高效液相色谱法测定独活中二氢欧山芹醇当归酸酯的含量

1、高效液相色谱法测定独活中二氢欧山芹醇当归酸酯的含量【摘要】目的建立独活药材与饮片中二氢欧山芹醇当归酸酯的HPL分析方法。方法采用ShisEid18G(4.6250，5)色谱柱，以乙腈-水(4951)为流动相，流速1lin-1，检测波长330n，柱温30。结果二氢欧山芹醇当归酸酯在0.00361.536gl-1呈良好的线性关系，r=0.9999，平均回收率为99.1%(RSD=2.8%)。22批不同产地独活药材与饮片中二氢欧山芹醇当归酸酯的质量分数在0.058%0.778%，平均值0.178%。结论该方法简单、重复性好，可用于独活的质量控制。【关键词】独活;二氢欧山芹醇当归酸酯;高效液相色谱Ab

2、strat：bjetiveTdevelpaquantitativeethdfrdeterinatinflubianadininRadixAngeliaePubesentis.ethdsThesaplesereseparatedat30naShisEId18G(5，4.6250)lunelutedithaetnitrile-ater(4951)asthebilephase.Flrateassetat1.0lin-1andthedetetinavelengthassetat330n.ResultsThealibratinurveaslinearithintherangefr0.0036t1.536

3、gl-1(r=0.9999)andtheaveragereveryas99.1%(RSD=2.8%).22bathesfthedrugspurhasedfrdifferentareaseredeterinedandthententsflubianadininRadixangeliaepubesentisereflutuatedfr0.058%t0.778%.nlusinTheethdissiple,repeatableandanbeusedfrthequalityntrlfRadixAngeliaePubesentis.Keyrds：RadixAngeliaePubesentis;lubian

4、adin;HPL独活为常用中药，为伞形科植物重齿毛当归Angeliapubesensaxi.f.biserrataShanetYuan的根，具有祛风除湿、通痹止痛之成效，用于治疗风寒湿痹、腰膝疼痛、少阴伏风头痛1。药理研究说明，独活中的香豆素类成分具有抑制血小板聚集、抗炎、镇痛等作用2，3。对独活及其制剂中甲氧基欧芹素等香豆素类成分的含量测定已有文献报道47，但尚未见对独活药材和饮片(又称二氢欧山芹素，lubianadin)含量测定的相关报道。现行?中国药典?以蛇床子素作为指标成分建立独活药材的定量分析方法，但蛇床子素并非独活的特征性成分，缺乏专属性。本研究选择二氢欧山芹醇当归酸酯为指标成分，

5、建立了独活药材和饮片(净片)的高效液相色谱含量测定方法，具有一定的专属性，并测定了22批不同产地独活药材和饮片中二氢欧山芹醇当归酸酯的含量，为完善独活的质量标准提供了实验数据，对保证其质量具有重要意义。1仪器与试药高效液相色谱仪(日本岛津公司，包括四元泵、自动进样器、柱温箱、检测器、工作站);乙腈(色谱纯，德国erk公司);水(纯洁水);其它试剂均为分析纯(国药集团化学试剂)。二氢欧山芹醇当归酸酯对照品由上海中药标准化研究中心制备，经HPL检测纯度98%。独活药材10批，饮片(净片)12批，由上海中药标准化研究中心吴立宏博士搜集并鉴定，标本保存在上海中药标准化研究中心。2方法与结果2.1色谱条

6、件Shiseid18G色谱柱(4.6250，5);流动相为乙腈-水(4951);检测波长330n;流速1.0lin-1;柱温30;进样量10l。理论板数按二氢欧山芹醇当归酸酯计算应不低于5000。对照品和样品的HPL图见图1。2.2对照品溶液的制备精细称取二氢欧山芹醇当归酸酯对照品适量，加甲醇制成每毫升含50g的溶液，即得。2.3供试品溶液的制备取样品粉末约0.5g，精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加甲醇20l，密塞，称定重量，超声提取30in，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。A-对照品B-样品1-二氢欧山芹醇当归酸酯图1对照品及样品的HPL图谱2.4线性关

