黄藤素片微生物检验方法验证中加菌方法的比较研究

1、黄藤素片微生物检验方法验证中加菌方法的比拟研究【关键词】微生物方法验证；抑菌作用；离心法摘要目的：比拟黄藤素片微生物方法验证中的加菌方法不同，所出现的回收率差异。方法：采用离心法薄膜过滤法弃除黄藤素片中的抑菌成分。结果：离心前参加阳性对照菌所得回收率非常低，采用薄膜过滤法的阳性对照菌所得回收率可达70%以上，两者有显著性差异。结论：薄膜过滤法最后一次冲洗参加阳性对照菌仅能说明黄藤素片的抑菌作用可采用离心薄膜过滤法弃除，而不能反映该药品在消费、运输、贮藏过程所污染的微生物。关键词微生物方法验证；抑菌作用；离心法薄膜过滤法AstudyntheirbilgyverifyingtestfHuangte

2、ngsutabletithbaterialputinAbstratbjetive:TparethedifferentreveryratesresultedfrdifferentethdsinputtingbaterialinirbilgyverifyingtestfHuangtengsutablet.ethds:TheentrifugalizatinandebranefiltratinereusedtgetridfthepnentsrestrainingbaterialfrHuangtengsutablet.Results:Thereveryratefthebaterialputintdrug

3、befreentrifugalizatinasevidentlydifferentfrthatafterthelastashingfebanefiltratin.nlusins:Theresultfputtingbaterialintdrugafterebranefiltratinayntillustratesebaterialntainatedinprdutin,transprtatinandgarner.Keyrdsirbilgyverifyingtest;Bateristasisfuntin;Theentrifugalizatinandebranefiltratin2022版?中国药典?

4、在药品微生物限度检验方法项下增加了方法学验证的内容，特别对有抑菌作用的药品指出可采用离心沉淀集菌法、薄膜过滤法或结合使用这些方法消除抑菌作用，并要求阳性菌的参加方法是最后一次滤膜冲洗时。针对黄藤素片的抑菌情况，笔者采用离心薄膜过滤法消除其抑菌，并就其参加阳性对照菌的方法进展了比拟，发现参加阳性对照菌的方法不同，所得到的回收率差异是非常显著的。1材料和方法1.1试验材料1.1.1样品黄藤素片分别由玉溪维和制药批号20220113，样品1、昆明制药批号20220452，样品2、云南滇池制药批号20220701，样品3提供。1.1.2稀释剂及培养基无菌磷酸盐缓冲液pH7.2按药典配制，TT营养琼脂培

5、养基、营养肉汤培养基1均来源于北京三药科技开发公司。1.1.3阳性对照菌大肠杆菌B44102、金黄色葡萄球菌B26003、枯草芽孢杆菌(B)63501、白色念珠菌F980011，2，由中国药品生物制品检定所提供。1.2方法1.2.1供试品的制备分别取样10g，匀浆后参加无菌磷酸盐缓冲液pH7.2至100L，制成110供试液备用1。1.2.2阳性菌液制备取相应菌株的营养琼脂培养基斜面新颖培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，培养1820h后用无菌磷酸盐缓冲液pH7.2稀释至相应的浓度1，备用。1.2.3试验组分别汲取110约含50100个/L阳性菌的供试液10L，置无菌离心管中，经500r/i

6、n离心5in后，以无菌操作取上清液1L置无菌磷酸盐缓冲液pH7.2100L中，参加装有直径为50、孔径为0.450.02的微孔滤膜的过滤器内，减压抽干后，用无菌磷酸盐缓冲液pH7.2冲洗滤膜3次，每次50100L，取出滤膜，按上述操作分别进展5次，各置5皿，再注入约45的TT营养琼脂培养基约15L，混匀，37培养48h后计数。1.2.4试验组分别汲取110供试液10L置无菌离心管中，经500r/in离心5in后，以无菌操作取上清液1L置无菌磷酸盐缓冲液pH7.2100L中，参加装有直径为50孔径为(0.450.02)的微孔滤膜的过滤器内，减压抽干后，用无菌磷酸盐缓冲液pH7.2冲洗滤膜3次，每

7、次50100L，最后一次冲洗时同时参加1L约含50100个/L阳性菌菌液，取出滤膜，按上述操作分别进展5次，各置5皿，再注入约45的TT营养琼脂培养基约15L，混匀，37培养48h后计数。1.2.5供试品对照组分别汲取110的供试液10L，经500r/in离心5in后，以无菌操作取上清液1L置无菌磷酸盐缓冲液pH7.2100L中，摇匀，以无菌操作参加装有直径为50孔径为0.450.02的微孔滤膜的过滤器内，减压抽干后，用无菌磷酸盐缓冲液pH7.2冲洗滤膜3次，每次50100L，取出滤膜，按上述操作分别进展5次，各置5皿，再注入约45的TT营养琼脂培养基约15L，混匀，37培养48h后计数。1.

8、2.6阳性对照组取制备好的约含50100个/L的阳性菌菌液1L，置于平皿中，分别置5皿，再注入约45的TT营养琼脂培养基约15L，混匀，37培养48h后计数。1.2.7阴性对照组取试验用的稀释液10L，照上述离心薄膜过滤法操作，作为阴性对照。2结果2.1药典常规方法结果采用2022年版?中国药典?1常规方法检测三个批号黄藤素片阳性菌回收率，在110的稀释级仅只有大肠杆菌加菌的回收率能到达70%以上，而在110、1100的稀释级参加其他三种标准菌，其回收率均远远低于70%。说明样品有很强的抑菌作用，因此黄藤素片的微生物限度检测不能采用常规方法检测。2.2不同加菌方法阳性对照菌回收率由于金黄色葡萄

9、球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌在110、1100的回收率无法到达药典要求，且黄藤素片中含有一定的辅料，故改用离心薄膜过滤法测定。不同加菌方法阳性对照菌回收率结果见表1、表2。表1试验组阳性对照菌回收率略表2试验组阳性对照菌回收率组别略3讨论采用离心薄膜过滤法消除黄藤素片的抑菌作用，假设在离心前参加阳性对照菌，4种阳性标准菌的回收率非常低，这可能与离心沉降以及操作转移过程中阳性菌的损失和黄藤素片供试液对阳性菌液存活率的影响有关。在薄膜过滤的最后一次冲洗时参加阳性菌，上述4种阳性菌的回收率均到达70%以上。两种方法回收率的差距甚远。在薄膜过滤法最后一次冲洗时参加阳性对照菌，尽管回收率已到达了中国药典2022版微生物限度检验验证方法的要求，但这仅只能说明该药品的抑菌作用可采用离心薄膜过滤法去除，而不能反映该药品在消费、运输、贮藏过程中污染的微生物，因为所污染的微生物可能在弃除抑菌的处理过程中有损失。尽管采用离心薄膜过滤法弃除药品中的抑菌作用是非常有效的处理方法，但笔者认为本法仅考虑到消除药品的抑菌作用而忽略了采用该法可能导致药品在消费、运输、贮藏过程污染的微生物在处理过程中损失的情况。鉴于微生物的特殊性，目前微生物检验方法非常局