临床检验方法的评价课件

1、临床检验方法的评价郭 健卫生部北京医院卫生部临床检验中心临床检验方法的评价1临床检验方法的评价郭 健临床检验方法的评价1方法评价方法选择分析前准备常规分析样品统计质控报告结果预防措施方法发展临床检验方法的评价2方法评价方法选择分析前准备常规分析样品统计质控报告结果预防措分析方法分级决定性方法（definitive method）：经详尽研究尚未发现不准确度或不确定性原因的方法。参考方法（reference method）：经详尽研究证实其不准确度与不精密度可以忽略的方法。常规方法（routing method）：可满足临床或其他目的需要的日常使用的方法。临床检验方法的评价3分析方法分级决定性方

2、法（definitive method）临床检验方法的评价4临床检验方法的评价4临床检验方法的评价5临床检验方法的评价5方法分级被测物决定性方法参考方法血细胞计数ICSH血清酶IFCCHbA1cIFCC or NGSP临床检验方法的评价6方法分级被测物决定性方法参考方法血细胞计数ICSH血清酶IF常规方法参考方法决定性 方法准确度增加应用范围增加不同方法的关系临床检验方法的评价7常规方法参考方法决定性准确度增加应用范围增加不同方法的关系临标准品分级标准品（reference material）：充分均匀并具有一个或多个良好确定的特性值的材料或物质，用来校准仪器设备、评估测定方法或给其它物质赋值

3、。一级标准品（原级参考物）：具有最高计量学特性的参考物质，由一级参考测量过程定值 二级标准品：用一级标准品校准，参考方法定值。校准品：用二级标准品校准，拟被用于校准的常规方法定值。用于对常规方法和仪器的校准。临床检验方法的评价8标准品分级标准品（reference material）：充国际单位原级参考方法一级参考品次级参考方法二级参考品厂家选定方法标准方法厂家工作校准品产品校准品终用户方法常规样品检测结果材料 校准和赋值 测量过程 执行者 不确定度IFCCARMLMLEnd-user临床检验方法的评价9国际单位原级参考方法一级参考品次级参考方法二级参考品厂家选定检验结果的可溯源性校准品的应用

4、与试剂、仪器配套使用使用有证参考品（CRM， GBW）不能使用定值质控品（Control Materials)代替校准品(Calibrator)临床检验方法的评价10检验结果的可溯源性校准品的应用临床检验方法的评价10临床样本国家标样JJG464-96校准品厂家标准TC 158 mg/dl 1.5TG = 150 mg/dl 1.4HDL-C = 56.2 mg/dl 0.4检测结果TGTCHDL-C国家计量标准吸光度 0.005波长 340 nm/505nm漂移 0.0015自动生化分析仪仪器名称：HITACHI 7170A测定范围：TC = 3-800 mg/dl 3%TG = 0-11.

5、4 mmol/l 2.4%HDL-C = 3-150 mg/dl 2.6%临床检验方法的评价11临床样本国家标样校准品厂家标准检测结果国家计量标准自动生化分临床检验方法的评价12临床检验方法的评价12人血清无机成分分析标准物质GBW09135血清胆固醇标准物质GBW09138一级标准物质二级标准物质红细胞微粒标准物质GBW（E）090001胆红素标准物质GBW（E）090002氰化高铁血红蛋白溶液标准物质GBW（E）090004纯化血红蛋白标准物质GBW（E）090011临床检验方法的评价13人血清无机成分分析标准物质GBW09135一级标准物质二级方法的评价的主要内容初步评价（NCCLS E

6、P10） 精密度（ NCCLS EP5） 对比及偏差（ NCCLS EP9） 线性（ NCCLS EP6） 抗干扰能力（ NCCLS EP7） 基质效应（ NCCLS EP14） 临床准确度（NCCLS GP10）临床检验方法的评价14方法的评价的主要内容初步评价（NCCLS EP10）临床检NCCLS文件EP9-A用患者样本进行方法对比及偏差评估批准指南1995年12月临床检验方法的评价15NCCLS文件EP9-A用患者样本进行方法对比批准指南199目的及用途引进新方法前或用一种方法替代另一种方法时进行偏差分析。评价两种分析方法（同一分析项目）的偏差。临床检验方法的评价16目的及用途引进新方

7、法前或用一种方法替代另一种方法时进行偏差分评价操作要求熟悉仪器操作熟悉评价方案质控足够的数据临床检验方法的评价17评价操作要求熟悉仪器操作临床检验方法的评价17实验样本要求来源于健康人或患者，无干扰，尽量避免贮存；测定物浓度范围应在医学决定水平范围内均匀分布；样本数至少40例，增加数量能提高可信性临床检验方法的评价18实验样本要求来源于健康人或患者，无干扰，尽量避免贮存；临床检对比方法厂家要求的实验室常规方法或公认的参考方法。 具有好的精密度 没有已知的干扰物 相同单位 相对国家标准或参考方法的偏差是已知的临床检验方法的评价19对比方法厂家要求的实验室常规方法或公认的参考方法。临床检验方测定方

