高效液相色谱法测定炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量

1、高效液相色谱法测定炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量【摘要】目的利用高效液相色谱HPL法测定炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量。方法色谱柱为YG-182504.6，10)，以乙腈-5%醋酸水6535)为流动相，检测波长为250n，流速为1.0lin-1。结果甘草次酸对照品浓度在9.375300gl-1范围内线性关系良好，回归方程：A=31.545-82.030(n=6,r=0.9991)，炙甘草加样回收率为99.81%；炙甘草汤为100.28%。结论HPL法准确可靠，可为控制炙甘草和炙甘草汤质量提供检测根据。【关键词】炙甘草；炙甘草汤；甘草次酸；高效液相色谱法Abstrat：bjetiveTdet

2、erinetheglyyrrhetinintentsinZhiGanartandZhiGanaDetinbyHPL.ethdsYG-18lun(2504.6，10)asusedithAetnitrileand5%Aetiaid-aterasbilephase.Thedetetinavelengthas250n,andtheflrateas1.0lin-1.ResultsThelinearrelatinshipasgdintherangef9.375300gl-1.Theregressinequatinas:A=31.545-82.030(n=6,r=0.9991),theaveragereve

3、ryratefZhiGanaiandZhiGanadetinere99.81%and100.28%respetively.nlusinHPLethdisaurateandvaluablefrthequalityntrlfZhiGanaandZhiGanadetin.Keyrds：ZhiGana;ZhiGanadetin;Glyyrrhetiniaid;HPL炙甘草汤出自汉代张仲景的?伤寒论?，为治疗“心动悸、脉结代的古代名方，由炙甘草、生姜、桂枝、人参、生地黄、阿胶、麦门冬、麻子仁、大枣组成。近年来，大量的实验研究证明，炙甘草汤确有抗心律失常的作用，对各种心脏疾病所致的心律失常均有较好的疗效，

4、且药理作用广泛而持久，极具开发价值1。炙甘草为炙甘草汤的君药，甘草次酸为甘草提取物的有效成分之一。目前文献报道多为测定甘草酸的含量，而测定甘草次酸的含量的方法少见报道2。为了讨论中药主要单体在中药配伍中的变化规律，实验采用HPL法对炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量进展了测定，为炙甘草汤的复方制剂研究提供一定的实验根据。1仪器与试药1.1仪器高效液相色谱仪HP1100，美国Agilent。包括在线脱气机，四元泵，柱温箱，紫外检测器，3D化学工作站，A/D电子分析天平1/10万，日本，756紫外分光光度仪上海分析仪器总厂，超声波清洗器KQ-500B，江苏省昆山市超声波仪器。1.2试药甘草次酸对照品

5、中国药品生物制品检定所，甲醇色谱纯，美国，乙腈色谱纯，天津科密欧，蒸馏水为本室自制，其他试剂均为分析纯。方剂中九味中药均购自河北北方学院中医门诊部，并按照?中国药典?2000年版各单味药标准进展检定。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱YG-182504.6，10)，流动相为乙腈5%的醋酸水=6535；流速：1lin-1；检测波长：250n；柱温：25；进样量：20l。2.2对照品溶液的制备精细秤取一定量的甘草次酸对照品，置5l容量瓶中，加流动相溶液稀释至刻度摇匀，配成1g/l甘草次酸对照品溶液备用。转贴于论文联盟.ll.2.3供试品溶液的制备样品为炙甘草汤，按传统工艺煎煮两次，合并煎煮液浓缩成0

6、.1g/l含炙甘草的溶液；样品为炙甘草单味药材按上述方法制成0.5g/l含炙甘草的溶液。精细汲取样品、各2l，分别参加6l甲醇进展醇沉，离心5000r/in5in，上清液过0.45滤膜备用。2.4阴性对照实验按炙甘草汤处方比例制成缺炙甘草的阴性对照品，按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。2.5线性关系观察精细汲取上述甘草次酸对照品溶液18.75，37.5，75，150，300，600l分别置2l容量瓶中，加流动相溶液稀释至刻度，摇匀，按“2.1项分别进样20l进展测定。以甘草次酸含量为纵坐标，峰面积A为横坐标，得线性回归方程：A=31.545-82.030,r=0.9991(n=6)，结

7、果说明甘草次酸含量在9.375300gl-1范围内，本法线性关系良好。2.6精细度实验精细汲取上述对照品溶液，按“2.1项重复进样6次，峰面积的RSD为1.3%，说明本法精细度良好。2.7重复性考察取同一批药材样品，按样品制备方法平行制备5份，按“2.1项进展测定。炙甘草中草次酸含量的RSD为1.98%，炙甘草汤中甘草次酸含量的RSD为2.03%，说明重现性良好。2.8回收率实验精细秤取己知含量的炙甘草和炙甘草汤方药材粉末适量，分别定量参加甘草次酸对照品，按照供试品溶液的制备方法操作，按“2.1项进展测定，结果见表1。表1加样回收率实验结果略2.9样品测定精细汲取供试品溶液稀释至适宜浓度，按“2.1项进展测定，代入回归方程，计算炙甘草和炙甘草中甘草次酸的含量，结果见表2，色谱图见图1。表2炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量略3讨论3.1流动相的选择实验选用了不同的流动相比例，结果说明在现用流动相比例下甘草次酸出峰时间适中，别离度最好。3.2波长的选择用756分光光度仪对炙甘草和炙甘草汤进展全波长扫描，结果显示在250n处均有较高的吸收峰。炙甘草汤中甘草次酸的含量高于炙甘草，分析其原因，可能是复方中的其他成分对目的成分有增溶作用，或复方中的其它药材也含有目的成分，结果有待于进