蔬菜中有机磷农药残留检测方法及其应用研究分析 生物技术专业

摘 要NY/T761-2008730.005mg/kg-0.06mg/kg6.396min-19.400min。在各自限性范围（4095.00%13药检出；韭菜有大量的基质峰干扰农药检出。为了有效控制蔬菜农药残留提供科学依据，20099124家超市1样品64份，其中农药残留阳性的有10份，超标率为15.63%。叶菜类蔬菜合格率为71.43%5种，其中3种为国家禁用农药。论文还研究了不同清洗方法对去除蔬菜中有机磷农药残留的影响。采用气相色谱法（GC）对经过不同方法浸泡处理的娃娃菜中敌敌畏和乐果的残留量进行分析，结果显84.38%。关键词：气相色谱（；有机磷农药残留；蔬菜ABSTRACTMethodsweresetupfordeterminationoforganphosphoruspesticidesmulti-residueinvegetablesbygaschromatographyanddefinethescopeofapplicationofthismethodbyanalysisofvegetablematrix.pretreatmentmethodinstandardofNY/T761-2008wasmodifiedinthispaper,andDB-17capillarycolumnandflamephotometricdetector(FPD)wereused.TheresultshowedthatorganphosphoruspesticideswereseparatedfromeachThefortifiedrecoveryofpesticidesgainedfromcucumber,tomato,andgingerwiththreespikedlevelsrangedfrom71.2%to117.9%.TheRelativestandarddeviation(RSD)was2.1%to11.2%,theMinimumdetectionlimitofthemethodwas0.005~0.06mg/kgforDB-17column,andtheRetentiontimewas6.396to19.400minutes.Thecalibrationcurvesshowedgoodlinearitywithcorrelativecoefficientofmorethan0.999.Samplewasheatedupto40℃whenblewbynitrogen(N2),therecoveriesofDichlorovosandPhoratewouldenhanceto95.00%and103.3%respectively.Among13vegetablesdetected,greenpepper,babycabbageandshanghaigreenhaveseveralpeaksofmatrixtoimpactdetectionofpesticideresidueswhilegarlicchivewasfoundalargenumberofpeaksinterferewiththedetectionofpesticides.AsurveyoforganphosphoruspesticideinsixtyfourvegetablesamplescollectedrandomlyfromfoursupermarketsandonevegetablewholesalemarketofGuangzhoucitywascarriedoutfromSeptembertoDecemberin2009.Gaschromatographyanalysisfororganphosphoruspesticideresiduesinthesamplesshowedthatthequalificationrateofleafvegetableswas71.43%,andnoinvestigatedpesticideresiduewasdetectedintheallexaminedtherawmelonsvegetables,therootvegetables,andthesolanaceousfruitvegetables.Fivekindsoforganphosphoruspesticidesweredetectedin10kindsofsamples(64samples)withthedisqualificationratebeingof15.63%,amongwhichthreeprohibitedpesticidesforplantingvegetablesaccordingtorelevantlawsweredetected.Forbiddenpesticideresiduewasdetectedwithrelativelyhighfrequencyinthevegetablesamples.TheeffectsofdifferentrinsingmethodsontheremovalratiooforganphosphoruspesticideresiduesfromBabycabbagewereinvestigated.Thegaschromatography(GC)wasusedtoanalyzethepesticideresiduesinbabycabbagerinsedbydifferentmethod.Theresultsshowedthatclearwaterrinsing,detergentandediblealkalicanremovetheresidualpesticideinbabycabbageatdifferentlevel，exceptfortreatmentwithultrasonic.Amongallthesemethods，detergentwithbrandofAxecanremoveresidualpesticideeffectively.TheremovalratioofDichlorovosandDimethoatewas84.38%,76.11%bydetergentwithbrandofAxe.Keyword：Gaschromatography;organicphosphoruspesticideresidue;vegetable目 录摘要 IAbstract II第一章：绪论 1有机磷农药 1蔬菜中有机磷农药残留现状 2农药残留危害 4农药残留对人体健康的危害 4农药残留对生态系统的危害 5农药对害虫天敌的危害 5农药对土壤微生物的危害 5农药对水环境的影响 5蔬菜中有机磷农药的前处理方法与分析方法 6农药残留的前处理技术 6农药残留的分析检测技术 7蔬菜表面有机磷农药的去除方法 8物理方法 8化学方法 10生物方法 本研究的目的与意义 研究内容 12第二章蔬菜中种有机磷农药残留的气相色谱检测及蔬菜基质影响的研究 142.1引言 14实验材料与仪器设备 14实验方法 15气相色谱分析条件 15GC-MS分析条件 16样品提取 162.3.4 净化 16结果与讨论 16种有机磷农药混合标准液色谱分离效果图 16氮吹温度对敌敌畏、甲拌磷回收率的影响 18不同基质对检测效果的影响 19线性范围、标准曲线、检出限和保留时间 23回收率和精密度实验 24本章小节 26第三章广州市售蔬菜有机磷农药残留情况调查分析 273.1引言 27实验材料与仪器设备 27实验方法 27测定方法 27评定标准 28结果与讨论 28总体检测情况 28不同种类农药检出率 28不同类别蔬菜中农药残留情况 29不同品种蔬菜中农药残留情况 30不同来源蔬菜的农药残留检测情况 31本章小节 31第四章：清洗方法对蔬菜中有机磷农药残留去除效果的研究 334.1引言 33实验材料与仪器设备 33实验方法 34样品处理方法 34样品前处理方法 34GC检测条件 34清洗方法 34农药残留率的计算 35结果与讨论 35清水浸泡时间对农药去除的效果 35超声波清洗对农药去除的效果 36洗涤剂浸泡对农药去除的效果 37食用碱浸泡对农药去除的效果 39本章小节 40结论与展望 41参考文献 43第一章 绪论有机磷农药70%剂总量中，有机磷农药又占了近70%[1]，有机磷农药在我国农药生产和使用中有着特殊的地位。有机磷农药品种在结构上存在共性，按照其结构主要分为五种类型：磷酸酯型如敌敌畏、久效磷等；硫代和二硫代磷酸酯型如对硫磷、乐果等；磷酰胺和硫代磷酰胺型如[2]。有机磷农药的性质如下：性质不稳定、易于分解：无论纯品、制剂还是残留于环境、作物介质中的大多数pH因此，在标准样制备保存时，应注意标准溶液的稳定性，一般配置0.5～1mg/mL溶液，6每2～3月配一次。另外毒理角度来看，由于有机磷农药在生物体内往往会氧化成比原来农药毒性更大的化合物，如乐果转化为氧乐果、甲基对硫磷转化为甲基对氧磷等[3]。，因此，在有机磷农药的残留分析中，应注意其有毒理学意义的氧化物的分析，以用弱极性溶剂系统进行展开；在气相色谱选择固定液时，可选用弱极性的固定液如DC-200，DEGA，OV-101，反之亦然[2]。