阿司匹林抑制肺癌细胞增殖的实验研究

1、阿司匹林抑制肺癌细胞增殖的实验研究刘国华，陈燕明，冯一中【摘要】目的观察阿司匹林在体外对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法采用噻唑蓝(TT)法观察阿司匹林及与奥沙利铂联用抑制A549细胞的增殖；采用流式细胞仪(F)观察阿司匹林处理后A549细胞周期分布的变化；采用HE染色和DNA末端原位标记染色技术(TUNEL)观察阿司匹林处理后诱导A549细胞凋亡的作用。结果TT显示阿司匹林呈剂量依赖方式抑制A549细胞增殖。阿司匹林作用后，F显示G0/G1期细胞比例增加，S期和G2/期细胞比例降低，TUNEL显示细胞凋亡指数(AI)由3.67%1.15%增加到26.33%2.52%，呈一定剂量效应关系

2、。光镜下可见典型的细胞凋亡形态学变化。阿司匹林(2.5l/L)与奥沙利铂(6.25ug/L)联用可增强抑制A549增殖的作用，二者呈协同或相加作用。结论阿司匹林可抑制肺腺癌细胞A549的增殖，其影响细胞周期分布、诱导细胞凋亡可能是其重要的机制。阿司匹林及与奥沙利铂联用有显著的协同抗增殖效应。【关键词】阿司匹林；肺癌；细胞增殖；奥沙利铂ExperientalStudynInhibitiveEffesfAspirinnthePrliferatinfHuanLunganerellsKeyrds：Aspirin;Lunganer;ellprliferatin;xaliplatin1材料与方法1.1材料

3、1.1.1细胞株人肺腺癌细胞株A549购自中国科学院上海细胞生物研究所。1.2方法1.2.2TT比色法取对数生长期的A549细胞以每孔5103个细胞接种于96孔板中，培养24h后换液，设实验组(加不同浓度的干预药物)、空白调零组(不接种细胞)及对照组(只含等量溶剂)，每组设四个复孔。48h后每孔参加TT20L，继续培养4h后1000r/in离心5in，吸出上清液，每孔参加DS100L，轻轻振荡10in，于酶标仪570n波长处测定各孔吸光度值(A值)。计算细胞增殖的抑制率：抑制率=(1-实验组A平均值/对照组A平均值)100%。计算Q值并判断两药的结合效应2：Q=E(A+B)/EA+(1EA)E

4、B，其中E(A+B)为两药合用的抑制率，EA、EB为两药单用的抑制率。Q为0.851.15表示两药作用相加，Q1.15表示两药作用协同，Q0.85表示两药作用拮抗。1.2.3流式细胞仪检测细胞周期分布取对数生长期的A549细胞按1106/瓶个细胞接种于100L培养瓶中，培养24h后换液。实验组阿司匹林终浓度分别为5.0l/L、10.0l/L，设不加药对照组,每组每个浓度重复3瓶。48h后搜集细胞，吹打成细胞悬液，PBS洗涤，1000r/in离心5in后弃上清液，参加70%冷乙醇固定，4放置1h，取出后用PBS漂洗，1000r/in离心5in后弃上清液，参加0.01%Rnase1L，37水浴温箱

5、振荡10in，1000r/in离心5in后弃上清液，参加0.05%碘化丙啶(PI)1L染色，用400目筛网过滤后置于4冰箱，20in后上机检测。计算细胞增殖指数PI：PI=(S+G2)/(G0/G1+S+G2)100%。1.2.4HE、TUNEL染色法检测细胞凋亡(1)细胞形态学观察取对数生长期的A549细胞以每孔2104个细胞接种在置有玻片的24孔培养板内，培养24h后换液。实验组阿司匹林终浓度分别为5.0l/L、10.0l/L，设不加药对照组，每组每个浓度设3个复孔。48h后取出玻片，冷丙酮固定30in，PBS漂洗，室温风吹干。作HE染色，光镜下观察。1.3统计学处理数据以s表示，应用SP

6、SS12.0统计软件进展组间t检验。2结果2.1阿司匹林及与奥沙利铂联用对A549细胞增殖的影响阿司匹林1.2520l/L作用A549细胞48h后细胞抑制率最低为3.96%，最高为65.49%，其作用具有剂量依赖性，差异具有显著性。根据此抑制效应结果，选用阿司匹林2.5l/L作为与奥沙利铂结合用药的干预浓度，见表2。由表2可见，奥沙利铂亦呈剂量依赖性抑制A549细胞的增殖，奥沙利铂浓度为6.25g/L时，阿司匹林与奥沙利铂联用有协同作用(Q=1.21)；奥沙利铂浓度在12.5100g/L时，阿司匹林与奥沙利铂联用有相加作用(Q=0.951.03),见表1。表1阿司匹林对A549细胞增殖的抑制2

7、.2阿司匹林对A549细胞周期的影响阿司匹林5l/L、10l/L作用A549细胞48h后使G0/G1期细胞比例增加，S期和G2/期细胞比例降低，同时增殖指数PI降低，其作用具有剂量依赖性，差异具有显著性P0.05，见表3。2.3阿司匹林对A549细胞凋亡的影响2.3.1形态学观察阿司匹林5l/L、10l/L作用A549细胞48h后，HE染色切片上可见典型的细胞凋亡形态学变化，表现为：细胞核固缩，染色质凝集，核碎裂，出现凋亡小体，见图1。表2奥沙利铂、阿司匹林+奥沙利铂对A549细胞增殖的抑制与对照组相比，*P0.05,*P0.012.3.2TUNEL法检测阿司匹林5l/L、10l/L作用A549细胞48h后，TUNEL染色显示核染成棕褐色的凋亡细胞。凋亡指数AI分别为17.67%1.53%和26.33%2.52%，明显高于对照组3.