慢性ITP时脾脏的形态学及免疫组化研究

1、慢性ITP时脾脏的形态学及免疫组化研究【摘要】目的研究ITP时脾脏的病理形态及免疫组化特点。方法应用光镜观察36例ITP脾脏的形态特征；用免疫组化S-P法检测D3、D4、D8、D20、D41、D43、D45R、D68、P53和PNA在ITP脾脏组织中的表达情况。结果本组男女之比为0.19:1，男性平均年龄24.5岁，女性平均年龄32.6岁。脾脏呈轻度肿大。主要组织学改变是白髓滤泡反响性增生，生发中心扩大，滤泡周边带增宽，中央动脉壁增厚、纤维化，微血管增生。D8+细胞多于D4+T淋巴细胞；含血小板抗原的D41+和D43+淋巴细胞主要分布于生发中心；PNA+淋巴细胞在红、白髓中均呈弥漫而密集分布；

2、D68+组织细胞数量较正常增多，T、B淋巴细胞和组织细胞呈增殖现象。结论ITP脾D8+淋巴细胞明显高于D4+淋巴细胞和T、B淋巴细胞及组织增生现象提示辅助T淋巴细胞亚群比例失调和功能异常。DEX治疗ITP能有效缓解病情。【关键词】特发性血小板减少症；脾脏；病理学；免疫组织化学hrniidipathithrbytpenipurpura:apathlgiandiunhistheialstudyfthespleen【Abstrat】bjetiveTinvestigatethepathrphlgialandiunheialfeaturesfthespleeninidipathithrbytpenipu

3、rpura.ethdsLightirspyasusedtstudytherphlgiharateristisf36asesfthespleeninidipathithrbytpenipurpura.TheexpressinfD3,D4,D8,D20,D41,D43,D45RD68,P53andPNAprtEineredetetedinallasesithS-Piunhistheialethd.ResultsTheratifthealeithfealeis0.19:1.Theaverageagefthealesis24.5yearsld.Theaverageagefthefealesis32.6

4、yearsld.ThesplenegalyfthehrniITPisl-grade.Theainpathlgihangeisreativeflliularhyperplasiafthehitepulpandgerinalentralenlargingandbradenfthearginalzne.Thethikandfibrsisallsfiddlespleenarteries.TheD8+lyphytesD4+lyphytes.ThelyphyteshihexpressplatlateantigenD41andD43ainlydistributeintheenterftheflliulasa

5、rea.PNApsitivelyphyteslateddifusslyanddenselyinredpulpandhitepulp.TheinreasingnuberfellssuggeststheprliferatinfTandBellsandhistytes.nlusinInITPpatients,abnraldistributinfTlyphytesubsetsandhangesftheprliferatinfTandBlyphytesandhistytesayiplythedysfuntinfTh1/Th2.TreatentithDEXhasbenefiialeffetfITP.【Ke

6、yrds】idipathithrbytpenipurpura;spleen;pathlgy;iunhistheistry慢性特发性血小板减少症ITP是常见出血性疾病之一，发病机理与免疫异常有关，血循环中存在抗血小板抗体使血小板破坏过多，同时还作用于骨髓巨核系细胞，影响其增殖、分化及成熟过程1。本研究用免疫组化方法对破坏血小板的重要器官与场所的脾脏检测D系列单克隆抗体的表达，以期进步对本病的认识程度。1材料与方法11标本来源搜集我院1996年1月2022年6月间ITP患者行外科手术治疗脾切除标本36例；另选10例因创伤性脾破裂而手术切除的正常脾标本作对照研究。12方法标本经10%甲醛固定，石蜡包

7、埋，4厚连续切片，H.E染色，每张切片均再次经2位副高以上医师复检结果一致为最终诊断。鼠抗人P53抗体、D系列抗体、PNA单克隆抗体和S-P试剂盒超敏购自福州迈新生物技术开发。每例标本分别标记上述抗体，DAB显色，以PBS缓冲液0.01l/L,pH7.4代替第一抗体作阴性对照；分别用对P53高表达的肺癌组织和对D系列高表达的淋巴结作阳性对照。2结果21临床资料共获ITP脾36例，男6例，女30例，男女之比为0.19:1，男性平均年龄24.5岁2565岁；女性平均年龄32.6岁2650岁。所有病例均以全身皮肤弥漫散在瘀点或瘀斑或紫癜为首发病症，育龄妇女那么长期月经过多。实验室检查：血小板计数在3

8、080109/L之间，其中1例血小板只有12109/L。血红蛋白和红细胞计数大多减少，多呈小细胞低色素缺铁性贫血；白细胞计数正常；出血时间大多延长，而凝血时间正常；骨髓像均见巨核细胞显著增多，以颗粒性巨核细胞和裸核为主，产血小板巨核细胞少见。用酶联免疫荧光法检测血小板相关抗体：PAIgG增高33例，占91.6%；PAIg增高8例，占22%，且常伴较严重出血；T8细胞百分值增高，而T4细胞比值下降。本组临床上均排除继发性血小板减少，诊断ITP明确。本组均因内科治疗不满意而行脾切除术，术后第5天平均应用地塞米松40g/d左右，血小板上升维持在60150109/L。22形态学观察221巨检脾脏有不同

