药物分析：维生素类药物的分析课件

1、维生素类药物的分析维生素类药物的分析2022/9/262本章要求掌握不同维生素的结构特点和主要性质掌握维生素A、B、C、E的主要分析方法了解维生素类药物分析方法的操作要点2022/9/242本章要求掌握不同维生素的结构特点和主要性 VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12、泛酸、叶酸) VitC、烟酸、烟酰胺维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质 人体不能合成维生素 VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性水溶性 V-H 维生素A醇-COCH3 维生素A醋酸酯-COC15H31 维生素A棕榈酸酯R : 维生素A（维生素A1、视黄

2、醇）-H 维生素A醇R :环己烯共轭多烯侧链UV多异构体易被氧化结构分析环己烯共轭多UV结构分析维生素A 325.5 100% 新维生素Aa 328 75%新维生素Ab 320.5 24%新维生素Ac 310.5 15%异维生素Aa 323 21%异维生素Ab 324 24% 相对生物效价维生素A 325.5 环氧化物VitA醛VitA酸环氧化物VitA醛VitA酸三氯化锑反应UVTLC 鉴别试验三氯化锑反应 鉴别试验1. 三氯化锑反应条件 无水（使得三氯化锑水解） 无醇（使得碳正离子电荷消失）CHCl3紫红蓝色3SbClVitA不稳定碳正离子1. 三氯化锑反应条件 无水（使得三氯化锑水解）C

3、HC5个共轭双键max为326nm一个吸收峰2. UV法6个共轭双键max为350390nm三个吸收峰溶剂：无水乙醇-盐酸（100:1）5个共轭双键2. UV法6个共轭双键溶剂：无水乙醇-盐酸（1药物分析：维生素类药物的分析课件紫外分光光度法三氯化锑比色法 HPLC法 含量测定紫外分光光度法 含量测定“三点校正法”由来 UV法（三点校正法）测定依据：分子结构中共轭多烯体系，具有紫外吸 收特性，在325-328nm呈现选择性吸收 但是混有多种杂质（异构体、氧化产物等杂质）在310340nm波长范围内有吸收干扰紫外测定故采用“三点校正法”消除干扰“三点校正法”由来 1、杂质的吸收在310340nm

4、范围内呈一条直线 随波长的增大而吸收度变小 2、物质对光的吸收具有加和性 即样品各波长的吸收度是维生素A与杂质 吸收度的代数和 测定原理选择在三个波长处测定吸光度，结合校正公式计算A校正，再计算含量 1、杂质的吸收在310340nm范围内呈一条 波长（三点）选择（1） 1 VitA的max（328nm）（2） 2 3 分别在1的两侧各选一点 第一法 第二法 波长（三点）选择测定对象: VitA醋酸酯 第一法 等波长差法1 = 328nm2 = 316nm3 = 340nm测定对象: 第一法 等波长差法1 = 328nm测定波长 300、316、328、340、360等波长差法 校正公式 测定波

5、长 300、316、328、340、360等波长测定对象: VitA醇 第二法 等吸收度法(皂化法)1 = 325nm2 = 310nm3 = 334nm测定对象: 第二法 等吸收度法(皂化法)1 = 325n等吸收度法（6/7吸收度法）校正公式 测定波长 300、310、325、334第一法无法消除杂质干扰时用此法等吸收度法（6/7吸收度法）校正公式 测定波长 300维生素A含量是用生物效价表示 单位 IU/g（国际单位）换算因数 计算要求维生素A含量是用生物效价表示换算因数 计算要求1g维生素A醋酸酯相当的国际单位数为 1g维生素A醇相当的国际单位数为 1g维生素A醋酸酯相当的国际单位数为

6、 1g维生素A醇相当的国(VitA酯)(VitA醇)换算因数(VitA酯)(VitA醇)换算因数第一法测定维生素A醋酸酯时，换算因素为1900第二法测定维生素A醇时，换算因素为1830 换算因数由纯品计算而得第一法测定维生素A醋酸酯时，换算因素为1900第二法测定维生应用：维生素A胶丸的测定，求标示量A328或A 328校正 03%15%3%第二法第二法应用：维生素A胶丸的测定，求标示量A328或A 328校正 维生素E生育酚*R1、R2均为CH3R1、R2为H和CH3R1、R2均为H生物效价 右旋体 ： 消旋体 = 1.4 ：10（天然品）（合成品）乙酰化（生育酚醋酸酯） 维生素E生育酚*R

7、1、R2均为CH3生物效价 结构：dl生育酚醋酸酯游离生育酚还原性水解维生素E结构：dl生育酚醋酸酯游离生育酚还原性水解维生素E 硝酸反应 鉴别试验水 解橙红色HNO3强氧化剂邻醌结构7515 硝酸反应 鉴别试验水 解橙红色HNO3强氧化剂邻醌结 三氯化铁联吡啶反应O弱氧化剂 三氯化铁联吡啶反应O弱氧化剂原理利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈 杂质检查 铈量法检查游离生育酚1 : 2 反应摩尔比硫酸铈滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黄灰紫）原理利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈 杂质药典规定取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，用（0.01mol/L）硫酸铈液

