粪大肠菌群的测定演示文稿课件

主讲教师李孝坤项目四：城镇污水监测

任务7粪大肠菌群的测定主讲教师李孝坤项目四：城镇污水监测

任务7粪大肠菌

测定方法和原理1试剂和仪器2测定过程33结果计算44任务7粪大肠菌群的测定

测定方法和原理1试剂和仪器2测定过程33结果计算44任务1.1方法名称与适用范围水质粪大肠菌群的测定——多管发酵法HJ/T347-2007方法名称适用于地表水、地下水及废水中粪大肠菌群的测定适用范围1.1方法名称与适用范围水质粪大肠菌群的测定——多管发1.2方法原理粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，主要来自粪便，在44.5℃温度下能生长并发酵乳酸产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。用提高培养温度的方法，造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件，使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群，从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。多管发酵法是以最可能数（mostprobable

number），简称MPN来表示试验结果的。实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。1.2方法原理粪大肠菌群是总大肠菌群中的一

测定方法和原理1试剂和仪器2测定过程33结果计算44任务7粪大肠菌群的测定

测定方法和原理1试剂和仪器2测定过程33结果计算44任务

2.1培养基和试剂(1)单倍乳糖蛋白胨培养基成分：蛋白胨10g

牛肉膏3g乳糖5g

氯化钠5g1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL

蒸馏水1000mL制法：将蛋白胨、牛肉膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节pH为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。2.1培养基和试剂(1)单倍乳糖蛋白胨培养基成分：

(2)三倍乳糖蛋白胨培养基按上述配方比例三倍（除蒸馏水外），配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液，制法同上。注：本试验测定所使用的培养基为配制的乳糖蛋白胨培养基，也可使用成品的大肠菌群发酵培养基，如：乳糖胆盐发酵培养基，等。(2)三倍乳糖蛋白胨培养基按上述配方比例三倍（除蒸馏水

(3)EC培养液成分：胰胨20g乳糖5g胆盐三号1.5g磷酸氢二钾（K2HPO4）4g磷酸二氢钾（KH2PO4）1.5g氯化钠5g蒸馏水1000mL制法：将上述成分加热溶解，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。置高压蒸汽灭菌器中，115℃灭菌20min。灭菌后pH应为6.9。(3)EC培养液成分：高压灭菌锅生化培养箱2.2仪器和设备高压灭菌锅生化培养箱2.2仪器和设备

测定方法和原理1试剂和仪器2测定过程33结果计算44任务7粪大肠菌群的测定

测定方法和原理1试剂和仪器2测定过程33结果计算44任务3.1培养基制备及灭菌（1）水样接种量的确定将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。相对未受污染的水样接种量为10mL、1mL、0.1mL。受污染水样接种量根据污染程度接种1mL、0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等。使用的水样量可参考下表1。3.1培养基制备及灭菌（1）水样接种量的确定表1接种水量参考表由于本次测定的是污水处理厂的出水水样，所以选取的浓度梯度为10-3、10-4、10-5。粪大肠菌群的测定演示文稿课件（2）乳糖蛋白胨培养基分装杜氏小管杜氏小管杜氏小管杜氏小管10mL3倍10mL1倍10mL1倍10mL1倍如接种体积为10mL，则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液5mL；如接种量为1mL或少于1mL，则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10mL中。（2）乳糖蛋白胨培养基分装杜氏小管杜氏小管杜氏小管杜氏小管（3）准备其他要灭菌的物品（4）灭菌:115OC，20min水源水90ml无菌水9ml无菌水移液管（3）准备其他要灭菌的物品（4）灭菌:115OC，203.2水样制备及稀释（1）采样瓶（2）采集污水处理厂出水口的水样3.2水样制备及稀释（1）采样瓶（3）水样的稀释1mL10mL90mL无菌水9mL无菌水原液10-110-21mL1mL9mL无菌水10-39mL无菌水10-49mL无菌水10-51mL（3）水样的稀释1mL10mL90mL9mL原液1010-5杜氏小管杜氏小管杜氏小管10ml3倍10ml1倍10ml1倍1ml1ml培养条件：37℃、24h3.3粪大肠菌群的初发酵10-41ml10-3生化培养箱10-5杜氏小管杜氏小管杜氏小管10ml3倍10ml11.培养基变为黄色，杜氏管中有气泡（阳性）2.培养基仍为紫色，杜氏管中没有气泡（阴性）3.4观察粪大肠菌群的初发酵结果表2.1记录—初发酵阳性管数由接种量为10-3mL管转接由接种量为10-4mL管转接由接种量为10-5mL管转接阳性管数1.培养基变为黄色，杜氏管中有气泡（阳性）2.培养基仍为紫色轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管，用接种环将培养物转接到EC培养液中。在44.5℃±0.5℃下培养24h±2h。培养后立即观察，发酵管产气则证实为菌群阳性。3.5粪大肠菌群的复发酵试验表2.2

记录—复发酵阳性管数由接种量为10-3mL管转接由接种量为10-4mL管转接由接种量为10-5mL管转接阳性管数轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管，用接种环将培养物转接到E

