培养基的质量控制

1、惠山疾控作业指导书编号:HSCDC/GC762培养基质量控制规程版本/修改次:1/o第1页共6页.目的规范本中心微生物实验室培养基的内部质量控制工作。.适用范围适用于实验室微生物培养基使用前的质量验收、使用过程中的质量控制。.职责.1检验人员:按照本规程规对培养基使用前及使用过程中进行质量控制，确保培养基符合相关标准的要求。.2科室负责人：负责指导、监督检验人员对培养基进行质量控制。.使用前的质量控制生产企业提供的材料培养基生产厂家随产品应提供下列文件：培养基、独立成分、添加成分名称批号；使用前的pH;储藏信息和有效期;性能评价和所用测试菌株;技术数据清单；质控证书/必要的安全、危害数据。验收

2、实验室收到培养基后，应填写“培养基验收检查记录单”，检查包装及完整性，标识是否清晰等，验收合格后按照“培养基编码系统使用规程”对培养基进行编号。4。3贮存及使用前质量确认。1商品化培养基应严格按供应商提供的贮存条件、有效期进行贮存。4。3.2验收合格的培养基应建立“商品化干粉培养基目录清单，使用前对容器密闭性进行复查。4。3。3开封的脱水培养基，每次使用前应对其质量进行检查,通过粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等判断培养基的质量变化.若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用.4。3。4制备好的成品培养基应建立“成品培养基目录清单”，每次使用前应检查：颜色是否发生变化?/是否蒸

3、发/脱水?/是否有微生物生长？等。如果发生上述异常情况，则不应再使用.制备好的成品培养基的质量控制新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试，符合要求后使用。成品培养培养基的质量控制应包括物理指标和微生物指标的测试，根据测试结果及时填写“实验室制备培养基测试结果记录单”。5。1物理指标控制5。1.1测试2025的pH值惠山疾控作业指导书编号HSCDC/GC-762009培养基质量控制规程版本/修改次：1/o第2页共6页将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中，每种培养基上菌株的生长率应达规定的最低限值。5。2。2.1。1定量方法生长率PR的计算：Pr=NS/NO

4、NS：从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数。N0:从一个或多个规定的参考培养基平板上获得的菌落总数（该菌落总数应2100cfu）。要求：非选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.7，该类培养基应易于目标菌生长;选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0。1；每平板（或每试管）的接种水平为10cFU100CFUo522.1.2半定量方法半定量方法采用生态测量技术在平板上划线,平板板连续划线区域得分的总和即为生长指数G,G值不应超过标准规定的允许范围。5。2.2。1。3定性方法定性方法采用划线法观察。5。2.2。2选择性将浓度为104CFU/mL106CFU/mL的非目标菌工作菌株悬浮液接种至选

5、择培养基和参考培养基中，培养基的选择性应达到规定值。5。2.2。2.1定量方法选择因子SF:SF=DO-DSD。：能在参考培养基上生长至少10个菌落的最高稀释度DS:能在测试培养基上显示生长的最高稀释度要求：非目标菌在选择性培养基上的SF至少为2；半定量和定量法中,非目标菌应部分或全部被抑制.5.2.3生理生化特性（选择性和特异性）规定培养基的基本特性，使用一套适当的测试菌株对培养基上的目标菌的生理生化特性（菌落形态、大小等）和非目标菌的被抑制程度进行测试。5.3性能评价和结果解释按照规定得到的所有测试菌株的性能均符合规定，则该批培养基品质优良;若只有物理指标和微生物指标符合规定，则该批培养基

6、可被接收。表1计数用选择性培养基培养基用途培养条件测试菌株参考培养基控制方法判定标准特征反应Baird-ParkerS生长率372448h金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923TSA士豆定量。.5黑色/灰色菌落,周围为一混浊带,其外有透明带选择性3748h大肠杆菌人1CC25922/8739定性全部抑制特异性372448h表皮葡萄球菌ATCC12228定性黑色/灰色菌落，周围为一混浊带,其外沅透明带MYP长率302448h脂样芽胞杆菌ATCC11778TSA士豆定量Pr：具沉淀带的粉色菌落选择性3748h大肠杆菌ATC定性全部抑制惠山疾控作业指导书编号:HSCDC/GC76-200培养基质

