酶活力计算公式

1、固态发酵漆酶活性测定：酶液制取：5g发酵样品以1:20（ W/V）比例用蒸馏水悬浮，200 r/min 摇 3h，之后 5000 r/min 离心20min。 （上清用0.45 m 滤纸过滤，于-20保存滤液，取能整除的滤液体积用于漆酶活性测定。）酶活反应体系3.0mL（ 2.3mL 0.2mol/L 醋酸 -醋酸钠缓冲液；pH=4.50.5mL粗酶液稀释液；0.2mL 1mmol/L 的 ABTS）420nm处测定吸光值的变化。此实验固态发酵漆酶活性计算公式：U(/g) TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark3 o Current Document N V总OD

2、 420 103100mLU(/g)V酶36000 T L 0.5mL 5gN：酶液稀释倍数总 : 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）酶 : 反应添加的酶液体积（mL）OD420: t 时间内反应液在420nm 处吸光度的增加值36000: 420nm处 ABTS 氧化态的摩尔吸光系数（L/mol cm）T：反应时间（min）L 为比色皿的直径（cm） 。100mL/（0.5mL 5g）：固态变成液态的稀释倍数0.5mL0.5mLU（/ g）N：酶液稀释倍数液态发酵漆酶活性测定：酶活反应体系3.0mL（ 2.3mL 0.2mol/L 醋酸 -醋酸钠缓冲液；pH=4.5粗酶液稀释液；0.2m

3、L 1mmol/L 的 ABTS) TOC o 1-5 h z NV总OD420103总V酶36000 T LV 总 : 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）V 酶 : 反应添加的酶液体积（mL） OD420: t 时间内反应液在420nm 处吸光度的增加值36000: 420nm处 ABTS 氧化态的摩尔吸光系数（L/mol cm）T：反应时间（min）L 为比色皿的直径（cm） 。固态发酵锰过氧化物酶(MnP)活性测定：酶液制取：粗酶液制备发酵过程中每隔2 d 取 5 g 发酵物于250 mL 三角瓶中， 加入100 mL H2O， 在 200 r / min 的摇床中振荡提取3 h，

4、之后 5000 r/min离心20min。 (用滤纸过滤后，取滤液用于测定MnP 酶活性。 )在 4 mL 反应体系中含50 mmol/L( pH 4 5) 的乳酸钠缓冲液3. 4 mL， 1.6 mmol/L 的硫酸锰溶液0. 1 mL， 酶液 0. 4 mL， 预热至 37 时， 加 1. 6 mmol/ L 的 H2O2溶液0. 1 mL 启动反应。在238 nm 紫外光处，测定反应4 min 内OD238差值。在对照组中，以煮沸灭活15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液，其他反应物不变。每分钟使1 mol/L的 Mn2 +转化为Mn3 +所需的酶量为 1 个酶活力单位(

5、 U) 。 ( 238 = 6.5mM-1.cm-1)此实验固态发酵MnP 活性计算公式： TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark12 o Current Document N V总OD238 103100mLU(/mL) 总 238V酶6500 T L 0.4mL 5gN：酶液稀释倍数总 : 漆酶酶活测定反应体体系的终体积(mL)酶 : 反应添加的酶液体积(mL) OD420: t 时间内反应液在420nm 处吸光度的增加值6500: 238nm 处 Mn2 +转化为Mn3 +摩尔吸光系数(L/mol cm)T：反应时间(min)L：比色皿的直径(cm)100m

6、L/(0.4mL 5g)：固态变成液态的稀释倍数液态发酵锰过氧化物酶（MnP）活性测定：锰过氧化物酶（MnP）活性测定在 4 mL 反应体系中含50 mmol/L（ pH 4 5） 的乳酸钠缓冲液3. 4 mL， 1.6 mmol/L 的硫酸锰溶液0. 1 mL， 酶液 0. 4 mL， 预热至 37 时， 加 1. 6 mmol/ L 的H2O2溶液0. 1 mL 启动反应。在238 nm 紫外光处，测定反应4 min 内OD238差值。在对照组中，以煮沸灭活15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液，其他反应物不变。每分钟使1 mol/L的Mn2 +转化为Mn3 +所需的酶量为

7、 1 个酶活力单位（ U） 。 （ 238 = 6.5Mm-1.cm-1）此实验固态发酵MnP 活性计算公式：U(/ mL)N V OD 10 3U(/ mL) TOC o 1-5 h z 总238V酶6500 T LN：酶液稀释倍数V 总 : 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）V 酶 : 反应添加的酶液体积（mL） OD420: t 时间内反应液在420nm 处吸光度的增加值6500: 238nm处 Mn2 +转化为Mn3 +摩尔吸光系数（L/mol cm）T：反应时间（min）L：比色皿的直径（cm）LiPLiP）活性测定：酶液制取：5g 发酵样品以1:20（ W/V） 比例用蒸馏水悬

8、浮，200 r/min 摇 3h，之后 5000 r/min 离心20min。 （上清用0.45m 滤纸过滤，于-20保存滤液，取能整除的滤液体积用于木质素过氧化物酶活性测定。）测酶活：3mL 反应混合液包括3.4mL 酒石酸钠（250mM， pH 3.0） ， 0.1mL10mM 藜芦醇， 0.4mL 酶样品。在30 1下温浴5min 后，于反应加入0.1mL10mM H2O2启动酶促反应，以煮沸灭活15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液作对照，测 OD310（3 10= 9.3 103M-1cm-1）处反应5min 前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）的定义：每mi

9、n 氧化藜芦醇生成1 M 藜芦醛消耗的酶量。此实验固态发酵LiP 活性计算公式：3 TOC o 1-5 h z N V总OD31010100mLU（/ mL）V酶9300 T L 0.4mL 5gN：酶液稀释倍数总 : 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）酶 : 反应添加的酶液体积（mL） OD420: t 时间内反应液在420nm 处吸光度的增加值9300: 310nm 处摩尔吸光系数（L/mol cm）T：反应时间（min）L：比色皿的直径（cm）100mL/（0.4mL 5g）：固态变成液态的稀释倍数液态发酵木质素过氧化物酶（液态发酵木质素过氧化物酶（LiP）活性测定：测酶活：3mL 反应混合液包括3.4mL 酒石酸钠（250mM， pH 3.0） ， 0.1mL10mM 藜芦醇，0.4mL 酶样品。在30 1下温浴5min 后，于反应加入0.1mL10mM H2O2启动酶促反应，以煮沸灭活15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液作对照，测 OD310（ 310= 9.3 3M10-1cm-1）处反应5min 前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）的定义：每min 氧化藜芦醇生成1 M 藜芦醛消耗的酶量。此实验固态发酵LiP 活性计算公式：U(/mL)NVU(/mL)NV总OD310103V酶93