸BP 对照品法 酸值 取乙醇与乙醚各15ml，置锥形瓶中，加酚酞指示剂5滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至显粉红色，再加本品2.0g，振摇使溶解，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定，酸值应不大于2.0（附录VIIH）杂质检查第23页，共172页。酸值 取乙醇与乙醚各15ml，置锥形瓶中，加酚酞指过氧化值取本品1.0g，加冰醋酸-三氯甲烷（6:4）30ml，

9、振摇使溶解，加碘化钾的饱和溶液1ml，振摇1分钟，加水100ml与淀粉指示液1ml，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定至紫蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。消耗硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）不得过1.5ml。杂质检查第24页，共172页。过氧化值取本品1.0g，加冰醋酸-三氯甲烷（6:4）30ml第一节 维生素A的分析含量测定第25页，共172页。第一节 维生素A的分析含量测定第25页，共172页。（一）UV法（三点校正法）第一节 维生素A的分析维生素A在325328nm的波长范围内有最大吸收，可用紫外法进行含量测定但维生素A原料常混有杂质如：第26页，共172页。（一

10、）UV法（三点校正法）第一节 维生素A的分析维生素第一节 维生素A的分析第27页，共172页。第一节 维生素A的分析第27页，共172页。 维生素A的氧化产物第一节 维生素A的分析第28页，共172页。 维生素A的氧化产物第一节 维生素A的分析第28 维生素A在光照下产生的无活性的聚合物第一节 维生素A的分析第29页，共172页。 维生素A在光照下产生的无活性的聚合物第一节 维第一节 维生素A的分析第30页，共172页。第一节 维生素A的分析第30页，共172页。第31页，共172页。第31页，共172页。第一节 维生素A的分析第32页，共172页。第一节 维生素A的分析第32页，共172页。

11、测定对象：VitA醋酸酯时，ChP 规定第一法 等波长差法第一节 维生素A的分析第33页，共172页。测定对象：VitA醋酸酯时，ChP 规定第一法 等第二法 等吸收比法测定对象： VitA醇时，ChP 规定第一节 维生素A的分析第34页，共172页。第二法 等吸收比法测定对象： VitA醇时，ChP 合成的或天然的维生素A 均为酯式维生素A，根据供试品中干扰杂质的多少，可采用：（1）直接测定法 （2）皂化法 第一节 维生素A的分析第35页，共172页。合成的或天然的维生素A 均为酯式维生素A，根据供试品中干扰杂求求效价（1）基本步骤4. 测定方法A选择，A328测定或A328校正求标示百分含

12、量第36页，共172页。求求效价（1）基本步骤4. 测定方法A选择，A328测定或A（1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯的测定）1）方法 取样品适量，精密称定，加环己烷溶解在300、316、328、340、360nm测吸收度，以确定最大吸收波长（ A328或A328校正）。第一节 维生素A的分析第37页，共172页。（1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯的测定b.判断法 最大吸收波长在326-329nm之间，且5个波长下的绝对值差值均不超过0.02时，可直接用328nm波长处的测得的吸收度值求得吸收系数。 a.计算吸收度比值（Ai/A328）：与中国药典的吸收

13、度比值相比较，判断每个差值的绝对值是否超过0.02。第一节 维生素A的分析第38页，共172页。b.判断法 a.计算吸收度比值（Ai/A328）：与中国药最大吸收波长在326-329nm之间，计算5个波长下的绝对差值，如果有一个或几个超过0.02，应按以下的方法进行判断： A328校正=3.52（2 A328 A316-A340）第一节 维生素A的分析第39页，共172页。最大吸收波长在326-329nm之间，计算5个波长下的绝对差（1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯的测定）1）方法 取样品适量，精密称定，加环己烷溶解在300、316、328、340、 360nm测吸收度，

14、确定A2）计算 a.吸光系数E1%1cm第一节 维生素A的分析第40页，共172页。（1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯的测定 b.求效价（IU/g）：效价指每g供试品所含维生素的A的国际单位数。 第一节 维生素A的分析1IU=0.344g全反式维生素A醋酸酯 IU/g=第41页，共172页。第一节 维生素A的分析1IU=0.344g全反式维生 第一节 维生素A的分析每克纯品相当多少个单位（IU）?1IU=0.344g全反式维生素A醋酸酯第42页，共172页。第一节 维生素A的分析每克纯品相当多少个单位（IU）?第一节 维生素A的分析第43页，共172页。第一节 维生素A的分

