针药结合治疗糖尿病性周围神经病变大鼠的实验研究

1、针药结合治疗糖尿病性周围神经病变大鼠的实验研究【摘要】目的研究针药结合治疗对实验性糖尿病性周围神经病变(DPN)的防治作用。方法采用随机分组设计，将大鼠分为模型组、电针组、穴位注射组、针药结合组，运用链脲佐菌素造成实验性DPN大鼠模型，用神经电生理方法观察坐骨神经传导速度，用电镜观察神经纤维的超微构造。结果针药结合治疗组与模型组、电针组、穴位注射组相比，感觉传导速度(SNV)、运动传导速度NV均有所改善(P0.05)，但未到达正常组的程度；针药结合治疗组大鼠坐骨神经轴突变性、脱髓鞘程度有所减轻。结论针药结合治疗法对实验性糖尿病周围神经病变具有一定的防治效果。【关键词】糖尿病周围神经病变坐骨神经

2、传导速度针药结合糖尿病周围神经病变diabetiperyneurpathy,DPN是糖尿病常见的慢性并发症和主要的致残因素之一。目前尚无特效治疗方法治疗糖尿病周围神经病，以往在临床中用针药结合治疗DPN获得了较好的临床疗效1。本实验通过观察针药结合治疗对糖尿病大鼠坐骨神经构造和神经传导速度的影响，验证针药结合治疗对糖尿病周围神经病变的防治作用。1材料与仪器1.1动物选用4月龄安康雄性清洁级istar大鼠90只，体重200220g，购自中国科学院上海动物实验中心答应证号码：SXK(沪)20220003。常温常湿环境中饲养。1.2药物与试剂链脲佐菌素STZ购自美国Siga产品，批号S-0130；柠

3、檬酸、柠檬酸三钠、水合氯醛、甲醛、多聚甲醛购自上海试剂一厂；雪莲注射液：新疆中药厂第二分厂消费。1.3仪器电子天平，上海天平仪器厂出品；强生稳豪型血糖仪，上海强生公司出品；神经电生理检测仪，edtrni,Keypint,Denark；DK-8D型电热恒温水槽，上海医用恒温设备厂出品；石蜡切片机，德国Li公司R2145KN；透射电镜，日立H-600。2方法完全随机分组设计，对照实验。2.1动物模型制备及分组造模前大鼠禁食过夜，次日用STZSTZ溶于0.1l/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，冰浴中新颖配制按55g/kg剂量腹腔内一次注射参照施新猷?医学动物实验方法?诱导糖尿玻1周后，用血糖仪测定尾尖血血

4、糖，测血糖前禁食过夜，血糖15l/L断定为糖尿病鼠。实验前监测血糖，血糖15l/L的大鼠予以剔除。正常对照大鼠仅腹腔注射等体积的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。常规喂养4周，随机选取10只D大鼠，进展血糖、体重、温度阈值和神经传导速度检测，与造模前大鼠比拟以空腹血糖15l/L、坐骨神经SNV、NV明显减慢、摆尾温度阈值升高及坐骨神经有髓纤维形态学改变，为实验性DPN大鼠模型。造模成功后，按随机数字表法随机分为模型组、电针组、穴位注射组、针药结合组，每组15只。正常组与模型组不作任何治疗，电针组、穴位注射组和针药结合治疗组给予相应治疗，剩余大鼠备用。2.1.1电针组15只取穴：肾俞双、足三里双。穴位定位

5、参照?实验针灸学?2。接G6805-型电针治疗仪，连续波，频率2Hz，电流强度以刺激部位皮肌微颤为度，20in/次，1次/2d，共治疗12次。2.1.2穴位注射组15只用雪莲注射液于上述穴位注射，每次轮换取1穴，每穴0.1l，治疗次数同上。2.1.3针药结合组15只详细方法和治疗次数先同电针组，起针后治疗再同穴位注射组。2.1.4模型对照组15只不作任何治疗，只作与治疗组一样的固定。2.1.5正常对照组15只选正常istar大鼠，作与治疗组一样的固定。2.2指标检测2.2.1一般工程观察各组大鼠造模前及造模后4周、8周的血糖、体重变化。2.2.2摆尾温度阈值造模前及造模后4周、8周将鼠尾浸入水

6、中约2，当水温增高而尾摆动并露出水面时记录水温，此时水温为摆尾温度阈值(TailflikThreshldTeperature，TTT)。2.2.3电生理测定造模前及造模后4，8周，用10水合氯醛将大鼠麻醉，在麻醉状态下用神经电生理检测仪检测大鼠右侧坐骨神经传导速度。运动神经传导速度检测NV：第1刺激部位在坐骨窝，第2刺激部位在踝部内侧，均用两个针电极经皮插入，电极间距为2，接地于尾部，保持皮温30，用方形波1020A，40s脉波宽刺激神经,用两个针电极在同侧的足部第2趾骨间肌记录复合肌肉动作电位，记录3对不同波的埋伏期,取平均值，近端和远端埋伏期作为运动神经在两个刺激部位间的传导时间，用弯角规