8、法每天分别用两种方法进行测定，测定顺序：1、2、3、4、5、6、7、88、7、6、5、4、3、2、1测定次数：至少测定5天，共40个样本临床检验方法的评价20测定方法每天分别用两种方法进行测定，临床检验方法的评价20数据监督系统误差人为误差常规质控临床检验方法的评价21数据监督系统误差临床检验方法的评价21熟悉仪器及方法收集数据检查方法内的离群点 界限： （双份测定）相对差值均值的4倍实验步骤临床检验方法的评价22熟悉仪器及方法实验步骤临床检验方法的评价22绘图 均值散点图（X，Y） 所有值散点图（Yij，Xi） 偏差图 散点图（ Yij -Xij），Xi）临床检验方法的评价23绘图 均值散点

9、图（X，Y）临床检验方法的评价23临床检验方法的评价24临床检验方法的评价24临床检验方法的评价25临床检验方法的评价25均值散点图（X，Y）临床检验方法的评价26均值散点图（X，Y）临床检验方法的评价26偏差图：每次测定的Y均值与X均值 之差-相应X均值图临床检验方法的评价27偏差图：每次测定的Y均值与X均值临床检验方法的评价27线性相关目测检查两种方法间离群值目测检查 界限：4倍两种方法间绝对偏差的均值 绝对差值允许范围: 相对差值允许范围:临床检验方法的评价28线性相关目测检查临床检验方法的评价28适合范围 计算 r，r2 = 0.95 范围适合 r2 0.95 扩大数据范围线性回归 计

10、算 均匀离散度的直观检查临床检验方法的评价29适合范围临床检验方法的评价29临床检验方法的评价30临床检验方法的评价30临床检验方法的评价31临床检验方法的评价31预期偏差及可信范围 线性回归方程 计算偏差（高、中、低3组）解释实验结果并与内部标准比较临床检验方法的评价32预期偏差及可信范围临床检验方法的评价32临床检验方法的评价33临床检验方法的评价33临床检验方法的评价34临床检验方法的评价34定量分析方法的线性评价Evaluation of The Linearity of Quantitative Analytical MethodsEP6-P临床检验方法的评价35定量分析方法的线性评

11、价Evaluation of The L目的为实验室中采用定量分析方法的用户提供评价仪器或方法是否满足厂家线性指标的评价方法。用户可为分析方法设定线性范围。临床检验方法的评价36目的为实验室中采用定量分析方法的用户提供评价仪器或方法是否满定义实验范围（Assay Range）： 或者线性范围（Linear Range)：分析系统最终输出的、与被测物浓度或活性成比例的、浓度或活性值范围临床检验方法的评价37定义实验范围（Assay Range）： 或者临床检验方法定义线性（Linearity）:曲线接近直线的程度的量；与完整系统的反应相关（是最后的分析结果或解释，不仅是仪器的输出结果）临床检验方

12、法的评价38定义线性（Linearity）:临床检验方法的评价38Scope and Limitations线性是分析方法的一个特征，不同于准确性和精密度。线性实验应该使用与待分析物基质相似的样本。线性检验系统反应，包括校准、线性化技术、系数和仪器反应。临床检验方法的评价39Scope and Limitations线性是分析方法的一使用者的需求用简单的实验来检验厂家标示的线性范围及定量分析方法的分析范围。在实验室中作为方法学的信息（方法线性）。进行线性评价实验。临床检验方法的评价40使用者的需求用简单的实验来检验厂家标示的线性范围及定量分析方仪器的熟悉过程执行分析过程的实验室人员必须掌握仪器

13、操作和维护程序、样本准备方法和校准。对较简单的设备需要5天或更少时间。对较复杂的多通道设备需要5天或更长时间。临床检验方法的评价41仪器的熟悉过程执行分析过程的实验室人员必须掌握仪器操作和维护实验周期在完成仪器熟悉过程后开始实验并收集数据。全部实验和数据采集应在同一工作日内完成。临床检验方法的评价42实验周期在完成仪器熟悉过程后开始实验并收集数据。临床检验方法线性评价实验样本要求： 最少4个浓度水平，推荐5个水平。基质效应： 应使用与病人样本相似的样本或注明基质类型。临床检验方法的评价43线性评价实验样本要求：临床检验方法的评价43可以使用的样本病人混合血清 理想的样本基质 高值样本：高于上限