15、析第43页，共172页。第一节 维生素A的分析第44页，共172页。第一节 维生素A的分析第44页，共172页。c.求维生素A占标示量的百分含量AA328或A328校正D供试品的稀释倍数换算因子维生素A醋酸酯在环己烷中1900； 维生素A醇在异丙醇中1830W为平均内容物重量；W为称取内容物重量（供试品取用量）L 比色池厚度标示量为处方中规定的每粒中所含的国际单位数第一节 维生素A的分析第45页，共172页。c.求维生素A占标示量的百分含量AA328或A328校正第 VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的

16、内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为第一节 维生素A的分析第46页，共172页。 VitAD胶丸中VitA的含量测定第一节 维生A300 ：0.354A316 ：0.561A328 ：0.628A340 ：0.523A360 ：0.216A300 /A328 ：0.555A316/A328 ：0.907A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.811A360/A328 ：0.299 求本品中维生素A的含量

17、？第一节 维生素A的分析第47页，共172页。A300 ：0.354A300 /A328 ：0.55A300 /A328 ：0.564A316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.833A360/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 + 0.010.01 0 + 0.02 + 0.04 =第一节 维生素A的分析第48页，共172页。A300 /A328 ：0.5640.555 + 0.0第一节 维生素A的分析第49页，共172页。第一节 维生素A的分析第49页，共172页。适用于维生素A醇（等吸收比法）

18、第一法无法消除杂质干扰时用此法 皂化法、6/7A法 （2）第二法第一节 维生素A的分析第50页，共172页。适用于维生素A醇（等吸收比法） 水溶性脂溶性第一节 维生素A的分析第51页，共172页。水溶性脂溶性第一节 维生素A的分析第51页，共172页 判断max是否在323327nm之间取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算是否第一节 维生素A的分析第52页，共172页。 判断max是否在323327nm之间取未皂化样品采用 判断 A300 /A325 是否大于0.73是否取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算A325(校正)第53页，共172页。 判断 A300 /A325 是否大于0.

19、73是否取未皂化03%3%f第一节 维生素A的分析第54页，共172页。03%3%f第一节 维生素A的分析第54页，共172高效液相色谱法流动相：正己烷异丙醇（9973）检测波长：325nm系统适用性实验考察分离度是否能将维生素A醋酸酯顺式和反式分开第一节 维生素A的分析第55页，共172页。高效液相色谱法流动相：正己烷异丙醇（9973）第一节 三氯化锑比色法max 618nm620nm标准曲线法第一节 维生素A的分析第56页，共172页。三氯化锑比色法max 618nm620nm标准曲线法第一缺点：呈色不稳定 （5 10s内）水分干扰与标准曲线温差1专属性差三氯化锑有腐蚀性优点： 简便 快速

20、第一节 维生素A的分析第57页，共172页。缺点：呈色不稳定 （5 10s内）水分干扰与标准曲线温差小结维生素A共轭多烯醇侧链的环乙烯性质：脂溶性；不稳定，可与三氯化锑呈色鉴别：三氯化锑反应；UV；TLC含量测定： 紫外-分光光度法（三点校正） 三氯化锑比色法第58页，共172页。小结维生素A共轭多烯醇侧链的环乙烯第58页，共172页。AB1CDEVitaminsContents第59页，共172页。AB1CDEVitaminsContents第59页，共17 维生素B1广泛分布于米糠、麦麸和酵母中，具有维持糖代谢及神经传导与消化的正常功能。主要用于治疗维生素B1缺乏症、多发性神经炎及胃肠疾病

21、。第一节 维生素B1的分析第60页，共172页。 维生素B1广泛分布于米糠、麦麸和酵母中，具有维持氨基嘧啶环噻唑环亚甲基氯化4-甲基-3(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)甲基-5-（2-羟基乙基）噻唑鎓盐酸盐结构与性质维生素B1（盐酸硫胺）第61页，共172页。氨基嘧啶环噻唑环亚甲基氯化4-甲基-3(2-甲基-4-氨基第二节 维生素B1的分析结构与性质第62页，共172页。第二节 维生素B1的分析结构与性质第62页，共172页维生素B1为白色结晶或结晶性粉末易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚水溶液呈酸性1. 溶解性性质第63页，共172页。维生素B1为白色结晶或结晶性粉末1. 溶解性性质第63页

