21生物化学习题与解析常用分子生物学技术的原理及其应用

1、常用分子生物学技术的原理及其应用一、选择题一A 型题1ADNARNABDNARNACRNA 分子之间的杂交 D 单链 DNA 分子之间的杂交E2ABCDDNA 片段 E 可以是抗体3ADNABcDNACDERNA4ADNABRNACDE5PCR 试验延长温度一般是A 90 B 72 C 80 D 95 E 60 6Western blot 中的探针是ARNABDNACcDNADEDNA7Northern blotting 与 Southern blotting 不同的是ABCRNADDNA E 靠毛细作用进展转移可以不经电泳分别而直接点样在 NC 膜上进展杂交分析的是ABCRNADDNAE D

2、NA 印迹以下哪种物质在 PCR 反响中不能作为模板ARNABDNACcDNADEDNA10RT-PCR 中不涉及的是ABcDNAC 逆转录酶 D RNA E dNTP11PCR 的根本成分表达错误的选项是ABDNAC dNTPDZn 2+ 的缓冲液 E 模板12DNA 链末端合成终止法不需要AddNTPBdNTPCDDNAE13cDNA 文库构建不需要AmRNABmRNACcDNADcDNA 克隆入质粒或噬菌体 E 重组载体转化宿主细胞14AB 基于亲和色谱原理CGSTD6E15DNA 在染色质环境下相互作用的技术是ABCDE 噬菌体显示筛选系统动物整体克隆技术又称为AB 基因灭活技术 C

3、核转移技术 D 基因剔除技术E目前主要克隆的致病基因是ABCDE 高血压致病基因基因疫苗主要是指ADNABRNACDERNA19ABCDE20AB 基因置换 C 基因矫正 DE 基因疫苗二B 型题A Southern blotting B Northern blottingC Western blotting D dot blotting E in situ hybridization1电泳前不需进展限制性内切酶消化靠电转移完成生物大分子的转移直接在组织切片或细胞涂片上进展杂交APCRBPCRCPCRDPCR E RFLP将目的基因扩增与定位相结合能动态检测反响过程中的产物量将 RNA 的逆转

4、录和 PCR 反响联合应用的一项技术在同一反响中实行多对引物ABCDE 基因剔除也叫基因靶向灭活该技术中，被导入的目的基因称为转基因AB 基因矫正 C 基因置换DE 基因失活目前基因治疗承受最多的方法是将致病基因的特别碱基进展修正的基因治疗方法是将正常基因经体内基因同源重组原位替换致病基因的基因治疗方法是AB 标签蛋白沉淀 C 电泳迁移率变动测定D染色质免疫沉淀 E 荧光共振能量转换效应分析凝胶阻滞试验需要设计诱饵基因DNA靶点的技术三X 型题核酸探针可以是ABDNACRNADcDNA 全长或局部片段 E 核苷酸核酸分子杂交可以形成的杂化双链有ADNA/DNABRNA/RNACDNA/RNAD

5、/RNAE/DNA PCR 技术主要用于ABC DNARNA 的微量分析 D DNAE 基因突变分析分子杂交技术的原理涉及ABCDE5DNA 链末端合成终止法正确的选项是dNTP 需要标记 CDSanger 法 E ddNTP 缺乏 5 ” -OH基因组 DNA 文库建立需要ABDNACDE噬菌体为载体的人基因组 DNA 文库的克隆数目至少应在 10 6 以上用于构建基因组 DNA 文库的载体有ABCDE8ABCDE应9ABCRNADE10ABCDE 同种异体细胞转基因技术疾病动物模型可用于ABCDE 疾病模型的筛选系统蛋白质芯片主要应用于ABCDE 疾病的诊断和药的筛选争辩蛋白质相互作用的技

6、术包括ABCDE DNA 印迹基因治疗的根本程序包括ABCDE目前可用作基因治疗的基因载体包括ABCDE二、是非题 Southern blot 主要用于 RNA 的定性和定量分析。移。PCR 技术与一般 PCR Sanger 法在测定核酸序列时，反响管中参加的 dNTP 仅标记一种即可。生物芯片可以是 DNA 芯片、 cDNA 芯片或蛋白质芯片。酵母双杂交技术是分析 DNA 蛋白质相互作用的一项重要技术。使之发育成个体。目的。目前基因治疗多承受基因增补的方式。 RNA 印迹技术中， RNA 分子在转移前需进展限制性内切酶切割。 PCR 反响中变性主要是使模板 DNA 完全变性为单链。3 ” 5

