T细胞免疫功能检测平台的建立和应用课件

1、T细胞免疫功能检测平台的建立和应用T细胞免疫功能检测平台的建立和应用T细胞免疫功能检测平台的建立和应用T细胞免疫功能与感染T细胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 T细胞免疫的抗感染作用T细胞免疫功能的测定 T细胞亚群 T细胞功能T细胞免疫功能测定的临床意义”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识，培养逻辑思维能力；T细胞免疫功能检测平台的建立和应用T细胞免疫功能检测平台的建T细胞免疫功能与感染T细胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 T细胞免疫的抗感染作用T细胞免疫功能的测定 T细胞亚群 T细胞功能T细胞免疫功能测定的临床意义T细胞免疫功能与感染T细胞免疫功能的抗感染作用T细胞免疫功能检测

2、平台的建立和应用课件机体的免疫系统非特异免疫 皮肤粘膜，吞噬细胞，NK细胞，补体，正常菌群特异性免疫 细胞免疫：CD4+ 细胞，CD8+ 细胞 体液免疫：B细胞机体的免疫系统非特异免疫机体的免疫系统CD4细胞非特异性免疫特异性免疫NK细胞，吞噬细胞B细胞CD8细胞机体的免疫系统CD4细胞非特异性免疫特异性免疫NK细胞，吞噬CD4+细胞的免疫中枢指挥功能CD4+细胞的免疫中枢指挥功能CD4+细胞的免疫中枢指挥功能CD4+细胞的免疫中枢指挥功能CD4+细胞的产生和分群记忆 CD4胸腺纯真 CD4Net Naive CD4 # 5x107/天抗原CD4+细胞的产生和分群记忆 CD4胸腺纯真 CD4N

3、et 纯真 纯真和记忆/效应4细胞亚群的产生记忆效应凋亡胸腺效应效应效应纯真 纯真和记忆/效应4细胞亚群的产生记忆效应凋亡胸腺纯真 CD4和记忆CD4细胞纯真 CD4和记忆CD4细胞纯真/记忆CD+细胞分泌不同的介素纯真/记忆CD+细胞分泌不同的介素细胞免疫功能的抗感染作用感染发生的两个基本要素：病原体和机体免疫功能免疫功能对疾病转归的影响：对免疫功能正常的人不起致病作用的病原体，在免疫功能低下的人身上可发生致命性的感染；免疫功能正常的人发生某种感染后可很快恢复，而在免疫功能紊乱的人则成为慢性状态；对同样的病原体所导致的感染，给予同样的抗感染治疗，转归完全不一样细胞免疫功能的抗感染作用感染发生

4、的两个基本要素：病原体和机体细胞免疫功能的抗感染作用为什么？乙肝病毒感染：有人为乙肝病毒携带者, 也有人成为慢性乙肝病人？HPV感染：多数人表现为无症状的HPV潜伏感染者，少数人表现为复发性HPV CMV感染: 90%的正常人隐性感染终生带病毒，但免疫功能低下时可致死？细胞免疫功能的抗感染作用为什么？T细胞免疫功能检测平台的建立和应用课件 HIV感染的自然史 CD4细胞(cell/mm3）800400 急性感染期 无症状期 艾滋病前期和艾滋病期 CD4 病毒载量抗HIV 的CTLHIV抗体 HIV感染的自然史 CD4细胞 急性感染期 HIV感染者的三种临床转归VirusCD4CD8 aHIVC

5、D4CD4CD8CD8 aHIVVirusVirusStandard 8 yFast : 4-5 y : (2%) (CCR genes, HLA B35Slow : 10 y : (2%), CCR genes, HLA B57HIV感染者的三种临床转归VirusCD4CD8 aHIVC免疫功能与机会性感染相关性 years200CD4 counts白念菌Zona卡波济肉瘤淋巴瘤PCP弓型体CMVMAIC48艾滋病期HIV load210免疫功能与机会性感染相关性 years200CD4 coun细胞免疫功能的抗感染作用不重视机体免疫功能的后果化疗药物的滥用耐药菌的产生二重感染的发生进一步损

6、害免疫功能细胞免疫功能的抗感染作用不重视机体免疫功能的后果化疗药物细胞免疫功能与感染细胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 细胞免疫的抗感染作用T细胞免疫功能的测定 T细胞亚群 T细胞功能细胞免疫功能测定的临床意义细胞免疫功能与感染细胞免疫功能的抗感染作用细胞免疫功能与感染免疫功能测定方法体内： PPD试验？体外： 体液免疫：B细胞数量，免疫球蛋白定量 细胞免疫：T细胞亚群的数量和功能 （流式细胞仪，ELISA，ELISPOT）细胞免疫功能与感染免疫功能测定方法体内：T细胞免疫功能的测定T细胞功能（细胞介素，增殖反应）功能亚群（CD28）激活亚群（CD38、 HLA-Dr）纯真亚群和记忆亚