22、，共噻唑环、嘧啶环共轭双键12.5g/ml盐酸溶液（9 1000）max = 246nm2.硫色素荧光反应3.UV第64页，共172页。噻唑环、嘧啶环共轭双键max = 246nm2.硫色素荧光杂原子的反应，能与某些生物碱沉淀试剂反应，生成组成恒定的沉淀，可用于鉴别和含量测定。4.与生物碱沉淀试剂反应5.氯化物的特性第65页，共172页。杂原子的反应，能与某些生物碱沉淀试剂反应，生成组成恒定的沉淀与NaOH共热，形成硫化钠，硝酸铅生成黑色沉淀；6.硫元素反应7.红外光谱特征第66页，共172页。与NaOH共热，形成硫化钠，硝酸铅生成黑色沉淀；6.硫元素第67页，共172页。第67页，共172页

23、。二、鉴别试验（一）硫色素荧光反应为维生素B1所特有NaOHH2O第68页，共172页。二、鉴别试验（一）硫色素荧光反应为维生素B1所特有NaO环合O2H硫色素Thiochtome溶于丁醇，显蓝色荧光第69页，共172页。环合O2H硫色素Thiochtome溶于丁醇，显蓝色荧维生素B1第70页，共172页。维生素B1第70页，共172页。VitB1H+H+H+沉淀反应H+第71页，共172页。VitB1H+H+H+沉淀反应H+第71页，共172页。硫元素反应和氯化物反应H+第72页，共172页。硫元素反应和氯化物反应H+第72页，共172页。Company Logo三、含量测定第73页，共17

24、2页。Company Logo三、含量测定第73页，共172页。高氯酸滴定液（0.1mol/L）的滴定度(T)为16.86mg/ml。喹那啶红亚甲蓝(紫红天蓝)非水溶液滴定法第74页，共172页。高氯酸滴定液（0.1mol/L）的滴定度(T)为16.86m紫外分光光度法维生素B1分子中具有共轭双键，在紫外区有吸收10.1M HCl2H203H3PO4 buffer4alcohol246232255第75页，共172页。紫外分光光度法维生素B1分子中具有共轭双键，在紫外区有吸收1注意第76页，共172页。注意第76页，共172页。维生素B1片的测定第77页，共172页。维生素B1片的测定第77页

25、，共172页。片剂、注射剂= 421（每片）相当于标示量的%=A = ECLChP11 标示量% WEA %cm 100D 100平均片重（每ml）相当于标示量的 标示量% VEA %cm 100D 100第78页，共172页。片剂、注射剂= 421（每片）相当于标示量的%=A = ECNaOH硫色素荧光法：维生素B1的专属性反应原理1、第79页，共172页。NaOH硫色素荧光法：维生素B1的专属性反应原理1、第79页2. 方法VitB1铁氰化钾NaOH硫色素异丁醇荧光ex-365nmem-435nm+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇+ NaOH + 异丁醇对照液+ NaOH + 铁氰化钾

26、 + 异丁醇+ NaOH + 异丁醇供试液SdAb第80页，共172页。2. 方法VitB1铁氰化钾NaOH硫色素异丁醇荧光ex-特点3、第81页，共172页。特点3、第81页，共172页。小结维生素B1（盐酸硫胺）氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成季铵盐。性质：水溶性；硫色素反应；可与生物碱沉淀剂反应鉴别：硫色素反应；沉淀反应；Cl、S反应含量测定：非水滴定；紫外分光光度法； 硫色素荧光法第82页，共172页。小结维生素B1（盐酸硫胺）氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连AB1CDEVitaminsContents第83页，共172页。AB1CDEVitaminsContents第83页，共17