测定方法和原理1试剂和仪器2测定过程33结果计算44任务7粪大肠菌群的测定

测定方法和原理1试剂和仪器2测定过程33结果计算44任务根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目，从表3中查得每升水样中的粪大肠菌群。接种5份10mL水样、5份1mL水样、5份0.1mL水样时，查表3求得MPN指数，MPN值再乘10，即为1L水样中的粪大肠菌群。如果接种的水样不是10mL、1mL和0.1mL，而是较低的或较高的三个浓度的水样量，也可查表3求得MPN指数，再经下式计算成每100mL的MPN值。4.1粪大肠菌群测定的结果分析与报告根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目，从表3中查得每表3最可能（MPN）表表3最可能（MPN）表作业1.为什么说提高温度培养出的大肠菌群更能代表水质受粪便污染的情况？2.根据试验情况，报告每升水中含粪大肠菌群的数目。作业1.为什么说提高温度培养出的大肠菌群更能代表水质受谢谢！谢谢！主讲教师李孝坤项目四：城镇污水监测

任务7粪大肠菌群的测定主讲教师李孝坤项目四：城镇污水监测

任务7粪大肠菌

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测定方法和原理1试剂和仪器2测定过程33结果计算44任务1.1方法名称与适用范围水质粪大肠菌群的测定——多管发酵法HJ/T347-2007方法名称适用于地表水、地下水及废水中粪大肠菌群的测定适用范围1.1方法名称与适用范围水质粪大肠菌群的测定——多管发1.2方法原理粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，主要来自粪便，在44.5℃温度下能生长并发酵乳酸产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。用提高培养温度的方法，造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件，使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群，从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。多管发酵法是以最可能数（mostprobable

number），简称MPN来表示试验结果的。实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。1.2方法原理粪大肠菌群是总大肠菌群中的一

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测定方法和原理1试剂和仪器2测定过程33结果计算44任务

2.1培养基和试剂(1)单倍乳糖蛋白胨培养基成分：蛋白胨10g

牛肉膏3g乳糖5g

氯化钠5g1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL

蒸馏水1000mL制法：将蛋白胨、牛肉膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节pH为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。2.1培养基和试剂(1)单倍乳糖蛋白胨培养基成分：

(2)三倍乳糖蛋白胨培养基按上述配方比例三倍（除蒸馏水外），配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液，制法同上。注：本试验测定所使用的培养基为配制的乳糖蛋白胨培养基，也可使用成品的大肠菌群发酵培养基，如：乳糖胆盐发酵培养基，等。(2)三倍乳糖蛋白胨培养基按上述配方比例三倍（除蒸馏水

(3)EC培养液成分：胰胨20g乳糖5g胆盐三号1.5g磷酸氢二钾（K2HPO4）4g磷酸二氢钾（KH2PO4）1.5g氯化钠5g蒸馏水1000mL制法：将上述成分加热溶解，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。置高压蒸汽灭菌器中，115℃灭菌20min。灭菌后pH应为6.9。(3)EC培养液成分：高压灭菌锅生化培养箱2.2仪器和设备高压灭菌锅生化培养箱2.2仪器和设备

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测定方法和原理1试剂和仪器2测定过程33结果计算44任务3.1培养基制备及灭菌（1）水样接种量的确定将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。相对未受污染的水样接种量为10mL、1mL、0.1mL。受污染水样接种量根据污染程度接种1mL、0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等。使用的水样量可参考下表1。3.1培养基制备及灭菌（1）水样接种量的确定表1接种水量参考表由于本次测定的是污水处理厂的出水水样，所以选取的浓度梯度为10-3、10-4、10-5。粪大肠菌群的测定演示文稿课件（2）乳糖蛋白胨培养基分装杜氏小管杜氏小管杜氏小管杜氏小管10mL3倍10mL1倍10mL1倍10mL1倍如接种体积为10mL，则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液5mL；如接种量为1mL或少于1mL，则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10mL中。（2）乳糖蛋白胨培养基分装杜氏小管杜氏小管杜氏小管杜氏小管（3）准备其他要灭菌的物品（4）灭菌:115OC，20min水源水90ml无菌水9ml无菌水移液管（3）准备其他要灭菌的物品（4）灭菌:115OC，203.2水样制备及稀释（1）采样瓶（2）采集污水处理厂出水口的水样3.2水样制备及稀释（1）采样瓶（3）水样的稀释1mL10mL90mL无菌水9mL无菌水原液10-110-21mL1mL9mL无菌水10-39mL无菌水10-49mL无菌水10-51mL（3）水样的稀释1mL10mL90mL9mL原液1010-5杜氏小管杜氏小管杜氏小管10ml3倍10ml1倍10ml1倍1ml1ml培养条件：37℃、24h3.3粪大肠菌群的初发酵10-41ml10-3生化培养箱10-5杜氏小管杜氏小管杜氏小管10ml3倍10ml11.培养基变为黄色，杜氏管中有气泡（阳性）2.培养基仍为紫色，杜氏管中没有气泡（阴性）3.4观察粪大肠菌群的初发酵结果表2.1记录—初发