7、群凋亡亚群, Treg（T细胞、CD4、CD8、B 、 NK）T细胞免疫功能的测定T细胞功能功能亚群（CD28）（T细胞、A cytometer looks like an easy-to-use machine but look inside:Its a complex laser machine!A cytometer looks like an easyPMTPMTPMTPMT 4DichroicFiltersBandpassFiltersFlow Cytometry PrincipleLaser 1234Flow cellPMTPMTPMTPMTDichroicFiltersBanT细

8、胞免疫功能的测定T细胞功能（细胞介素，增殖反应）功能亚群（CD28）激活亚群（CD38、 HLA-Dr）纯真亚群和记忆亚群凋亡亚群, Treg（T细胞、CD4、CD8、B 、 NK）T细胞免疫功能的测定T细胞功能功能亚群（CD28）（T细胞、淋巴细胞免疫表型检测指标B淋巴细胞（CD19+） 反映机体体液免疫功能状态 自然杀伤细胞（CD3-CD16/56+） 反映机体天然免疫功能状态 辅助性及杀伤性T淋巴细胞（CD3+CD4+/CD8+） 反映机体细胞免疫功能状态 T淋巴细胞纯真和记忆亚群（CD4+CD45RA+62L+/CD45RO+ ）判断CD3+CD4+降低的重要指标T淋巴细胞的激活亚群（

9、CD4+/CD8+CD38+/HLA-DR+） 评价细胞的激活状态。T淋巴细胞的功能亚群（CD4+/CD8+CD28+） 衡量T淋巴细胞功能的重要指标。 淋巴细胞免疫表型检测指标B淋巴细胞（CD19+） 反映机体体不同年龄组正常细胞亚群的建立淋巴细胞表型青年(18-40y,N=57)中年(41-60,N=45)老年(大于61y,N=52)B淋巴细胞6.430.61045714.219.7775662.424.339544自然杀伤细胞4.235.6968723.540.4539854.149.8711340辅助性T淋巴细胞25.164.0442164519.854.0259194619.655.

10、22911730杀伤性T淋巴细胞16.747.2321116615.942.32088258.244.41731114T淋巴细胞纯真亚群17.461.51175865.268.5407162.262.725688CD4/CD80.573.280.553.300.625.97不同年龄组正常细胞亚群的建立淋巴细胞表型青年(18-40y细胞免疫功能测定方法T细胞功能的测定T细胞增殖功能 同位素H3掺入试验 BrdU ，Ki67 CFSUT细胞毒试验（CTL）和细胞介素测定 同位素Cr51 四联体 ELISA 流式细胞仪 ELISPOT细胞免疫功能测定方法T细胞功能的测定T细胞增殖功能ELISPOT

11、方法ELISPOT方法是目前国际上广泛应用的较新的体外测定特异性抗体分泌细胞和细胞因子分泌细胞的方法。该方法可在单细胞水平检测淋巴细胞对特异性抗原的反应能力及计数特异性抗原刺激下细胞因子分泌细胞的频数。 优点：敏感-能检测产生细胞因子频率极低的细胞，灵敏度高达 1/1000000。 特异 直观-可直接在显微镜下人工计数斑点或通过ELISPOT分 析系统对斑点进行计数， 1 个斑点代表 1 个特异性 抗体分泌细胞或细胞因子分泌细胞。 ELISPOT 方法ELISPOT方法是目前国际上广泛应用的ELISPOT 原理- PBMC-刺激原孵育16 18h或4048hIFN抗体BSPA酶和底物斑点!EL

12、ISPOT 原理- PBMC-刺激原孵育16 18ELISpot 结果阴性对照阳性对照样本孔样本孔图中的每个斑点代表一个能分泌IFN- 的抗原特异性CD4+T细胞或CTLELISpot 结果阴性对照阳性对照样本孔样本孔图中的每个斑T细胞免疫功能与感染T细胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 T细胞免疫的抗感染作用T细胞免疫功能的测定 T细胞亚群 T细胞功能T细胞免疫功能测定的临床意义T细胞免疫功能与感染T细胞免疫功能的抗感染作用T细胞免疫功能与感染细胞免疫功能测定的临床意义HIV感染和艾滋病其它各种感染性疾病-病毒感染：SARS, HBV，HCV，EBV， CMV，HFRS, HFMD-结