27、第三节 维生素C的分析维生素C是胶原蛋白形成所必需的，有助于保持间质的完整，维生素C 缺乏可导致齿龈肿胀，出血，皮下瘀点，关节及肌肉疼痛，毛囊角化，严重缺乏可引起坏血病。所以维生素C又称为抗坏血酸。第84页，共172页。第三节 维生素C的分析维生素C是胶原蛋白形成所必需的，L-抗坏血酸(有生物活性)L-二酮古罗糖酸L-去氢抗坏血酸无生物活性第三节 维生素C的分析结构与性质第85页，共172页。L-抗坏血酸(有生物活性)L-二酮古罗糖酸L-去氢抗坏血酸无C3OH的pKa = 4.17C2OH的pKa = 11.572.酸性一元酸性质1. 溶解性易溶于水，水中呈酸性；略溶于乙醇，不溶于三氯甲烷或乙

28、醚第86页，共172页。C3OH的C2OH的2.酸性一元酸性质1. 溶解性易溶于L(+)抗坏血酸活性最强比旋度+20.5+21.5手性C（C4、C5）3. 旋光性*含有四个光学异构体第87页，共172页。L(+)抗坏血酸手性C（C4、C5）3. 旋光性*含有四有活性有活性无活性4.还原性二烯醇结构第88页，共172页。有活性有活性无活性4.还原性二烯醇结构第88页，共172页。与碱反应5. 水解反应弱碱中生成单钠盐，强碱中水解第89页，共172页。与碱反应5. 水解反应弱碱中生成单钠盐，第89页，共172页第90页，共172页。第90页，共172页。糖类的显色反应50结构与糖类相似6. 具糖的

29、性质五碳糖维生素C第91页，共172页。糖类的显色反应50结构与糖类相似6. 具糖的性质五碳糖维7. UV特征维生素C具有共轭双键第92页，共172页。7. UV特征维生素C具有共轭双键第92页，共172页。利用还原性：与氧化剂的反应鉴别试验第93页，共172页。利用还原性：与氧化剂的反应鉴别试验第93页，共172页。（一）与AgNO3反应去氢抗坏血酸黑色第94页，共172页。（一）与AgNO3反应去氢抗坏血酸黑色第94页，共172页。（二）与2，6 - 二氯靛酚反应氧化型玫瑰红色（酸性）还原型蓝色(碱性)无色第95页，共172页。（二）与2，6 - 二氯靛酚反应氧化型玫瑰红色还原型蓝色(碱第

30、96页，共172页。第96页，共172页。与碱性酒石酸铜反应与KMnO4反应（三）与其他氧化剂反应砖红色沉淀试剂褪色磷钼酸 钼蓝与磷钼酸反应第97页，共172页。与碱性酒石酸铜反应与KMnO4反应（三）与其他氧化剂反应砖红（四）薄层色谱法第98页，共172页。（四）薄层色谱法第98页，共172页。（五）糖类反应H2O-CO2戊糖-3H2O糠醛50蓝色维生素C可在三氯醋酸或盐酸存在下水解、脱羧、生成戊糖，再失水，转化为糠醛，加入吡咯，加热至50 产生蓝色第99页，共172页。（五）糖类反应H2O-CO2戊糖-3H2O糠醛50蓝色维生0.01mol/L HCl（五）紫外光谱法BP 第100页，共1

31、72页。0.01mol/L HCl（五）紫外光谱法BP 第100页杂质检查（一）溶液的澄清度与颜色检查内酯环水解糠醛缩合呈色高于或低于pH.0-6.0空气、光线、温度维生素C脱羧控制有色杂质第101页，共172页。杂质检查（一）溶液的澄清度与颜色检查内酯环水解糠醛缩合呈色高维生素C第102页，共172页。维生素C第102页，共172页。（二）铁、铜离子（三）草酸的检查草酸与金属离子作用形成沉淀；所以对Vc的原料，尤其是注射液，要进行草酸检查；加入CaCl2，比浊法；原子吸收分光光度法第103页，共172页。（二）铁、铜离子（三）草酸的检查草酸与金属离子作用形成沉淀；（二）铁、铜离子原子吸收分光

32、光度法第104页，共172页。（二）铁、铜离子原子吸收分光光度法第104页，共172页。四、含量测定维生素C维生素C制剂碘量法二氯靛酚法紫外分光光度法高效液相色谱法第105页，共172页。四、含量测定维生素C维生素C制剂碘量法二氯靛酚法紫外分光光度指示剂 淀粉指示液（一）碘量法原理：利用Vc强的还原性HAc第106页，共172页。指示剂 淀粉指示液（一）碘量法原理：利用Vc强的还原性 取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于