7、测量两个刺激部位间的间隔 。感觉神经传导速度检测SNV：第1刺激部位在坐骨窝，第2刺激部位在踝部内侧，均用2个针电极在第2趾骨间肌经皮插入，电极间距为2,接地于尾部。保持皮温30，用方形波2A，40s脉波宽记录6个在坐骨窝和踝部激发H反射埋伏期，取最短埋伏期差值，用弯角规测量两个刺激部位间的间隔 。SNV/s=间隔 /埋伏期差值。2.2.4坐骨神经形态学观察水合氯醛将大鼠麻醉，无菌操作取模型组、3组治疗组大鼠和正常组大鼠左侧坐骨神经，取梨状肌下缘坐骨神经约0.1，放入2.5%戊二醛溶液中固定2h后，冲洗、1%锇酸固定液固定、乙醇和丙酮梯度脱水，然后用11包埋剂和100%丙酮浸透2h，再放入包埋

8、剂中浸透2h，放入聚合器中进展聚合，使用LKB-V切片机进展切片，用醋酸铀染色30in，柠檬酸铅染色15in，使用日立H-600电镜进展电镜观察。2.3统计分析采用SPSS11.0统计软件进展统计学分析。计量结果以s表示，计量资料差异比拟采用方差分析和q检验。转贴于论文联盟.ll.3结果3.1各组大鼠一般情况观察3.1.1各组大鼠体重比照观察(见表1)。各组大鼠造模前体重比拟无显著性差异P0.05。造模4周后，模型组、电针组、穴位注射组、针药结合组大鼠体重下降，与正常组比拟具有显著性差异P0.01。模型组、电针组、穴位注射组、针药结合组治疗前后体重无显著性差异P0.05，正常组8周后体重增加，

9、与4周比拟具有显著性差异P0.01。表1各组大鼠体重比照观察略4周与正常组比拟，*P0.01；8周与4周比拟，P0.013.1.2各组大鼠血糖比照观察见表2。各组大鼠造模前血糖比拟无显著性差异P0.05。造模4周后，模型组、电针组、穴位注射组、针药结合组与正常组比拟具有显著性差异P0.01。8周后电针组、穴位注射组、针药结合组与模型组比拟无显著性差异P0.05。表2各组大鼠血糖比照观察略4周与正常组比拟，*P0.01；8周与4周比拟，P0.013.1.3各组大鼠摆尾温度阈值比照观察见表3。各组大鼠造模前温度阈值比拟无显著性差异P0.05。造模4周后，模型组、电针组、穴位注射组、针药结合组大鼠摆

10、尾温度阈值升高，与正常组比拟具有显著性差异P0.01。电针组、穴位注射组、针药结合组治疗后，大鼠摆尾温度阈值降低。电针组、穴位注射组、针药结合组治疗后与模型组8周后比拟具有显著性差异P0.01，针药结合组与穴位注射组、电针组治疗后组间比拟具有显著性差异P0.01。表3各组大鼠摆尾温度阈值观察略4周与正常组比拟，*P0.01；8周与4周比拟，P0.013.2各组大鼠神经传导速度比拟见表4。8周后，模型组、电针组、穴位注射组、针药结合组与正常组比拟NV降低，均具有显著性差异P0.01；模型组、电针组、穴位注射组、针药结合组与正常组比拟SNV降低，均具有显著性差异P0.01或P0.05；电针组、穴位

11、注射组、针药结合组与模型组比拟NV、SNV升高，具有显著性差异P0.01；电针组与穴位注射组NV、SNV比拟，无显著性差异P0.05；针药结合组与电针组、穴位注射组NV、SNV比拟，有显著性差异P0.05。证实电针、穴位注射、针药结合对DPN大鼠周围神经病变NV、SNV具有良好的调整作用，使减慢的运动和感觉神经传导速度均进步，针药结合组治疗效果优于电针组、穴位注射组。表4各组大鼠治疗后神经传导速度比拟略与正常组比拟，*P0.01，*P0.05；与模型组比拟，P0.01；治疗组间比拟，P0.05，P0.05；n=153.3各组大鼠坐骨神经超微构造变化正常组(图1a，b横切面)：有髓神经纤维髓鞘致

12、密、均匀、构造完好、规那么、髓鞘板层呈同心圆状排列，轴索无萎缩及肿胀。模型组(图1，d，横切面)：大鼠坐骨神经有髓神经纤维髓鞘构造模糊、松散、排列紊乱，出现空泡状缺损，板层间隙扩大、板层别离。电针组(图1e，f横切面)：大鼠坐骨神经有髓神经纤维的髓鞘构造趋完好态规那么，空泡状缺损减少，构造排列较整齐，轴索无明显肿胀。穴位注射组(图1g，h横切面)：大鼠坐骨神经有髓神经纤维髓鞘构造松散，有空泡状缺损，板层间隙扩大、板层别离。针药结合组(图1i，j横切面)：大鼠坐骨神经有髓神经纤维的髓鞘构造趋完好态规那么，构造排列较整齐，空泡状缺损明显减少，轴索无明显肿胀。4讨论糖尿病D已成为严重威胁人类安康和生