7、 ” 核酸外切酶活性。物信息学推想。转基因技术即动物克隆技术，是无性生殖。内源基因构造突变发生在生殖细胞可引起恶性肿瘤。基因转移和基因剔除技术在医学中最重要的用途是建立疾病动物模型。定位克隆是指从对基因编码产物的功能的了解动身来克隆致病基因。DNA诊断法。三、填空题DNADNARNA的。DNA印迹技术的根本流程依次为 、 、 和 。 Southern blotting 主要用于 定性和定量分析，亦可用于 和 的分析。5NorthernblottingPCR和 的优点。Westernblotting用争辩等。 PCR 的根本反响步骤包括 、 、 。在转基因技术中，被导入的目的基因称为 ，目的基因

8、的受体动物称为 。染色质免疫沉淀法是目前可以争辩 与 相互作用的主要方法。目前克隆致病相关基因主要有 和 两大策略。类。目前使用的基因载体有 和 两大类。四、名词解释 probe blotting technologe3 gene libary45genechip gene therapy gene diagnosis89 gene inactivation 10 gene replacement 11 gene augmentation12 PCR13 ex vivo五、问答题简述印迹技术的分类及应用。简述 PCR 反响体系的根本成分、 PCR 的根本反响步骤和主要用途。简述 PCR 技术的

9、根本原理。简述逆转录 PCR 、原位 PCR 和实时 PCR 技术的根本原理和主要区分。简述 DNA 链末端合成终止法 Sanger 法测序的根本原理。简述基因转移和基因剔除技术在医学进展中的作用。简述酵母双杂交技术的根本原理及应用。试述染色质免疫沉淀法根本原理及用途。简述基因诊断的概念及特点。何为基因治疗，目前基因治疗有哪些根本策略？试述基因治疗的根本程序。PCR多肽的基因。X 与两种蛋白质 a 、 b 之间是否有相互作用。参考答案一、选择题一A 型题1 B 2 C 3 D 4 E 5 B 6 D 7 B 8 A 9D 10 A11 D 12 C 13 B 14 E 15 D 16 C 17

10、 C 18 A 19 D20 A二B 型题1 D 2 B 3 C 4 E 5 B 6 C 7 A 8 D 9E 10 C11 A 12 D 13 B 14 C 15 E 16 C 17 A 18 D三X 型题1ABCD2 ABCDE3 ABCDE4 ACE5 ABD6 ABCDE7 ABC8 ABDE9 BCD 10 BD 11 ACD 12 BCDE 13 AB 14 ABCD 15 ACD二、是非题1 B 2 B 3 A 4 A 5 A 6 B 7 B 8 B 9A 10 B11 A 12 B13 A 14 B 15 B 16 A 17 B 18 A三、填空题变性 复性变性 单链 毛细作用

11、 NC电泳 转移 杂交 放射自显影或化学显色 DNA 重组质粒 噬菌体 mRNA 差 特异性强 假阳性率低特异性蛋白质的存在 特异性蛋白质的半定量分析 蛋白质分子变性 退火 延长基因差异表达状况 双色荧光探针杂交转基因 转基因动物两种蛋白质分子 具体构造部位 未知分子体内 DNA 蛋白质功能克隆 定位克隆体细胞 生殖细胞病毒载体 非病毒载体四、名词解释放射性核素或其它化合物标记的核酸片样品中特定的基因。RNA 印迹技术和蛋白质印迹技术等。DNADNA 文库和 cDNA 文库。个体的完全拷贝，故称之为克隆。基因芯片，又称 DNA 微阵列，包括 DNA(DNA chip) 和 cDNA 芯片(cD

12、NA chip)DNA 片段或 cDNA比较和分析，从而快速得出定性和定量的结果。基因构造及其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。内发挥作用，以到达治疗疾病目的的方法。基因疫苗 ， 主要是指 DNA 疫苗，是第三代疫苗。其将编码外源性抗原的不断刺激机体免疫系统，到达治病或防病目的。的特别表达，已到达治疗疾病的目的。DNA 完全恢复正常状态。基因增补，是指将目的基因导入病变细胞或其它细胞，不去除特别基因，能增加。DNADNADNADNA上。间接体内疗法，是指在体外将外源基因导入靶细胞内，再将这种基因修饰疗的目的。五、问答题1加以检测分析的技术。它主要包括 DNA 印迹技术 (Southe