33、8.806mg的C6H8O6。2、方法原料药第107页，共172页。 取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水1（2）酸性环境 稀醋酸 （1）新沸冷H2O减慢VitC被O2氧化速度（3）立即滴定 赶走水中O2，减少O2的干扰3、注意事项第108页，共172页。（2）酸性环境 稀醋酸 （4）附加剂干扰的排除片剂 过滤注射剂 抗氧剂 丙酮甲醛Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 第109页，共172页。（4）附加剂干扰的排除片剂 过滤注射剂 抗氧剂 （二）2，6 - 二氯靛酚滴定法快速滴定，专属性强，用于含Vit C的制剂与食品分析自身指示终点1. 原理第110页，共172

34、页。（二）2，6 - 二氯靛酚滴定法快速滴定，专属性强，用于含V2. 方法第111页，共172页。2. 方法第111页，共172页。（2）快速滴定 2min内 （1）酸性环境 HPO3-HAc 稳定VitC防止其他还原性物质干扰（3）亦可剩余比色测定 （定量过量）（测剩余染料）3.注意事项第112页，共172页。（2）快速滴定 2min内 （4）二氯靛酚不稳定，须临用前配制并标定专属性强，多用于含 Vc的制剂和食品的分析配制方法：NaHCO3 42mg+水50 ml，加二氯靛酚钠二水合物0.5g +水200 ml,过滤，即得。标定方法：用干燥的维生素C对照品进行标定第113页，共172页。（4

35、）二氯靛酚不稳定，须临用前配制并标定专属性强，多用于含 （三）高效液相色谱法人血浆中VitC浓度的HPLC法测定第114页，共172页。（三）高效液相色谱法人血浆中VitC浓度的HPLC法测定第1第115页，共172页。第115页，共172页。第116页，共172页。第116页，共172页。小结维生素C（L抗坏血酸） 烯二醇结构性质：水溶性；酸性；旋光性；还原性；水解性 糖类性质；紫外吸收特性鉴别：硝酸银反应；二氯靛酚钠反应； 氧化反应；TLC；糖类反应；紫外杂质检查：澄清度与颜色检查 铁、铜离子检查 草酸检查含量测定：碘量法；二氯靛酚滴定法； 高效液相色谱 第117页，共172页。小结维生素

36、C（L抗坏血酸） 烯二醇结构第117页，共1AB1CDEVitaminsContents第118页，共172页。AB1CDEVitaminsContents第118页，共1SourcesSunlightFoodsFortified MilkFish Oils Deficiency佝偻病牙齿松动鸡胸骨质疏松脚成弓形 Function 促进钙、磷的吸收；促进骨骼和牙齿的正常生长；调节柠檬酸的代谢第四节 维生素D的分析第119页，共172页。SourcesSunlight Deficiency佝偻病 胆甾醇7-脱氢胆甾醇维生素 D3 (胆骨化醇) 维生素 D2(麦角骨化醇)麦角甾醇 维生素D是一类抗

37、佝偻病维生素的总称，目前有10多种，都是甾醇衍生物。第120页，共172页。胆甾醇7-脱氢胆甾醇维生素 D3 (胆骨化醇) 维生素 D2 维生素D2 维生素D3第四节 维生素D的分析维生素D2、D3无色针状结晶或白色结晶性粉末；无臭，无味；遇光或空气均易变质。第121页，共172页。 维生素D2 溶解性:维生素D2在三氯甲烷中极易溶解,在丙酮乙醇乙醚中易溶；维生素D3在乙醇、丙酮、三氯甲烷或乙醚极易溶解；二者均在植物油中略溶，在水中不溶。不稳定性:毒性增强.含有多个烯键，所以极不稳定，宜氧化变质，效价降低，毒性增强。第四节 维生素D的分析第122页，共172页。 溶解性:维生素D2在三氯甲烷中