9、程度肿大，大小范围为13168946；重量为115185g。外表光滑，包膜无增厚，切面脾小结明显，无出血、坏死。222镜检主要表现为：1白髓滤泡反响性增生，生发中心扩大，滤泡边缘带增宽，其内见浆细胞浸润，经激素治疗后的病例滤泡呈退行性变化，数量减少，生发中心不明显，滤泡周边带无增宽，细胞数量减少；2脾窦扩张、淤血，红髓内可见多少不等嗜中性粒细胞浸润，局部聚集成片；3脾索内可见吞噬红细胞及血小板的巨噬细胞；4中央动脉管壁增厚、纤维化，多见年长者，并有PAS阳性物质沉着；5约半数病例出现轻度髓样化生；6微细血管密度增加；7红髓中组织细胞增生，可见泡沫细胞形成。223免疫表型D3+和D45R+T淋巴

10、细胞分布弥漫而密集；D20+B细胞主要分布于滤泡套区和边缘区及生发中心内；D8+T淋巴细胞明显多于D4+T淋巴细胞图1；D68+组织细胞明显多于正常对照组图2；含血小板抗原D41+和D43+淋巴细胞主要分布于生发中心；P53+淋巴细胞分布弥漫且多呈弱阳性；PNA+淋巴细胞在红、白髓均呈弥漫分布。3讨论ITP是一种由自身抗体引起的血小板破坏过多的自身免疫性疾病2。主要在脾脏产生抗血小板抗体，属IgG型3；脾又是破坏血小板的重要场所。切除脾可去掉产生抗体的器官和破坏血小板的场所，使外周血中的血小板上升。我们认为，对内科治疗无效的慢性型患者应尽早脾切除以进步疗效。而对ITP的儿童一定要慎重，因为儿童

11、有自愈的可能，要严格掌握手术指征。本组脾切除后，临床疗效满意和确切，多数病例获得持续缓解。ITP是由脾产生的大量IgG引起的4。抗体包被的血小板由于被网状内皮系统的细胞快速去除而寿命短暂，特别是脾和肝。包被较重的血小板由肝吞噬细胞去除；而包被较轻的血小板那么通过肝再经脾而被去除5；因此，脾脏是破坏血小板的重要器官和场所。可见脾切除能有效阻断血小板的破坏。本组病例脾切除后48h血小板明显上升，经2年随访，不需激素长期维持，血小板根本保持在正常范围。近年研究说明，自身免疫性疾病的发生与机体免疫内环境平衡紊乱有关，而辅助T细胞Th与抑制T细胞Ts亚群间的平衡是维持免疫内环境稳定的中心环节。研究结果显

12、示6，ITP患者外周血D8+细胞百分率显著增高，D3+、D4+细胞明显减少，D4+/D8+下降。Th与Ts亚群比例失调，Th与Ts之和明显超过总T细胞，说明外周血中存在D4+、D8+双标记细胞，真正的D8+细胞减少。相关分析结果，D4+/D8+与IL-2呈显著正相关，血小板计数与D8+细胞百分率呈显著负相关，并发现ITP患者T细胞亚群比例失调是IL-2活性降低的始动因素。提醒细胞免疫功能异常与ITP的开展、转归有显著关系。细胞毒性T细胞在ITP中的作用很早就被学者重视，ybran和Fudenbery7认为局部ITP患者检测不到自身抗体有可能因为存在多种致病机制。Handin8也认为血小板自身抗

13、体复合物一旦在体内激活淋巴细胞，这些激活的淋巴细胞就可对血小板产生细胞毒性破坏作用。这就可以局部解释为何在经脾切除和激素治疗后有的患者始终存在持续的血小板破坏。而rit等8研究也提示细胞介导的血小板破坏可能是细胞毒性T细胞直接作用于血小板的结果。最近lssn等9发现细胞毒性T细胞的血小板破坏作用可能是慢性ITP患者发病中的一个重要机制，在此研究中，利用DNA芯片技术扫描活动期、缓解期ITP患者以及正常人的D3+细胞，发现许多细胞毒性基因Apa/Fas、粒酶A、粒酶B和穿孔素和Th1反响相关基因IFN-2、受体等在ITP患者中的表达明显高于正常对照组。认为细胞毒性细胞和自然杀伤NK细胞通过诱导细

14、胞凋亡而扮演了破坏血小板的重要角色9。本组研究显示脾组织中D4+、D8+细胞和D68+树突状细胞均有不同程度增生，而D8+细胞明显多于D4+淋巴细胞，与外周血淋巴细胞相关研究2相似，提示T细胞亚群与免疫递呈细胞的平衡紊乱是ITP细胞免疫功能异常导致血小板破坏的重要因素。本文图片略【参考文献】1inesDB,BlannehetteVA.Iunethrbytpenipurpura.NEngJed，2002,346:995-1008.2范磊，阮长耿.特发性血小板减少性紫癜发病机制.苏州医药,2022，324：357-359.3Hayes，JabsP，dL，etal.Spleeniinpathlgyi

15、niunethrbytpenia.JlinPathl,1985,38:985-988.4JiangDY，LiY.iunhistheialstudyfthespleeninhrniiunethrbytpenipurpuraithspeialreferenethyperplastifllilesandfayarphages.ArhPathlLabed,1995,1999,533-537.5arrakP，KapplerJ，KtzinBL，etal.Autiunedisease:hyandhereurs.Natureed,2001，7:899-905.6ilsnBS，DelrithTL，Janus-likerlefregulalatryinNKTellinautiunediseaseandtuuriunity.NatRevIun