13、核病，真菌感染。肿瘤和化疗病人的免疫功能监测器官移植病人的免疫监测自身免疫病和过敏性疾病T细胞免疫功能与感染细胞免疫功能测定的临床意义HIV感染细胞免疫功能与感染细胞免疫功能测定的临床意义中国HIV/AIDS的免疫病理改变和免疫重建细胞免疫功能与感染细胞免疫功能测定的临床意义中国HIV/艾滋病的主要免疫病理改变CD4+ T 细胞数的减少；CD4+ T 功能的减低;异常的细胞免疫激活。艾滋病的主要免疫病理改变CD4+ T 细胞数的减少； HIV感染的自然史 CD4细胞(cell/mm3）800400 急性感染期 无症状期 艾滋病前期和艾滋病期 CD4 病毒载量抗HIV 的CTLHIV抗体 HIV

14、感染的自然史 CD4细胞 急性感染期 HIV/AIDS 患者淋巴细胞亚群与正常对照比较HIV/AIDS患者n=263正常对照n=57B细胞计数109 (159,71)*261 (294,207)NK细胞计数110 (195,61)*339 (471,234)CD4+T计数205 (348,63)*787 (1058,615)纯真CD4+T计数29 (86,6)*328 (382,256)纯真CD4+T比例18.5 (32.0,6.5)*35.4 (45.5,30.0)记忆CD4+T计数136 (232,44)*453 (538,360)记忆CD4+T比例72.6 (83.2,60.1)*56.

15、0 (66.3,47.7)CD4+CD28+功能亚群比例86.1 (94.0,68.3)*95.7 (97.6,91.0)CD8+T计数652 (914,422)538 (642,480)CD8+CD38+激活亚群比例84.3 (92.7,69.0)*42.6 (50.6,36.1)（计数：个/mm3，比例：%，数值以中位数（上四分位数，下四分位数）表示）*与正常对照组相比存在显著差异P0.001。与正常对照组相比存在显著差异P=0.021。HIV/AIDS 患者淋巴细胞亚群与正常对照比较HIV/AI早中晚3组患者淋巴细胞亚群的比较分组组n=131组n=66组n=66CD4+T细胞计数63 (

16、134,20)279 (317,246)493 (627,413)病毒载量4.88 (5.41,4.46)4.3 (4.71,3.69)3.49 (4.22,2.73)B细胞计数84 (118,51)*130 (171,91)161 (216,123)纯真CD4+T比例11.5 (25.5,4.7)*26.3 (37.4,15)25.4 (40.2,14.1)记忆CD4+T比例77.8 (88.3,66.7)*67.2 (79.1,58)64.9 (77.2,54.1)CD4+CD28+T/CD4+T72.7 (89.3,52.8)*92.9 (95.8,85.1)91.3 (94.9,82.

17、7)CD8+CD38+T/CD8+T90.2 (94.7,80.1)*78.9 (86.7,66.4)69 (84.9,61.5)组与、组相比P0.001, 组与组相比P0.001。*组与、两组均存在显著差异P0.001, 、组两组无显著差异。（计数：个/mm3，比例：%，数值以中位数（上四分位数，下四分位数）表示）早中晚3组患者淋巴细胞亚群的比较组组组CD4+THIV/AIDS的免疫病理改变选择性纯真T4细胞的减少正常人HIV感染者AIDS病人HIV/AIDS的免疫病理改变选择性纯真T4细胞的减少正HIV/AIDS的免疫病理改变T4细胞辅刺激信号受体的表达减少正常人HIV感染者AIDS病人H

18、IV/AIDS的免疫病理改变T4细胞辅刺激信号受体的表CD28T细胞辅刺激信号受体CD28T细胞辅刺激信号受体HIV/AIDS的免疫病理改变异常的T细胞免疫激活AIDS病人HIV感染者正常人HIV/AIDS的免疫病理改变异常的T细胞免疫激活AID中国艾滋病病人的免疫改变特点艾滋病病人有选择性的纯真 T4细胞减少;CD4+CD28+ 是细胞免疫功能的标记指标;CD8+CD38+ 亚群是疾病进展和病毒复制的预测指标。.HIV感染当CD4+T细胞计数低于200个/mm3时:CD28表达下降较感染早中期更为严重纯真CD4+T细胞减少的速率较感染早中期明显加快 异常的免疫激活更为严重中国艾滋病病人的免疫改变特点艾滋病病人有选择性的纯真 T4细T细胞免疫功能检测在SARS诊治中的应用T细胞免疫功能检测在SARS诊治中的应用T细胞检测对SARS诊断的意义SARS病人CD4+细胞(98%)和CD8+(80%)细胞同时减少；发生在发病一周内（有些发生在胸片改变之前）T细胞检测有助于SARS的早期诊断T细