13、命的常见并多发病，糖尿病周围神经病变diabetiperipheralneurpathy,DPN是糖尿病的最常见的慢性并发症和主要的致残因素之一。是在D的根底上发生所引起的一种疾病，是由代谢紊乱和供血障碍为主综合作用的结果35，临床呈对称性疼痛和感觉异常，下肢病症较上肢多见。神经传导速度是检测糖尿病神经功能最常用指标，它主要代表大的有髓纤维的功能。神经传导速度减慢是糖尿病出现神经病变的一个前兆。临床上许多DPN病人在出现明显的运动、感觉障碍之前已有明显的神经传导速度减慢6。在实验性DPN研究中也发现，STZ诱导的糖尿病大鼠在糖尿病早期坐骨神经NV、SNV显著减慢，并随病程延长进一步减慢7。我们

14、观察发现，DPN大鼠造模4周后，神经传导速度NV和SNV明显减慢，治疗后电针组、穴位注射组、针药结合组神经传导速度NV和SNV与模型组比拟均有显著进步，治疗组组间比拟，针药结合组对NV和SNV调节疗效优于电针组、穴位注射组，提示针药结合对改善糖尿病周围神经病变的试剂传导速度具有一定作用，其作用优于单用电针及穴位注射治疗。糖尿病周围神经病变时神经功能的改变先于并伴随神经解剖损害的开展，而神经病理形态学观察可以微观地反映神经构造受损的部位、性质和程度，说明其影响神经功能的内机制。临床上糖尿病患者并发周围神经病变时，在神经传导速度出现减慢的同时，往往伴有神经纤维组织脱髓鞘改变及轴索不同程度的损害，主

15、要表现为髓鞘肿胀、脱失，轴索变性、萎缩，有髓纤维丧失和神经再生障碍8，9。本研究发现，糖尿病大鼠4周时，坐骨神经均有明显的形态学改变，以髓鞘构造模糊、松散、排列紊乱，出现空泡状缺损，板层间隙扩大、板层别离为特点，治疗后针药结合组的大鼠坐骨神经髓神经纤维的髓鞘构造排列较整齐，空泡状缺损明显减少，明显改善髓鞘组织构造，且作用优于电针组、穴位注射组，提示其对坐骨神经有一定的修复作用。DPN的主要临床表现是在D的病症根底上又见肢体麻木、疼痛、无力、肌肉萎缩等，与中医“痹证“痛证“痿证描绘相似10。DPN的病位在经络，与肾的关系最为亲密，病变的性质为本虚标实，虚实夹杂之证。DPN的病变过程是一个由虚致衰

16、、或由虚致实，渐至虚实夹杂、病情渐重的开展演变过程。肾阴、肾气、肾阳的虚衰性改变和经络生理功能的渐进性受损始终是这一过程中病机的主导方面，它决定DPN病症构成。针药结合治疗糖尿病周围神经病变主要立足于辨证论治，从整体出发，疏通经络、调和脏腑、益气活血，作用于DPN致病因素的众多环节，标本兼治，在多层次上发挥作用。综上所述，糖尿病大鼠早期即并发神经病变，其损伤程度随病程而加重。糖尿病4周大鼠已有明显的神经功能障碍并出现形态学改变，说明STZ诱导的糖尿病大鼠病程4周时已并发DPN。DPN以“肾之气阴两虚为发病根底，以“肾之阴阳两虚，经络涩滞不畅为病机本质，“根据治病必求于本，治疗调补肾之阴阳、疏通

17、经络气血，选取肾俞、足三里穴及药物雪莲穴位注射具有益气养阴、活血通络、扶正补虚的作用，实验研究结果证实了肾俞、足三里结合药物雪莲穴位注射具有良好的防治糖尿病周围神经病变的作用，疗效优于单用电针及穴位注射治疗，为临床针药结合治疗DPN的奠定了一定的实验基矗【参考文献】1郑蕙田.针药结合治疗糖尿病周围神经病变52例J.上海针灸杂志,2000,19(1):8.2林文注.实验针灸学.上海：上海科学技术出版社，1994：286.3NangleR,GibsnT,tterA,etal.Effetfeugenlnnerveandvasulardysfuntininstretztin-diabetiratsJ.

18、Plantaed2022，72(6):494.4ZieglerD,Siekierka-KlEiserE,eyerB,etal.Validatinfanvelsreeningdevie(NeurQuik)frquantitativeassessentfsallnervefiberdysfuntinasanearlyfeaturefdiabetiplyneurpathyJ.Diabetesare，2022，28(5):1169.5SinsZ,FeldanEL.UpdatendiabetineurpathyJ.urrpinNeurl，2002，15(5):595.6GryzEA,SzererP,Galika-LatalaD,etal.Diagnsisandassessentfdiabetinephrpathy.LiteraturerevieandauthrsbservatinsJ.PrzeglLek，2022，61(1):25.7LauriaG,LbardiR,Brgna,etal.Intraepideralnervefiberdensityinratftpad:neurpathlgi-neurphysilgirrelatinJ.JPeripherNervSyst，2022，10(2):202.8NardneA,Shieppati.Grupspindl