7、量控制规程版本/修改次：1/0第3页共6页表表1计数用选择性培养基（续）培养基用途培养条件测试菌株参考培养基控制方法判定标准特征反应VRBG（结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂）S生长率3724h大肠杆菌AICC25922/8739鼠伤寒沙门菌ATCC14028TSA士豆定量F0.5带有或不带沉淀带的粉红色或红色菌落选择性3720h粪链球菌八1（。29212/19433定性全部抑制VRBL红胆汁乳糖）S生长率3020h大肠杆菌ATCC25922/8739TSA士豆定量PrNO.5带有或不带沉淀带的淡紫色菌落选择性3020h粪链球菌AICC29212/19433定性全部抑制特异性3020h铜绿假单胞菌A

8、TCC27853定性无色至浅棕色菌落CTSMAC（改良山梨醇麦康凯琼脂）S生长率3724h大肠杆菌0157:H7ATCC43894/43895TSA士豆定量Pr1.5透明菌落，表面淡黄棕色，菌落直径约1mm选择性3724h金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923定性全部抑制特异性3724h大肠杆菌AlCC11775/25922定性粉色菌落BGBLB（煌绿乳糖胆盐肉汤）L生长率302448h大肠杆菌ATCC25922/8739弗氏柠檬酸杆菌ATCC25922/8739TSA半定量浊度2+,导管1/3产气产气并浑浊选择性粪链球菌AICC29212/19433定性不生长ECL生长率442448h大

9、肠杆菌ATCC25922半定量浊度2+,导气管1/3产气产气并浑浊选择性442448h铜绿假单胞菌八丁CC27853b定性不生长EC-MUG/LS-MUGL生长率442448h大肠杆菌ATCC25922半定量浊度2+,导气管1/3产气产气并浑浊，产生荧光选择性442448h铜绿假单胞菌ATCC27853b定性不生长乳糖胆盐发酵培养L生长率3724h大肠杆菌ATCC25922半定量导气管1/3产气产气并变黄色选择性3724h鼠伤寒沙门菌ATCC14028定性不产气、仍为紫色LST（月桂酸肉汤）L生长率3724h大肠杆菌人丁95922半定量导气管1/3产气选择性3724h福氏志贺氏菌CMCC515

10、72定性表2计数用非选择性一培养基培养基用途培养条件测试菌株参考培养基控制方法判定标准特征反应PCA（平板计数琼脂）S生长率3072h大肠杆菌AICC25922/8739金黄色葡萄球菌ATCC6538枯草芽孢杆菌ATCC6633TSA士豆定量皆0。7惠山疾控作业指导书编号：HSCDC/GC-762培养基质量控制规程版本/修改次:1/o第4页共6页表3选择三性增菌培养基培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应EEL生长率3724h大肠杆菌ATLC25922/8739半定量VRBG上10CFU粉红至红色菌落，有或没有沉淀带鼠伤寒沙门菌ATCC14028选择性粪肠球菌AlCC29212全部

11、抑制RVSL生长率41。524h鼠伤寒沙门菌ATCC14028半定量乂1口或其他选择性培养基上10CFU肠炎沙门氏菌ATCC13076铜绿假单胞菌ATCC27853选择性41.524h大肠杆菌ATCC25922半定量TSA上全抑制粪链球菌ATC.C29212TSAC匚1UFUSC（亚硒酸盐胱氨酸）L生长率3724h鼠1：力寒沙CC14JSA1028半定量乂1口或其他选择性培养基上10CFU不同培养基上菌落特征不同（见标准）+大肠杆菌八1CC25922+节AT可绿假单胞菌-CC27853b选择性3724h大肠杆菌ATCC25922半定量TSA10CFU粪链球菌ATCC29212TTB（0硫磺酸钠

12、煌绿增菌液）L生长率3724h鼠伤寒沙门菌ATCC14028半定量XLD或其1选择性培养基不同培养基上菌落特征不同（见标准）伤寒沙门菌CMCC50071上10CFU选择性3724h大肠杆菌ATCC25922TSA上10CFU碱性蛋生长率3724h霍乱弧iSCMCC16109半定量院85或其他选择性培养基上10CFU不同培养基上菌落特征不同（见标准）副溶血性弧菌CMCC20001白胨水L选择性3724h大肠杆菌ATCC25922/8739TSA上10CFU福CM氏志贺氏菌1CC515727。5%氯化钠肉汤L生长率3724h金黄色葡萄球菌ATCC6538半定量B-P平板或其他培养基上10CFU不同

