植物相关软件与方法构建载体pgemt_第1页
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文档简介

1、ShineGeneMolecularpGEM-载体使用 加上一ShineGeneMolecularpGEM-载体使用 加上一个T制成T载体,一方面避免了自身环化,另一方面由于T-A互补,从而提高了T载体与PCR产物之间的连接效由于T-A克隆只需纯化PCR产物,因而操作较pGEM-T vector含丝状噬菌体f1 起始区,用于产生环状ssDNA;含有T7 和SP6 RNA聚合酶启动子;在多克隆区pGEM-VectorThepromoterandmultiplecloningsequenceofthepGEM-TAdd:Floor2,BuildingA,328#,WuheRoad,Minhang:

2、ShineGeneMolecular1. 克隆PCR2. 通过多克隆区域两侧的T7和SP6RNA3. 产生4. 5. 包装及组pGEM-T载体20ShineGeneMolecular1. 克隆PCR2. 通过多克隆区域两侧的T7和SP6RNA3. 产生4. 5. 包装及组pGEM-T载体20A. 10-2-T4B. Add:Floor2,BuildingA,328#,WuheRoad,Minhang:ShineGeneMolecular 5、取 200l在LBShineGeneMolecular 5、取 200l在LB固体培养基/IPTG/X-Gal)上铺板,自然干燥 5-10 分钟,37倒置培养过C. 12-16 小时培养后,培养皿上生长着许多白色和蓝色菌落,蓝色菌落只含有载体,而白色菌落为DNA重组子(注:具35外切核酸酶活性的高保真DNA聚合酶如Pfu、Vent聚合酶不能用于T-A克隆Shanghai ShineGene Molecular Bio-tech .Add:Floor 2,Building A,328#, Wuhe Road, Shanghai :+86-21-Fax:+86-21-A

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