38、极易溶解,在丙酮乙醇乙醚中易旋光性:有五到六个手性碳原子,均具有旋光性. 维生素D2 6个手性碳原子 维生素D3 5个手性碳原子 第四节 维生素D的分析第123页，共172页。旋光性:有五到六个手性碳原子,均具有旋光性.第四节 维生素显色反应 甾类化合物氯仿溶液 黄色 红色 紫色 绿色紫外吸收特性 无水乙醇 265nm 维生素D2 为460490 维生素D3 为465495醋酐硫酸E1cm1%E1%1cm第124页，共172页。醋酐E1cm1%E1%1cm第124页，共172页。二、鉴别试验 （一）显色反应1与醋酐-浓硫酸反应 氯仿溶液 黄色 红色 紫色 绿色醋酐硫酸2与三氯化锑反应 本品1,

39、2-二氯乙烷 三氯化锑试液 橙红色 粉红色 第125页，共172页。二、鉴别试验 （一）显色反应1与醋酐-浓硫酸反应 氯仿溶液3其它显色反应 维生素D 三氯化铁 橙黄色 二氯丙醇 乙酰氯 绿色 第126页，共172页。3其它显色反应 维生素D 三氯化铁 橙黄色 二氯丙醇绿色 （二）比旋度鉴别无水乙醇溶液 维生素D2 比旋度为102.5至107.5 维生素D3 比旋度为105至112 第127页，共172页。（二）比旋度鉴别无水乙醇溶液 维生素D2 比旋度为102.（三）其它鉴别方法 薄层色谱法、HPLC法制备衍生物测熔点 紫外、红外吸收光谱 第128页，共172页。（三）其它鉴别方法 薄层色谱

40、法、HPLC法紫外、红外吸收光谱（四）维生素D2、D3的区别反应维生素D2 维生素D3 96%乙醇 10ml 取0.1ml 乙醇1ml和85%硫酸5ml 红色max570nm 黄色 max495nm 第129页，共172页。（四）维生素D2、D3的区别反应维生素D2 维生素D3 96三、杂质检查（一）麦角甾醇的检查维生素D290%乙醇溶液 洋地黄皂苷溶液 不得发生浑浊或沉淀 第130页，共172页。三、杂质检查（一）麦角甾醇的检查维生素D290%乙醇溶液 （二）前维生素D的光照产物第131页，共172页。（二）前维生素D的光照产物第131页，共172页。（三）有关物质检查第132页，共172页

41、。（三）有关物质检查第132页，共172页。Ch.P NP-HPLC含量测定USP34-NF29化学法色谱法微生物法BP 化学法色谱法光谱法四、含量测定第133页，共172页。Ch.P NP-HPLC含量测定USP34-NF29正相高效液相色谱法 （一）维生素D测定法 含量以单位表示每单位相当于维生素D 0.025g 注意：计算的是维生素D及前维生素D经折 算成维生素D的总量第134页，共172页。正相高效液相色谱法 （一）维生素D测定法 含量以单位表示注意 固定相：硅胶 流动相：正己烷正戊醇（997：3） 检测波长：254nm第一法：用于无维生素A醇及其他干扰的供试品第二法：(1)皂化提取

42、;(2)净化用色谱柱系统分离收集维生素D，得供试品溶液B;(3)按第一法进行测定。第三法：当样品经皂化提取及净化用色谱系统分离收集后，前维生素D峰仍受干扰时，采用此法。第135页，共172页。 固定相：硅胶第一法：用于无维生素A醇及其他干扰的供试品第1小结维生素D抗佝偻病维生素的总称性质：脂溶性；不稳定；旋光性； 显色反应；紫外鉴别：显色反应；比旋度； VD2、VD3区别杂质检查：麦角甾醇； 前维生素D光照产物；有关物质含量测定： 三法第136页，共172页。小结维生素D抗佝偻病维生素的总称第136页，共172页。AB1CDEVitaminsContents主要讲解第137页，共172页。AB

43、1CDEVitaminsContents主要讲解第137第五节 维生素E的分析维生素E早在20世纪20年代就被人们发现，Evans和他的同事在研究生殖过程中发现，酸败的猪油可以引起大鼠的不孕症。是与生育有关的维生素的总称1936 年分离出结晶体1938 年被瑞士化学家人工合成维生素E的显微照片维生素E胶囊第138页，共172页。第五节 维生素E的分析维生素E早在20世纪20年代就被维生素E类结构与相对活性名称R1R2烃链相对活性-生育酚CH3CH3C16H331.0-生育酚CH3HC16H330.5-生育酚HCH3C16H330.2-生育酚HHC16H330.1-生育酚CH3HC16H270.

