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1、PAGE3基因探针及其应用当前人类基因组研究方兴未艾,许多基因的结构、功能相继得到阐明。人类基因组有3109个碱基对,约有10万个基因在不停地工作,我们该如何从这庞大的基因组中找到自已感兴趣的目的基因,尤其是单拷贝基因这里就需要用到核酸杂交技术。所谓核酸杂交,是根据碱基配对原理,以已知DNA片断(基因片断)作为探针与待测样品DNA片断进行杂交,从而判断两者的一致性或同源性程度。其中,选择、制备合适的基因探针至关重要。1基因探针的概念基因探针,即核酸探针,是一段带有检测标记,且顺序已知的,与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合,产生杂交信号,能从浩翰的基因
2、组中把目的基因显示出来。根据杂交原理,作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件:应是单链,若为双链,必须先行变性处理。应带有容易被检测的标记。探查不同的目的基因和不同种类的基因缺陷,应当选择使用不同种类和长度的探针。2基因探针的种类总体上,基因探针可以分为人工合成的DNA探针和天然的克隆探针两钟。人工合成的DNA探针(主要是指寡核苷醚探针)用磷酸三酯法或亚磷酸三酯法等化学法人工合成,目前均由DNA合成仪合成。最常见的寡核苷酸探针长度在1830个碱基之间。其特异性可以根据需要加以改变,以识别靶序列中单碱基变化。如果被测基因的序列已知,基因缺陷主要是点突变,可以人工合成一段与被测序列互补的寡苷酸
3、探针。通常是两种寡核苷酸探针同时使用,一个与正常序列互补,一个与缺陷序列互补,通过分子杂交,将缺陷基因与正常基因区别开来。天然的克隆探针是对天然核酸序列进行克隆得到,大致包括cDNA探针、基因组探针、RNA探针、内含子序列探针和小卫星DNA探针等。最常见的有三种:cDNA探针:经典方法是先从细胞总RNA中分离出mRNA,再由逆转录途径从mRNA合成cDNA,构建cDNA文库,并用适当方法从文库中筛选出所需的cDNA克隆。也可应用2,这种惊人的密度大大提高了基因探针的检测效率。由于基因芯片技术的迅速发展,将使基因探针的应用更为广泛。可以预见,今后基因探针技术的发展必将日益突出地体现出“规模化”、“自动化”、“程序化”、
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