7、系考察取二氢欧山芹醇当归酸酯对照品适量，精细称定，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成含二氢欧山芹醇当归酸酯1.5gl-1对照品贮备溶液。分别精细汲取不同体积的对照品储藏溶液，制成不同浓度的系列溶液，按上述色谱条件测定，进样10l，分别以对照品的浓度(X)为横坐标，峰面积积分值(Y)为纵坐标，得回归方程为Y=25776X-2.4136，r=0.9999，线性范围0.00361.536gl-1。2.5检测限和定量限取对照品溶液，用甲醇依次稀释制成系列浓度由高到低的溶液，测得二氢欧山芹醇当归酸酯的检测限(S/N=3)为0.06gl-1，定量限(S/N=10)为0.2gl-1(RSD=2.7%)。转贴

8、于论文联盟.ll.2.6精细度实验取同一供试品溶液，在上述色谱条件下连续进样6次，测得二氢欧山芹醇当归酸酯色谱峰面积的RSD为0.5%，精细度良好。2.7重复性实验取同一样品6份，精细称定，按“2.3项下操作，在上述色谱条件下进样测定，测得二氢欧山芹醇当归酸酯色谱峰单位峰面积RSD为1.4%。2.8稳定性实验取同一样品粉末约0.5g，精细称定，按“2.3项下操作，在上述色谱条件下，分别于0，1，8，24，48，72h进样分析，测得二氢欧山芹醇当归酸酯色谱峰面积的RSD为0.8%，说明样品溶液在72h内稳定。2.9加样回收实验取含量的独活粉末9份，精细称定，分别按含量的50%，100%和150%

9、3个程度参加二氢欧山芹醇当归酸酯对照品，按“2.3项下操作，在上述色谱条件下进样测定，平均回收率为99.1%(RSD=2.8%)。2.10样品测定分别取独活样品粉末约0.5g，精细称定，按“2.3项下操作，制成供试品溶液。分别精细汲取对照品溶液与供试品溶液各10l进样分析，计算含量。结果见表1。3讨论本研究建立了独活中二氢欧山芹醇当归酸酯的HPL含量测定法，并测定了22批独活药材和饮片(净片)中二氢欧山芹醇当归酸酯的含量，方法简便，稳定可靠，重复性好，可用于独活的质量控制。表1独活中二氢欧山芹醇当归酸酯的含量测定结果N.商品名产地/搜集地质量分数(%)1独活药材四川菘藩0.1462独活药材湖北

10、恩施0.0913独活药材甘肃0.0924独活药材湖北巴东0.2855独活药材湖北巴东0.7786独活药材四川成都阿坝0.0927独活药材安徽0.1168独活药材四川0.0819独活药材四川0.20210独活药材四川0.17311独活饮片四川菘藩0.15612独活饮片湖北恩施0.10913独活饮片甘肃0.11014独活饮片四川/亳州足珍0.30615独活饮片甘肃/河南中原正信0.09716独活饮片四川/哈尔滨三棵树0.21417独活饮片河北安国0.05818独活饮片湖南0.34219独活饮片安徽0.08120独活饮片四川0.09121独活饮片上海0.12822独活饮片上海0.171n=3不同批次

11、独活中二氢欧山芹醇当归酸酯的质量分数在0.058%0.778%，均值0.178%，按均值下浮50%计算，其中质量分数在0.089%以上的样品占86.4%，为独活新质量标准的制定提供参考。在供试品溶液制备方法上，对提取溶剂(正己烷、乙醇、甲醇)、提取方法(冷浸、超声振荡、直接回流)、提取时间(15，30，45，60in)和提取溶剂量(10，20，30，40倍)进展考察，最终确定提取方法为20l甲醇超声提取30in。耐受性试验中，对不同色谱柱(ShisEid18G，VARIANPlaris18-A，UltiateXB-18，UltiateAQ-18;5，4.6250)进展考察，结果均符合含量测定要求，耐受性良好。【参考文献】1国家药典委员会.中国药典，部S.北京：化学工业出版社，2022：185.2柳江华，徐绥绪，姚新生.独活的化学成分与药理研究进展J.沈阳药学院学报，1994，11(2)：143.3吴雅娜，栾立标.独活有效成分大鼠在体单向灌流肠吸收J.药学学报，2022，43(1)：102.4王志安，王晓丹，李志明.人参败毒胶囊质量标准的研究J.中国实验方剂学杂志，2001，7(