14、30% 低值样本：线性低限或更低。临床检验方法的评价44可以使用的样本病人混合血清临床检验方法的评价44可以使用的样本含添加物的混合病人血清：加入品在没有干扰物存在时不需高纯度。经处理的材料稀释的混合血清用于降低分析物浓度，材料处理：透析、热处理、层析。临床检验方法的评价45可以使用的样本含添加物的混合病人血清：临床检验方法的评价45可以使用的样本生理盐水稀释的混合血清：在线性实验中使用此类样本可掩盖不同的基质效应。商品质控或校准品：此类样本由于不是正常的生理形式，可掩盖实际的线性结果。临床检验方法的评价46可以使用的样本生理盐水稀释的混合血清：临床检验方法的评价46可以使用的样本不同比例稀释

15、商品质控物；水溶液 ：一般无基质效应其它溶液：基质效应与有机溶剂相似临床检验方法的评价47可以使用的样本不同比例稀释商品质控物；临床检验方法的评价47推荐的样本添加材料ALB：白蛋白干粉、human fraction V.乙醇：无水乙醇ALP：纯酶AMS：腮腺或胰腺提取物BIL： 胆红素纯品Ca: CaCO3Cl: NaCl临床检验方法的评价48推荐的样本添加材料ALB：白蛋白干粉、human fract推荐的样本添加材料CHOL：胆固醇纯品或稀释质控品CO2： CaCO3CREA：标准液或高值血清-ALT： 纯酶GLU： 右旋糖AST： 纯酶ALT： 纯酶临床检验方法的评价49推荐的样本添加

16、材料CHOL：胆固醇纯品或稀释质控品临床检验方推荐的样本添加材料HBD： 纯酶LDH： 纯酶Lipase： 胰腺提取物Mg： MgCl2P: K(H)2PO4或Na(H)PO4TP： 白蛋白干粉、人或牛的成份VUA： 在得不到高值病人样本时，使用标准储备液或干燥尿酸 。BUN：在得不到高值病人样本时，使用标准储备液或干燥尿素 。临床检验方法的评价50推荐的样本添加材料HBD： 纯酶临床检验方法的评价样本分析顺序分析序列应为随机排列。有显著携带污染时，应用空白隔开样本。每个实验组内应至少分析4个（最好是5个）不同浓度水平的样本。临床检验方法的评价51样本分析顺序分析序列应为随机排列。临床检验方法

17、的评价51样本浓度范围应覆盖待评线性范围的上、下限。评价结果不满意时应重新设定浓度。线性范围内至少应保留有4个浓度。临床检验方法的评价52样本浓度范围应覆盖待评线性范围的上、下限。临床检验方法的评价样本的准备足量的混合血清。低浓度混合血清（No1）；高浓度混合血清（No5）血清（No2）：3份“No1” + 1份“No5”血清（No3）：2份“No1” + 2份“No5”血清（No4）：1份“No1” + 3份“No5”临床检验方法的评价53样本的准备足量的混合血清。临床检验方法的评价53样本浓度计算 C1V1 + C5 V5浓度 = - V1 + V5临床检验方法的评价54样本浓度计算临床检

18、验方法的评价54数据收集x1 y1-1 y1-2 y1-3 y1-4x2 y2-1 y2-2 y2-3 y2-4x3 y3-1 y3-2 y3-3 y3-4 x4 y4-1 y4-2 y4-3 y4-4x5 y5-1 y5-2 y5-3 y5-4临床检验方法的评价55数据收集x1 y1-1 数据评价观察有无明显的数据错误。若有明显异常时应判断是否为离群点。如离群点超出2点，则保留全部数据或重做全部实验。临床检验方法的评价56数据评价观察有无明显的数据错误。临床检验方法的评价56离群点检查用于特定浓度Y值离群点的检验。将4个重复值从大到小排列（Y1到Y4）。计算：D = Y1 - Y4若Y1可能

19、是离群点，计算： D1 = （Y1 - Y2）/ D若Y4可能是离群点，计算： D4 = （Y3 - Y4）/ D临床检验方法的评价57离群点检查用于特定浓度Y值离群点的检验。临床检验方法的评价5离群点判断判断值（Critical value)(0.05) 0.765(0.01) 0.889临床检验方法的评价58离群点判断判断值（Critical value)临床检验方法绘图和评价线性X-Y图，X轴为分析物浓度。反应值或仪器输出值为Y轴。目测离群值。 ( Y= aX + b )目测线性判断是否符合要求。进行统计学判断和评价。临床检验方法的评价59绘图和评价线性X-Y图，X轴为分析物浓度。临床检

