微柱凝集技术在新生儿免疫性溶血课件

1、微柱凝集技术在新生儿免疫性溶血病中的应用探讨毛伟 王芳 黄霞重庆市血液中心微柱凝集技术是红细胞抗原与相应抗体发生的凝集反应通过微柱介质进行检测的一种免疫学新技术 目前主要的微柱介质有： 凝胶 微玻璃珠其主要作用及优缺点分离过滤红细胞或红细胞凝块准确、灵敏度高、简单、结果可较长时间保存对技术人员的要求不高，有利于统一标准有一些假阳性对送检血样要求高，主要是纤维蛋白的干扰临床主要用途血型检测交叉配血抗体筛查抗体鉴定直接抗人球蛋白试验间接抗人球蛋白试验抗体效价滴定新生儿溶血病检查抗人球蛋白法是用于鉴定新生儿免疫性溶血病的经典方法 推广难点 操作繁索，技术要求高，影响因素多，结果不易控制，临床医院不易

2、常规开展，只限于少数的输血科或专业血型血清学实验室才能开展，极大地影响了临床基层医院对HDN的及时诊断治疗。 研究对象 本市各医院送检的HND血液标本105例，出生时间1-10天，临床怀疑HDN。其中ABOHDN95例，RHHDN10例。 主要设备 博唯优系统工作站（ BioVue）血清学专用离心机37恒温水浴箱56恒温水浴箱主要试剂 血型鉴定试剂（中科院输血所）A、B、O标准红细胞（自制）0.01M的二巯基乙醇（自制）广谱抗人球蛋白试剂（中科院输血所）BioVue微柱抗人球蛋白卡 ABO血型不合HDN血清学检查 母体血清中IgG抗-A（抗-B）抗体效价测定：400ul母体血清与400ul0.

3、01M的二巯基乙醇（0.01M）混匀，37孵育2小时后，对倍稀释到第12管，分别用抗人球蛋白试管法和BioVue抗人球蛋白卡进行IgG抗体效价测定。新生儿标本血清学检查 BioVue红细胞直接抗人球蛋白试验 患儿红细胞用生理盐水配成5%红细胞悬液，加10ul红细胞悬液到BioVue抗人球蛋白卡1孔中，置专用孵育器中10分钟，专用离心机离心5分钟，观察并记录结果。游离抗体和放散抗体检测 试管法取6支小试管分别标记上游离A、B、O和放散A、B、O，分别加入患儿血清和患儿放散液2-4滴，再按标记加入1滴5%酶处理标准红细胞A、B、O悬液，置37致敏1小时，取出后用生理盐水洗涤3次，加入广谱抗人球蛋白

4、试剂1滴，以1000转/分钟离心1分钟，肉眼观察结果。阴性结果加阳性致敏细胞以检查试验结果的可靠性。 游离抗体和放散抗体检测BioVue抗人球蛋白 法BioVue抗人球蛋白卡分别标记上游离A、B、O和放散A、B、O，分别加入患儿血清和患儿放散液40ul，再按标记加入10ul5%标准红细胞A、B、O悬液，置专用孵育器中10分钟，专用离心机离心5分钟，观察并记录结果。 RHHDN血清学检查 直接抗人球蛋白试验 试管法取试管2支，分别加入洗涤后的5%患儿红细胞各1滴，其中一管加入广谱抗人球蛋白试剂1滴，另一管加入生理盐水1滴，混匀后立即以1000转/分钟离心1分钟。肉眼观察结果。阴性结果加阳性致敏细

5、胞以检查试验结果的可靠性。 直接抗人球蛋白试验BioVue法患儿红细胞用生理盐水配成5%红细胞悬液，加10ul红细胞悬液到BioVue抗人球蛋白卡1孔中，置专用孵育器中10分钟，专用离心机离心5分钟，观察并记录结果。间接抗人球蛋白试验 BioVue法用BioVue抗人球蛋白卡1孔加入母体血清40ul，再加入5%O型标准红细胞悬液10ul，置专用孵育器中10分钟，专用离心机离心5分钟，观察并记录结果。 判断标准 抗人球蛋白试验按标准操作规程的判读标准报告结果。BioVue抗人球蛋白试验按BioVue工作站提供的判读标准报告结果。IgG抗-A（抗-B）抗体效价测定 在95例ABOHDN中，分别用改

6、良抗人球蛋白试管法和BioVue抗人球蛋白卡进行IgG抗体效价测定。BioVue抗人球蛋白卡测定的抗体浓度明显平均比抗人球蛋白试管法测定的抗体浓度高1-2个滴度。 表1 IgG抗-A（抗-B）抗体效价分布方法 抗-A（B）效价 例数 试管法 1:128 8 BioVue卡 1:128 4 试管法 1:512 28 BioVue卡 1:512 23 试管法 1:1024 47 BioVue卡 1:1024 55 试管法 1:2048 12 BioVue卡 1:1024 13患儿红细胞直接抗人球蛋白试验 患儿红细胞分别用改良抗人球蛋白试管法和BioVue抗人球蛋白卡进行检测，其中72例阳性，23例

7、阴性，两种方法结果完全一致，经统计学处理P0.05，无显著性差异。 游离抗体和放散抗体试验 患儿游离抗体和放散抗体分别用抗人球蛋白试管法和BioVue抗人球蛋白卡进行检测，用抗人球蛋白试管法检测游离抗体阳性77例，放散抗体阳性73例。用BioVue抗人球蛋白卡检测游离抗体阳性77例，放散抗体阳性75例。两种方法结果经统计学处理P0.05，无显著性差异。 RHHDN 10例RHHDN的检测，其直接抗人球蛋白试验分别用抗人球蛋白试管法和BioVue抗人球蛋白卡进行检测均为阳性，两种方法结果完全一致，间接抗人球蛋白试验分别用抗人球蛋白试管法和BioVue抗人球蛋白卡进行检测也均为阳性，两种方法结果完

8、全一致。RH抗体分别为抗E抗体5例，抗D抗体4例，抗c抗体1例。新生儿免疫性溶血病检测的重要性 新生儿免疫性溶血病是目前危及新生儿生 命的疾病之一。在我国主要多见于ABO血型不合，以O型母亲，A型或B型胎儿为主要发病人群，ABO血型不合引起的HDN虽然不及RHHDN凶险，但在我国发病率也比较高，严重的可引起患儿的死亡。及时准确尽快的诊断对于治疗HDN显得尤为重要。 检测技术的局限 以前诊断HDN主要采用传统的抗人球蛋白试管法进行检测，此方法对临床来说，技术要求高，操作繁琐，反应时间长，影响因素多，结果不易判断，大大影响了临床医院开展HDN的检测，同时也延迟了HDN的及时治疗。 血型血清学检测技术的进步 Lappierre博士1986年发明了微柱凝集技术，到目前已成为一种常规的红细胞血型血清学检测新技术。微柱凝集技术相对于传统的抗人球蛋白试管法来说，对实验室人员技术要求不高，操作简单，反应时间短，影响因素少，结果易于判断，是一种易于在临床大量开展的一种新型的红细胞血型血清学检测方法。方法比较 我们通过传统的抗人球蛋白试管法和BioVue微柱凝集技术同时对HDN进行检测，发现除在检测母体血清中抗体效价时，BioVue抗人球蛋白卡测定的抗体浓度明显平均比抗人球蛋白试管法测定的抗体浓度高1-2个滴度外，在患儿红细胞直接抗人球蛋白试验，游离抗体和放散抗体