8、滴定，消耗硫酸铈液1.0ml，限量2.15药典规定取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，用（0.0 含量测定 GC法特 点选择性好灵敏度高速度快分离效能好挥发性低、不稳定、极性强衍生化易受样品蒸气压限制ChP 维生素E原料及其制剂 含量测定 GC法特 点选择性好挥发性低、不稳定 气相色谱法 ChP 内标法加校正因子 内标物 正三十二烷 固定相 硅酮（OV17） 检测器 氢火焰离子化检测器 气相色谱法 ChP供试液（样品+内标）对照液（对照+内标）内标法加校正因子校正因子：含量计算：供试液（样品+内标）对照液（对照+内标）内标法加校正因子校正BP GC 内标 正三十二烷 R1.4USP GC

9、 内标 十六酸十六醇酯 R1.0JP HPLC 外标 dl生育酚 R1.4BP GC USP GC J氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱)HClCl- 维生素B1盐酸硫胺UV氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱)HClCl- 维生素还原性碱性与生物碱非水碱量法还原性碱性与生物碱ChP 鉴别试验 硫色素反应荧光消失正丁醇蓝色荧光H+OH-碱性ChP 鉴别试验 硫色素反应荧光消失正丁醇蓝色荧光HVitB1H+H+H+H+ 沉淀反应VitB1H+H+H+H+ 沉淀反应非水溶液滴定法UV法硫色素荧光法 含量测定非水溶液滴定法 含量测定 非水溶液滴定法滴定前需加入过量醋酸汞溶液(为什么？)噻唑环上的季铵和嘧啶环上

10、氨基，反应摩尔比1：2 ChP 原料药 非水溶液滴定法滴定前需加入过量醋酸汞溶液(为什么？) UV法共轭双键结构，UV特征紫外吸收峰随pH变化而变化 溶剂 pH max 水 7 232-3 345 盐酸 2 246 421ChP 片剂、注射剂 UV法共轭双键结构，UV特征 溶剂 pH 含量计算（每片）相当于标示量的%=规格g/片g（每ml）相当于标示量的%=规格g/mlml含量计算（每片）相当于标示量的%=规格g/片g（每ml）相当手性CUV己糖结构-内酯 维生素CL抗坏血酸手性CUV己糖结构 维生素CL抗坏血酸烯二醇强还原性酸性烯二醇酸性 鉴别试验与氧化剂的反应糖类的反应UV 鉴别试验与氧化

11、剂的反应 与氧化剂的反应 与氧化剂的反应与2,6 - 二氯靛酚反应ChP（2010）氧化型玫瑰红色还原型蓝色OH与2,6 - 二氯靛酚反应ChP（2010）氧化型玫瑰红色还与碱性酒石酸铜反应与KMnO4反应与AgNO3反应ChP（2010）与碱性酒石酸铜反应与KMnO4反应与AgNO3反应ChP（2 UVBP0.01mol/L HCl UVBP0.01mol/L HCl碘量法2,6 - 二氯靛酚滴定法HPLC 含量测定碘量法 含量测定淀粉指示液，终点至蓝色不消失原理 碘量法具有较强还原性，可被氧化H+反应摩尔比11（原料、片剂、注射液）淀粉指示液，终点至蓝色不消失原理 碘量法具有较强还原性，可

12、方法Vc +新沸放冷H2O + 稀HAc 溶解 立即用标准I2滴定至Blue淀粉指示液讨论新沸放冷H2O减少水中O2对测定的影响减慢VitC被O2氧化速度稀HAc,立即滴定附加剂干扰的排除片剂 滑石粉 过滤丙酮甲醛注射剂 抗氧剂 焦亚硫酸钠方法Vc +新沸放冷H2O + 稀HAc 溶计算 W标示量V注射剂原料药、片剂、注射剂 ？1计算 W标示量V注射剂原料药、片剂、注射剂 ？1例：维生素C注射液（规格2ml：0.1g）的含量测定：精密量取本品2ml，加水15ml与丙酮2ml，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4ml与淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.1003mol/L）滴定，至溶液显兰色并持续30秒钟

13、不褪，消耗10.56ml。每1ml碘滴定液（0.1mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6。计算维生素C注射液的标示量%。 W标示量V注射剂1例：维生素C注射液（规格2ml：0.1g）的含量测定：精密量 2,6 - 二氯靛酚滴定法USPJP原理方法自身指示终点法 溶液显玫瑰红色时，即为终点玫瑰红 无色还原 2,6 - 二氯靛酚滴定法USPJP原理方法自身指示终点快速滴定 2min内 酸性环境 HPO3-HAc 稳定VitC防止其他还原性物质干扰并非维生素C的专一反应讨论快速滴定 2min内 例多种维生素片中VitA、 VitB1、VitB2 、VitB6 、烟酰胺、VitC、VitE的含量测定色谱柱 ODS流动相 A、水 -甲醇（4 ：1） B、甲醇检测波长 272nm 280nm HPLC法对象 制剂、生物样品、果汁 梯度洗脱例多种维生素片中VitA、 VitB1、VitB2 、Vit一、维生素A（共