44、5第139页，共172页。维生素E类结构与相对活性名称R1R2烃链相对活性-生育酚C维生素E的结构2R*(4R*,8R*)-3,4-二氢-2,5,7,8-四甲基-2-(4,8,12-三甲基十三烷基)-2H-苯并吡喃-6-醇醋酸酯 -生育酚醋酸酯第140页，共172页。维生素E的结构2R*(4R*,8R*)-3,4-二氢-2生物效价 右旋体 ： 消旋体 = 1.4 ：10（天然品）（合成品）第141页，共172页。生物效价（天然品）（合成品）第141页，共172页。维生素E的性质性状:黄色或金黄色粘稠状透明液体脂溶性:溶于丙酮、乙醇、乙醚或植物油等有机溶剂中水溶性:不溶于水稳定性:无氧时对热、酸

45、稳定，对碱不稳定， 对氧敏感，遇光可被氧化，色渐变深， UV：乙醇溶液中max284nm第142页，共172页。维生素E的性质性状:黄色或金黄色粘稠状透明液体 UV：乙醇溶（一）硝酸反应二、鉴别试验生育酚HNO3（橙红色）生育红维生素E在硝酸酸性条件下，水解生成生育酚水解第143页，共172页。（一）硝酸反应二、鉴别试验生育酚HNO3（橙红色）生育红维生三氯化铁联吡啶反应O（二）第144页，共172页。三氯化铁联吡啶反应O（二）第144页，共172页。生育酚对-生育醌红色Fe3+O第145页，共172页。生育酚对-生育醌红色Fe3+O第145页，共172页。max = 284nmmin = 2

46、54nm0.01%无水乙醇中UV法（三）第146页，共172页。max = 284nmmin = 254nm0.01%无薄层板 硅胶G展开剂 环己烷 -乙醚（4 ：1）显色剂 硫酸（105 5） TLC法（四）VitE Rf = 0.7-生育酚 Rf = 0.5-生育醌 Rf = 0.9第147页，共172页。薄层板 硅胶G展开剂 环己烷 -丙酸睾酮第77页，共172页。1mol/L）至显粉红色，再加本品2.第48页，共172页。（等吸收比法）判断 A300 /A325 是否大于0.第一节 维生素A的分析D供试品的稀释倍数可用紫外分光光度法测定含量的第一节 维生素A的分析第161页，共172页

47、。第128页，共172页。第116页，共172页。标定方法：用干燥的维生素C对照品进行标定第85页，共172页。维生素E合成过程2,3,5-三甲基对二苯酚植醇+-生育酚-生育酚醋酸酯 三、杂质检查 第148页，共172页。丙酸睾酮维生素E合成过程2,3,5-三甲基对二苯酚植醇+- 三、杂质检查 （一）酸度游离醋酸第149页，共172页。 三、杂质检查 （一）酸度游离醋酸第149页，共172页。（二）生育酚 硫酸铈滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黄灰紫） 利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈 三、杂质检查 1.原理2.试剂第150页，共172页。（二）生育酚 硫第151页，共17

48、2页。第151页，共172页。问药典中规定的维生素E中所含的游离生育酚的限量是多少？计算每ml硫酸铈滴定液（0.01mol/L）相当于0.002154g的游离生育酚第152页，共172页。问药典中规定的维生素E中所含的游离生育酚的限量是多少？计算第2.15限量第153页，共172页。2.15限量第153页，共172页。(三)有关物质的检查第154页，共172页。(三)有关物质的检查第154页，共172页。(四)残留溶剂：环己烷的检查第155页，共172页。(四)残留溶剂：环己烷的检查第155页，共172页。四、含量测定GC法（一）GC特点1、选择性好灵敏度高速度快分离效能好挥发性低、不稳定、极性强衍生化。易受样品蒸气压限制第156页，共172页。四、含量测定GC法（一）GC特点1、选择性好挥发性低、不稳定载气N2固定液硅酮（OV-17）担体硅藻土或高分子多孔小球柱温265检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标正三十二烷 n 500 R2内标法加校正因子定量2