13、rn blot) 、 RNA 印(Northern blot) 和蛋白质印迹技术 (Western blot)DNADNA因的定位及检测等，此外亦可用于分析重组质粒和噬菌体。RNAmRNA可以比较不同组织和细胞中的同一基因的表达状况。特异蛋白质的半定量分析以及蛋白质分子的相互作用争辩等。2.PCR 反响体系的根本成分、 PCR 的根本反响步骤和主要用途。PCRDNADNAdNTP 以及含有 Mg 2+ 的缓冲液。PCRDNA 完全变性为单链，同时因物自身以及引物之间存在的局部双链也得以消退。退火：将温度下降至适宜温度使引物与模板结合。72DNAdNTPDNA反响。(2)(3)DNA 和 RNA

14、(4)DNA 序列测定； (5) 基因突变分析。3PCR 技术的根本原理及应用。PCR 技术类似于 DNA 的体内复制。以 DNADNA4DNADNADNA 片段扩增 100DNA 模板加列发生退火，再将温度上升使退火引物在 DNA 聚合酶作用下得以延长。这种变性 - 复性 - 延长的过程就是一个 PCRPCR 就是在适宜条件下的这种循DNA 序列测定和基因突变分析等。简述逆转录 PCR 、原位 PCR 和实时 PCR 技术的根本原理和主要区分。PCR 是将 RNA 的逆转录和 PCR 反响联合应用的一种技术。即首先RNAcDNAPCR来扩增目的基因。PCR 是在固定液固定、石蜡包埋的组织切片

15、或细胞涂片上的单个细胞内进展PCRDNARNA否在该组织或细胞中存在。PCRPCR成正比，对每一反响时刻的荧光信号进展实时分析，计算出 PCR 产物量。依据动态变化数据，可以准确计算出样品中最初的含量差异。PCRPCRRNAPCRRNAPCRRT-PCRPCR技术可以将目的基因的扩增与定位相结合。实时 PCR 技术与传统 PCR 反响相动态监测反响过程中的产物量，消退了产物积存对定量分析的干扰。简述 DNA 链末端合成终止法 Sanger 法的根本原理。23(ddNTP)dNTP 作为底物掺入到合成的 DNAddNTP 缺乏 3 ”-OHddNTPDNADNA 聚32 P 或 35 S 标记的

16、 dNTP ，启动 DNAddNTPDNADNA简述基因转移和基因剔除技术在医学进展中的作用。讨疾病的发生气制，更重要的是可作为的治疗方法和的药物的筛选系统。(1) 单基因打算疾病模型：应用基因剔除模拟基因失活，如动脉硬化症疾病模型。 (2) 多基因打算疾病模型简述酵母双杂交技术的根本原理及应用。该技术是基于酵母转录激活因子 GAL4 分子的 DNA(BD) 和促进转录的(AD)BD 和 AD 分别融合了相互作用而恢复对下游基因的表达激活作用。酵母双杂交系统可以用于 (1) 证明两种基因序列的蛋白质可以相互作用的(2) 分析存在相互作用的两种蛋白质分子的的相互作用功能构造域或关键的氨基酸残基；

17、 (3) 将拟争辩的蛋白质的编码基因与 BD 基AD表达文库，筛选未知的相互作用蛋白质。试述染色质免疫沉淀法根本原理及用途。DNA法。该法可以争辩蛋白质与 DNA 在染色质状态下的相互作用，说明真核生物基因表-DNAPCRDNADNA 相互作用的信息。简述基因诊断的概念及特点。因构造及其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。基因诊断与其他诊断方法相比，基因诊断的方法特点是：1 针对性强，以基因作为检查材料和探察目标，属于 “ 病因诊断 ” 。2特异性强，用分子杂交技术选用特定基因序列作为探针，故有很高的特异性。3 灵敏度高，所用技术具有放大效应，故诊断灵敏度高4 适用性强，诊断范围广。何

18、为基因治疗，目前基因治疗有哪些根本策略？以到达治疗疾病目的的方法，均谓之基因治疗。缺陷基因准确的原位修复 包括对致病基因的突变碱基进展矫正的基因矫正目前尚未突破。基因增补 是指将目的基因导入病变细胞或其它细胞，不去除特别基因，而增加。目前基因治疗多承受此法。的特别表达，已到达治疗疾病的目的。DNA断刺激机体免疫系统，到达治病或防病目的。答：根本程序如下：治疗性基因选择 选择对疾病有治疗作用的特定目的基因。基因载体的选择 有病毒载体和非病毒载体，常用的是病毒载体。基因治疗，目前进展的基因治疗均是体细胞基因治疗和间接体内疗法。基因转移 基因导入人体的方式：间接体内疗法，即在体外将外源基因导入有关的器官组织，使其进入相应细胞进展表达。PCR多肽的基因。答：试验步骤如下：利用国际基因文库等信息资源，获得这一多肽的