20、验方法的评价注意：统计学标准和临床可接受限不同。慎用方法学线性范围从0开始。有临床意义的浓度应在线性评价中：最小的线性浓度医学决定水平最大的线性浓度临床检验方法的评价60注意：统计学标准和临床可接受限不同。临床检验方法的评价60参考文献Dixon W.J. and Massey F.J. introduction to statistical analysis, 3rd edition, McGraw-Hill Book Co., New York, 1969, pp308-310, 500, 536-537.Weissberg A. and Beatty G.H. Tables of tol

21、erance-limit factors for normal distributions, Technometrics 2:4, 1960Graybill, Franklin A. An introduction to linear statistical models, volume I, McGraw-Hill Book Company, 1961, p191.临床检验方法的评价61参考文献Dixon W.J. and Massey F.J.临床化学设备的精密度评价Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devi

22、ces, Approved Guideline, 1984EP5临床检验方法的评价62临床化学设备的精密度评价Evaluation of Prec精密度的内容批内批间日内日间总精密度临床检验方法的评价63精密度的内容批内临床检验方法的评价63实验方法试剂和校准物：同一批号样本：基质与临床样本相似，2个以上浓度（参考医学决定水平）。实验天数：20天以上实验次数：每天2批，每批2个（批号）样本，每个样本重复2次临床检验方法的评价64实验方法试剂和校准物：同一批号临床检验方法的评价64精密度实验天数1批2批XX11X12X1X11-X12X21X22X2X21-X2212345临床检验方法的评价65

23、精密度实验天数1批2批XX11X12X1X11-X12X21精密度评价批内：日内：（批间）日间：总精密度：临床检验方法的评价66精密度评价批内：临床检验方法的评价66批内不精密度I = 总实验天数（一般为20天）j = 每天测定的批次（一般为2批）Xij1 = 第i天j批实验第一次结果Xij2 =第i天j批实验第二次（重复）结果临床检验方法的评价67批内不精密度I = 总实验天数（一般为20天）临床检验方法的批间不精密度I = 实验天数（通常为20天）Xi1 = 第i天第一批实验结果的平均值（通常重复2次）Xi2 = 第i天第二批实验结果的平均值（通常重复2次）临床检验方法的评价68批间不精密

24、度I = 实验天数（通常为20天）临床检验方法的评日间不精密度I= 实验天数X = 所有结果的平均值Xi第I天所有结果的平均值临床检验方法的评价69日间不精密度I= 实验天数临床检验方法的评价69总不精密度临床检验方法的评价70总不精密度临床检验方法的评价70实验室检验的临床准确性评价NCCL GP-10临床检验方法的评价71实验室检验的临床准确性评价NCCL GP-10临床检验方法的GP10-AAssessment of The Clinical Accuracy of Laboratory Tests Using Receiver Operating Characteristic (ROC

25、) Plots; Approved Guideline (1995)“用ROC曲线图评价实验室检验的临床准确性”临床检验方法的评价72GP10-AAssessment of The Clinic定义临床准确性 Clinical Accuracy： 衡量检验项目对于不同健康状况的区分能力。如：健康与疾病；良性与恶性疾病；对治疗的反应性与不反应性；预测疾病的好转与恶化临床检验方法的评价73定义临床准确性 Clinical Accuracy：临床检验定义临床有用性 Usefulness： 检验信息在病人管理中的实用价值。 如： 检验成本； 假阳（或假阴）性率； 有损伤小、成本低的其他方法； 检验技术

26、要求； 检验创伤和舒适性临床检验方法的评价74定义临床有用性 Usefulness：临床检验方法的评价74定义临床检验信息：准确性 敏感性 Sensitivity 特异性 Specificity有用性临床检验方法的评价75定义临床检验信息：临床检验方法的评价75定义ROC： Receiver Operating Characteristic 接收机操作特性ROC曲线： 描述实验室检验的敏感性和特异性关系的曲线。临床检验方法的评价76定义ROC：临床检验方法的评价76ROC曲线临床检验方法的评价77ROC曲线临床检验方法的评价77定义特异性 Specificity真阴性结果（NT）数真阴性结果数

27、 + 假阳性结果（PF）数临床检验方法的评价78定义特异性 Specificity临床检验方法的评价78定义敏感性 Sensitivity真阳性结果（PT）数真阳性结果数 + 假阴性结果（NF）数临床检验方法的评价79定义敏感性 Sensitivity临床检验方法的评价79定义阳性预测值 （PPV）真阳性结果数真阳性结果数 + 假阳性结果数临床检验方法的评价80定义阳性预测值 （PPV）临床检验方法的评价80定义阴性预测值 （NPV）真阴性结果数真阴性结果数 + 假阴性结果数临床检验方法的评价81定义阴性预测值 （NPV）临床检验方法的评价81ROC曲线的意义临床检验方法的评价82ROC曲线的意义临床检验方法的评价82ROC曲线的意义临床检验方法的评价83ROC