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文档简介

1、实 验 三细菌的简单染色和革兰氏染色细菌的简单染色和革兰氏染色目的要求染色剂和染色的原理实验材料实验程序思考题一.目的要求学习微生物涂片掌握细菌的简单染色法和革兰氏染色法 进一步熟练掌握显微镜油镜的使用技术 二.染色剂和染色原理微生物染色的基本原理，是借助物理和化学因素的作用而进行的。物理因素如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等。 化学因素如：正负离子之间的相互吸引等染色剂 染料按其电离后所带电荷的性质可分为以下类型： 1. 酸性染料：如酸性复红、刚果红、伊红、藻红等。 2. 碱性染料：一般有碱性复红、番红、结晶紫、美兰、甲基紫等，细菌易被碱性染料染色。 3. 中性（复合）染料

2、：如Wright染料和Gimsa染料等（常用于细胞核染色）。实验材料涂片染色用的细菌培养物 1.金黄葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ) 24h的斜面培养物2.大肠杆菌（Escherichia coli) 24h的斜面培养物。 3.枯草杆菌（Bacillus subtilis) 1216h的斜面培养物。载玻片、接种环、镊子、酒精灯、各种染色液、火柴、无菌牙签、玻璃铅笔、蒸馏水。显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸、二甲苯等。实验程序 （细菌染色的方法和步骤）细菌染色的方法: .单染色法：用一种染色液染菌体后，就可以观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的

3、特殊构造等。 .复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。染色技术的一般过程 涂片干燥固定染色媒染脱色复染 水洗干燥镜检 实验程序 （革兰氏染色的方法和步骤）革兰氏（Gram）染色法 1. 涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约30秒，后立即用流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染1分钟，水洗后晾干或吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。简单染色注意事项：1.注意掌握供试验菌种的培养时间。2.固定时注意温度，不可过热，否则引起菌体变形3.水洗时用细流，既要冲净染料，又不可将菌体冲走4.彻底晾干 否则镜检时不清楚革兰氏染色注意事项1.注意掌握供试验菌种的培养时间。2.脱色

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