免疫组化技术1课件

1、免疫组织化学染色技术Email:免疫组织化学染色技术Email:组织化学染色技术 Histochemistry Technique 观察对象组织、细胞 使用工具普通显微镜 荧光显微镜形态与结构组织化学染色技术 Histochemistry Techni苏木素曙红苏木素曙红免疫组织化学染色技术 Immunohistochemistry Technique指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原（目的蛋白）进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。免疫组织化学染色技术 ImmunohistochemistrImmunohistochemistry Tec

2、hnique特定蛋白（抗原）Immunohistochemistry Technique（透膜）（透膜）授课提纲 基质标本的制作 荧光免疫组化技术 酶免疫组化技术 相关问题与解决方案授课提纲 基质标本的制作授课提纲 基质标本的制作 荧光免疫组化技术 酶免疫组化技术 相关问题与解决方案授课提纲 基质标本的制作标本类型 组织标本 冰冻切片 石蜡切片 细胞标本 体外培养细胞（单层细胞、悬浮细胞） 体液细胞（涂片）标本类型 组织标本固定与保存 固定的目的防止细胞自溶，保持细胞形态与机构；保存组织细胞抗原性；防止标本脱落；防止滋生微生物，预防组织腐败 标本固定以不损伤细胞形态、不损伤抗原特异性为基本原则

3、固定与保存 固定的目的固定与保存 固定剂 蛋白类乙醇或甲醇 微生物类丙酮、三氯化碳 多糖类10%福尔马林固定与保存 固定剂抗原修复 目的：充分暴露抗原表位，利于抗体识别。 方法： 酶（无花果蛋白酶，胰蛋白酶）消化法； 盐酸水解 微波处理 煮沸法抗原修复 目的：授课提纲 基质标本的制作 荧光免疫组化技术 酶免疫组化技术 相关问题与解决方案授课提纲 基质标本的制作标记物 荧光素 异硫氰酸荧光素（FITC） 四乙基罗丹明（RB200） 藻红蛋白（PE） 藻红蛋白花青苷（PE-Cy5）标记物 荧光素技术类型 直接染色法荧光素直接标记在特异性抗体（Ab1) 间接染色法荧光素标记第二抗体（Ab2)第二抗体

4、针对第一抗体种属特异性的表 位（如羊抗鼠Ig或羊抗人Ig）技术类型 直接染色法直接法直接法实例：细胞鉴定 免疫细胞及其亚群（流式细胞术） T细胞 CD3+ CD4+ CD8+ B细胞 NK细胞实例：细胞鉴定 免疫细胞及其亚群（流式细胞术）免疫细胞分类与计数18Suppressor T cellR1T cell / B cellHelper T cell免疫细胞分类与计数18Suppressor T cellR1间接法间接法实例：检测抗核抗体 检测原理已知抗原肝细胞/HEp-2待检抗体第二抗体荧光标记兔抗人Ig实例：检测抗核抗体 检测原理实例：检测病原体（病毒、细菌）检测原理待检病毒（抗原）已知

5、抗体单抗或多抗第二抗体荧光标记羊抗鼠（或兔）Ig实例：检测病原体（病毒、细菌）检测原理荧光显微镜（落射式）关键汞灯光源激发滤片暗场聚光镜吸收滤片荧光显微镜（落射式）关键荧光显微镜（落射式）荧光显微镜（落射式）荧光显微镜（落射式）荧光显微镜（落射式）THANK YOUSUCCESS2022/10/225可编辑THANK YOUSUCCESS2022/10/22授课提纲 基质标本的制作 荧光免疫组化技术 酶免疫组化技术 相关问题与解决方案授课提纲 基质标本的制作主要类型 酶标记抗体同荧光免疫组化 非酶标记抗体酶-抗酶系统生物素-链霉亲和素系统主要类型 酶标记抗体技术特点以酶作为抗原，制备抗酶抗体；

6、酶（抗原）与抗酶（抗体）结合制备酶-抗酶复合物；通过桥联抗体与识别系统（待检抗原-特异性抗体）连接；技术特点以酶作为抗原，制备抗酶抗体；酶桥法酶桥法常用酶和相应底物 过氧化物酶Peroxidase（P）二氨基联苯胺（DAB） 碱性磷酸酶（AP）alkaline phosphatase（AP）溴氯羟吲哚磷酸盐（BCIP） 常用酶和相应底物 过氧化物酶过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法PAPPAP复合物过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法PAPPAP复合物抗体选择 第一抗体识别抗原 第二抗体（桥联抗体）能同时与第一、第三抗体结合 第三抗体抗酶抗体与第一抗体同源抗体选择 第一抗体PPPAAA 图

7、双酶双底物(复合物法)双重酶标染色原理兔PAPGAR IgG兔抗Ag鼠APAAPGAM. IgG鼠抗PPPAAA 实例：淋巴瘤轻链双重染色法 一抗兔抗鼠抗 二抗羊抗兔羊抗鼠 显色系统 PAP APAAP实例：淋巴瘤轻链双重染色法 一抗 显色系统亲和素-生物素-过氧化物酶复合体（ABC） 生物素（Biotin） 亲和素（Avidin） 生物素标记抗体（B-Ab） 生物素标记过氧化物酶（B-P）亲和素-生物素-过氧化物酶复合体（ABC） 生物素（Biot亲和素-生物素-过氧化物酶复合体（ABC）亲和素-生物素-过氧化物酶复合体（ABC）EnVisionEnVision授课提纲 基质标本的制作 荧光

8、免疫组化技术 酶免疫组化技术 相关问题与解决方案授课提纲 基质标本的制作免疫组化技术1课件识别抗体（第一）选择 单克隆抗体（McAb）特异性强敏感性差 多克隆抗体（McAb）特异性差敏感性强识别抗体（第一）选择 单克隆抗体（McAb）识别（第一）抗体选择构象 糖基化碳水化合物识别（第一）抗体选择构象 糖基化碳水化合物第二抗体选择第二抗体选择选择显色系统 荧光免疫组化 酶免疫组化PAPAPAAPABCLAB？选择显色系统 荧光免疫组化？封闭非特异性结合封闭非特异性结合特异性显色 具备特定部位显色特定组织、特定细胞、特定结构不均一显色 特异性显色 具备非特异性显色主要原因内源性酶内源性生物素抗体特异性不强漂洗不充分基质制作 非特异性显色主要原因非特异性背景显色 预先处理加底物消耗正常血清封闭非特异性背景显色 预先处理The EndThe End经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量Study Constantly, And You Will Know Everything. The More You Know, The More Powerful You Wi