13、培养基上菌落特征不同（见标准）表4非选择性增菌培养基培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应BHI生长率3724h金黄色葡萄球菌ATCC6538定性浊度12蛋白胨盐稀释202，大肠杆菌八（25922定量+/-50%菌落数/至（+/山1111金黄色葡萄球菌,50%原始菌落惠山疾控作业指导书编号：HSCDC/GC76培养基质量控制规程版本/修改次:口。第5页共6页表表4非选择性增菌培养基（续）培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应乳糖蛋白胨肉汤L生长率3724h大肠杆菌ATCC25922定性导气管1/3产气选择性3724h鼠伤寒沙门菌ATCC14028定性SCDLP液体培养基

14、L生长率3724h铜绿假单胞菌ATCC27853大肠杆菌AlCC25922金黄色葡萄球菌ATCC6538定性浊度12液体沙氏培养基L生长率265天白色念珠菌CMCC98001定性浊度12真菌培养基山生长率265天白色念珠菌CMCC98001定性浊度12表5选择性分离培养基培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应亚硫酸酸铋琼脂（BS）S生长率3748h鼠伤寒沙i嗝ATCC14028定性良好生长（2）菌落呈黑色,有金属光泽福氏志贺氏菌CMCC51572菌落呈棕色选择性大肠杆菌AICC25922/8739全部或部分抑制（01）无典型菌落粪链球菌AICC29212/19433全部抑制（0）X

15、LDS生长率3724h鼠伤寒沙门菌人七C14028定性良好生长（2）菌落呈黑色福氏志贺氏菌CC51573菌落呈无色选择性大肠杆菌人TCC25922/8739全部或部分抑制（01）无典型菌落粪链球菌ATCC29212/19433全部抑制（0）一血琼脂平板S生长率372448h金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923定性良好生长B溶血，透明溶血环粪链球菌八1829212定性良好生长a溶血,草绿色溶血环TCBSS生长率372448h霍乱弧菌CMCC16109定性良好生长菌落较大，呈黄色副溶血性弧菌CMCC20001定性良好生长菌落较大,呈绿色4号琼脂S生长率372448h霍乱弧菌CMCC16109

16、定性良好生长菌落较大、扁平透明、湿润、中心带有黑色非O1群霍乱弧菌CMCC17045定性良好生长菌落较大、扁平透明、湿润、中心带有黑色选择性3724h大肠杆菌AICC25922/8739定性全部或部分抑制（01）惠山疾控作业指导书编号：HSCDC/GC-76-2培养基质量控制规程版本/修改次：1/0表表5选择性分离培养基（续）第6页共6页培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应伊红美兰琼脂S生长率3724h大肠杆菌AlCC25922/8739定性良好生长菌落紫黑色带金属光泽鼠伤寒沙门菌ATCC14028定性良好生长菌落灰白色半透明福氏志贺氏菌匚乂CC51573定性良好生长菌落灰白色半

17、透明TS1（三糖铁琼脂）S生长率372448h天肠杆菌ATCC25922/8739定性良好生长斜面及底层均变黄,产气,硫化氢阳性普通变形杆菌CMCC49001定性良好生长斜面及底层均变黄,产气,硫化氢阳性福氏志贺氏菌乂CC51573定性良好生长底层变黄，斜面变红，不产气，硫化氢阴性鼠伤寒沙门菌ATCC14028定性良好生长底层变黄，斜面变红，产气，硫化氢阳性表6非选择性分离培养基培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应营养琼脂S生长率3724h大肠杆菌八1工C25922鼠伤寒沙门菌ATCC14028c小肠耶尔森氏菌ATCC23715定性良好生长（2）.记录培养基验收检查记录单HSCDC/ZJ19-29A商品化培养基目录清单HSCDC/ZJ-19-30A成品培养基目录清单HSCDC/ZJ-19-31A实验室制备培养基测试结果记录单HSCDC/ZJ-19-33A.参考文献6。1GB/T27405-2008.实验室质量控制规范食品微生物检测S.SN/T1538。12005.培养基制备指南第1部分:实验室培养基制备质量保证通则S.SN/T1538.22007.培养基制备指南第2部分:培养基性能测实用指南S.6。4纪绍梅微生物培养基质控与图解MJ惊:J惊科学技术出版社,2