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文档简介

1、实验室常用载体介绍载体构建的基本原理 1. TA克隆 (T4连接酶) Promega 的T-easy载体（pGEM -T Easy ） TAKRA T载体(pMD18-T ) 2. TOPO TA克隆(pCR8/GW/TOPO) 定向克隆(pENTR) 3. 酶切连接 实验室常用 4. Gateway 技术TOPO异构酶1. 创建入门克隆，通过PCR或传统的克隆方法将目的基因克隆进入门载体。 2. 混合包含目的基因的入门克隆和合适的目的载体及Gateway LR Clonase酶，产生表达克隆。致死基因：DB 3.1Gateway attB引物attB1 5 - GGGGACAAGTTTGTA

2、CAAAAAAGCAGGCTNN - 3 attB2 5 - GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTN - 3 Proline rich protein like protein (PRPL)Sense primer GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTATGAACATAAGCCCCCTGTCAntisense primer GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTCCATAAGCACTCTCGCTAGTGateway技术载体超表达 pGWB401pGWB501pGWB402pGWB502pGWB402pGWB502 可能都要做融合蛋白了，与gfp或者his标签，这样以后就可以做WESTERN了。这边他们的超表达都是做的融合蛋白，不过要事先确定融合基因放在还是，免得影响其功能。如果不确定就两种同时做。RNAi启动子启动子（截短策略）attL1attL2pDONR201+promoter棉花自己的启动子？诱导表达怎么工作的？我们怎么用？可以用在哪些地方？效率低的问题：连接反应效率低？BP、LR反应效率低？转化效率低？切记抗生素转基因过程中的注意事项大小皿及滤纸不能混用转基因的共培皿及一些摇菌的三角瓶灭完菌再洗转基因所挑的克隆块，每个克隆块分化苗的棵数烟草转基因的假阳

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