高效液相色谱法测定五虎散中 羟基红花黄色素A的含量

1、高效液相色谱法测定五虎散中 羟基红花黄色素A的含量【摘要】目的建立复方制剂五虎散中红花有效成分的高效液相色谱测定方法。方法采用Agilent18(5，2504.60)色谱柱；以甲醇-0.4%磷酸水3367为流动相，流速为1lin-1，检测波长为402n。结果羟基红花黄色素的线性范围分别为0.05650.452g(r=0.9994),平均加样回收率(n=6)为99.15%，RSD为4.51%。结论该测定方法简便可行、重复性好，可用于该制剂中红花有效成分的含量测定。【关键词】五虎散；羟基红花黄色素；高效液相色谱Abstrat：bjetiveTestablishtheethdfrdeterinati

2、nfeffetivepnentsinuhupderbyRP-HPL.ethdsThententsfhydrxysafflryellAasdeterinedbyanHPLsysteusingfllingnditins:thelunasAgilent18(5,2504.60),ithH3H-0.4%H3P4aterslutin33:67askilephase,theflrateas1.0lin-1,thedetetinavelengthasat402n.ResultsThelinearrangefhydrxysafflryellAas0.05650.452gr=0.9994;itsaverager

3、everyere99.15%,rrespndingRSDere4.51%.nlusinTheHPLethdissiple,aurate,highlyseletiveandreprduible,thusitanbeusedasqualityntrlfpunduhupder.Keyrds:uhupder;HydrxysafflryellA;HPL五虎散是?中国药典?收载的品种，由当归、红花、防风、天南星制和白芷等5味中药组成，具有活血散淤、消肿止痛作用，用于跌打损伤、淤血肿痛等。法定标准1中仅收载了显微鉴定和当归、白芷的TL定性鉴别。未有含量测定标准。该制剂的疗效确切，在医院广泛使用。为建立五虎散

4、的含量测定方法,笔者采用了HPL法测定五虎散中羟基红花黄色素A，并对其含量测定方法进展了系统研究，现报道如下。1器材1.1仪器BS124S型电子分析天平德国Sartrius；Agilent1100型高效液相色谱仪。1.2试剂甲醇色谱纯，erk公司，超纯水，甲醇分析纯。1.3样品五虎散医院制剂室消费，批号为2022080120220803共两批。1.4对照品羟基红花黄色素A(批号111637-202202)，对照品购自中国药品生物制品检定所。2方法与结果2.1Agilent18柱5，2504.6；流动相：甲醇-0.4%磷酸水溶液3367；流速为1lin-1，检测波长为402n；柱温：室温；进样量

5、10l。在该色谱条件下，羟基红花黄色素A可以到达基线别离，其他成分对测定无干扰。结果见图1。2.2样品的制备2.2.1供试品溶液的制备精细称取五虎散粉约1g，置于10l具塞三角瓶中，准确参加pH为2的95%乙醇5l，称重，超声30in，室温放置20in后，以pH为2的95%乙醇补足损失的重量，摇匀，过滤。取续滤液过0.45微孔滤膜，即得。a-对照品羟基红花黄色素Ab-五虎散样品-缺红花阴性样品图1羟基红花黄色素A的HPL图谱2.2.2对照品溶液的制备精细称取对照品羟基红花黄色素A适量，配制成每毫升中含羟基红花黄色素A0.565g的对照品溶液。2.3线性关系分别汲取对照品溶液1，2，4，6，8l

6、注入高效液相色谱仪，按色谱条件测定。以各对照品进样量(Y)对峰面积(X)进展线性回归处理，结果显示，羟基红花黄色素A进样量在0.05650.452g范围呈线性关系，回归方程为Y=1870X+12.57，相关系数r=0.9994。2.4精细度实验精细汲取上述对照品溶液5l，连续进样6次，测得羟基红花黄色素A峰面积平均值为536.95，RSD为3.52%。说明分析方法精细度良好。2.5稳定性实验精细汲取同一供试品溶液10l分别在0，1，3，4，5，6h按上述色谱条件测定6次，结果羟基红花黄色素A的平均峰面积为0.2804,RSD为3.60%。说明供试品溶液在6h内稳定性良好。2.6重复性实验取同一

7、批号样品20220801，按供试品溶液制备项下操作，平行制备6份，按色谱条件测定百分含量(%)，羟基红花黄色素A的平均含量为0.1641gg-1，RSD为5.0%。说明分析的重复性良好。2.7加样回收率实验精细称取含量的五虎散粉202208010.5g，分别精细参加一定量的羟基红花黄色素A对照品，按供试品溶液制备项下操作，重复操作6份，按色谱条件测定含量，计算回收率。结果见表1。表1羟基红花黄色素A回收率实验结果3样品测定精细称取活血通络片粉约1g(同一批号称取3个样品，然后算出平均值作为结果)，按样品制备方法制备供试品溶液，分别精细汲取对照品溶液4l与样品供试液各10l，按上述拟定的色谱条件测定，结果见表2。表2样品测定结果gg-14讨论本实验曾采用乙腈-水系统、甲醇-水系统的不同梯度为流动相，结果以文中条件别离效果好，重现性强，被检成分均到达基线别离，理论塔板数均在10000以上。该分析方法是在?中国药典?收载的红花含量测定方法1上加以改良的方法。但我们注意到在该分析过程中，应注意控制柱温在25。柱温过高将影响羟基红花黄色素A别离度与峰的对称性。羟基红花黄色素A受热不稳定，故该提取方法宜采用短时间超声提龋实验发现超