去除蛋白质的好方法

1、去除蛋白质的好方法 安捷伦Captiva ND作者： Mike Chang安捷伦样品制备应用化学家要想使用 LC/MS/MS 分析生物基质中的化合物，首先要去除其中的蛋白质。到目前为止， 最常用的方法是先沉淀， 再离心分离。 然而该方法涉及很多手动操作步骤，不能有效实现高通量。现在，安捷伦 Captiva ND 的出现改变了这一现状。它能够实现 96 孔过滤板的自动化孔内沉淀，从而大幅节省时间、成本和人力。隆重推出安捷伦Captiva ND 独特的无滴落技术简化操作安捷伦 Captiva ND 是一种新型的蛋白质沉淀过滤板，采用无滴落技术以简化操作。 Captiva ND 采用专门设计的过滤材

2、料，能够有效锁住用于沉淀的有机溶剂使其不滴落， 从而防止样品损失， 实现可靠的自动化方法。 需要您手动操作的步骤只有加入生物样品、 与有机溶剂混合使蛋白质沉淀， 然后施加真空过滤掉沉淀的蛋白质。 短短几分钟内便可得到无颗粒无蛋白的样品， 用时为离心分离法的五分之一。为了证实Captiva ND的优越性能，我们使用 安捷伦ZORBAX Eclipse Plus超高压快速高分离度色谱柱（RRHD ）和安捷伦 1290 Infinity液相色谱仪 ，对 受体阻滞剂进行LC/MS/MS分析，将该方法和离心分离法进行了比较。图 1 为使用 Captiva ND 的样品制备方法； 图 2 为离心分离法。

3、图 3 列出了液相色谱条件。图 1.使用 0.45 m 、 10 mg 的安捷伦 Captiva图 2. 使用离心分离法去除蛋白质。图3. 液相色谱条件。 ( 放大 图片 )ND 96孔过滤板（部件号 A5969045 ）去除蛋白质。(放大 图片)稳定性实验表明Captiva ND是高通量环境的理想选择长时间连续进样的稳定性实验（longevity experiment）是证明生物样品清洁程度最简单有效的方法。将通过Captiva ND 制备的样品进行5,000次连续进样的稳定性实验，同时监测保留时间、质谱峰面积计数和背压( 图 4to 6 ).图 4. 安捷伦 Captiva ND稳定性实验

4、的系 图 5.安捷伦 Captiva ND 制备的样品进行图 6. 安捷伦 Captiva ND 制备的 受体阻统背压数据。 ( 放大 图片 )5,000次连续进样得到的保留时间数据。( 放 滞剂加标血浆样品的质谱峰面积计数数据。( 放大图片)大图片)5000次进样的稳定性实验证实在高通量环境下， Captiva ND 的可重现的操作流程能够提供一致的样品处理和可靠的过滤回收率，同时背压、保留时间和质谱信号等检测参数始终保持稳定。无可争辩的省时优势与离心分离法相比，Captiva ND表现出了易用和省时两大优势（( 表 1) .用时用时Captiva ND*( 分离心分离法( 分钟)钟)将 0

5、.2 mL加标血浆样品和0.6 mL乙将 0.2 mL加标血浆样品和 0.6 mL乙腈腈 + 0.1%甲酸加入到 Captiva ND5+ 0.1%甲酸加入到离心管或空的96 孔板596 孔过滤板内内用移液枪将每个孔内的溶液混合5 次以 10000 rpm离心10 分钟11将上清液转移到2 mL进样样品瓶中（如果将进样板直接转移到色谱仪上进行分析0使用的是离心管） 或新的空 96 孔板上（如果10使用的是微孔板）进行分析使用 Captiva ND制备样品所需的总时5使用离心分离法制备样品所需的总时间26间使用 Tomtec 或 Hamilton 等自动化系统实现自动化。表 1 . 与离心分离法相比，安捷伦Captiva ND能够节省宝贵时间。Captiva ND的用时仅为离心分离的五分之一，采用无滴落设计，能够有效保留样品，免去了多步手动操作。因此，使用 Captiva ND 替代离心分离不仅可以节省时间，还能大幅缩减培训以及样品成本。自动化Captiva ND 最佳高通量解决方案安捷伦 Captiva 过滤板是高通量实验室的理想解决方案。 它们可以轻易实现自动化，独特的无滴落设计