抑制技术和目前应用广泛的酶源速测技术中，不同农药、不同酶源表现出的检出极限可差几个数量级。蔬菜中有机磷农药残留现状80-10040万吨（100%有效成分存在着“370%[1]。中国又是一个传统的蔬菜生产大国，2001年统计，1334.740500万吨[4]2000余品种，因此病虫害发生的种类500200用量巨大而产生的菜地农药污染不容忽视[5]。20005550129322%20011232318172.4%200183.1%[6]。20006-9月10个主要菜市场的蔬菜商品抽样调查，检测有机磷超标情况，结果合格率为85%；20015-10月对合肥、六安、蚌埠、芜湖、巢湖等六个城市的菜市场出售的蔬8%。农药残留超标情况呈下降趋势进一步定性分析发现污染农药主要为甲胺磷、氧乐果等[7]7个省市部分地区蔬菜（高毒农药品种0.005mg/kg-0.572mg/kg（高毒农药品种0.0207mg/kg-0.6723mg/kg，10%（高毒农药品种0.090mg/kg-1.996mg/kg，34.8%7.5%0.010mg/kg-0.549mg/kg，检出79%20%0.017mg/kg-0.138mg/kg，检出率和超标73.5%，15%0.191mg/kg-0.32mg/kg70%。从615%-20%的超标率[8]1999月～122522个4830%10ppm；其超标71.9%[9]2000年农业部药检局在北京某大型农副产品批发10581个大白菜样品中含高毒甲胺6.9mg/kg700倍。2006年山东省济南市疾病预防控制中心2463.2%[10]5.85mg/kg，单个样品农43.1mg/kg[11]。20022003年，孙胜龙等对长春11.05%[12]。这些说明在我国蔬菜中有机磷农药残留情况相当普遍也是十分严重，可以说是所有农药中污染最严重的。199419952566294个进口样品进行1200.4%2.1%1995327个国产1032.0%1995195902.6%19953051120种农3.6%[13]199520个蔬菜水5611.3%7.7%。日19955405[14]1995年5384.4%18.0%，超标率分0.4%0.7%1995891个国产蔬菜水果样品，2682个进口蔬菜水果样1709.4%0.4%6.0%[14]1996506624.4%，超标率1.8%[15]1998年美国农产品中农药残留监测统计结果表明蔬菜样129127.7%，1.4%[15]。农药残留危害农药残留对人体健康的危害农药残留超标成为餐桌上的隐形杀手，影响着人民饮食安全和身体健康。作为典型4天[16对神经系统的影响根据接触有机磷农药时间的长短和剂量的大小，可产生不同程度和症状的神经毒性：急性毒性、中间综合症、迟发性毒性和慢性暴露有机磷农药引发的神经精神异常。农药生产者和农民以及生活在农村的其他敏感人群（儿童和孕妇等）由于接触有机磷农药的途径多、剂量大、时间长，易出现不同症状的急性和慢性神经毒性反应。致癌作用巴瘤（L、白血病、前列腺癌的发生同接触有机磷农药混合物密切相关。在农与癌症的关系研究中，NHL是研究最多的一种，NHL使用农药量之间有相关性[17]。引起出生缺陷出生缺陷也称先天异常，是指胚胎发育紊乱引起的胎儿的形态、结构、功能、代谢、精神行为等方面的异常。遗传因素和环境因素是引起出生缺陷的两大原因。农药类物质（有机磷农药和有机氯农药）则是环境因素中重要的一类。农药可通过直接接触和非接触的方式作用于母体，通过胎盘屏障转移至胎儿，引起出生缺陷[[18]。对生殖毒性的影响某些农药与机体接触后，可能干扰生殖细胞（精细胞和卵细胞）的形成，影响卵细别是有机磷农药可使人体精子数量减少，活动能力下降，畸形率增加[9]。农药残留对生态系统的危害10%90%的农药通过各种方式向[19]农药对害虫天敌的危害农药对土壤微生物的危害构和理化性质，影响作物生长[22]。农药对水环境的影响种植和来自工厂排放的农药污水，通过地表径流、飘逸等污染了水源。同时由于水生生物对农药具有富集作用，导致大量的水生生物死亡[23]。蔬菜中有机磷农药的前处理方法与分析方法农药残留的前处理技术机磷农药检测所涉及的新的样品前处理技术主要有：加速溶剂萃取技术（SE，超临（（（M（（（（等[25ASE、SPEGPC技术在国内逐步应用。固相萃取（SPE）是一种应用较多的样品前处理技术。它根据液相分离、解析、浓。姜会书[28]SPELC[29]1840min内可得到很好的分离。是根据吸附-（纤维吸附样品中挥发性SPME使用寿命有限[30]。上解吸，适合于处理大量的样品[31]。超临界流体萃取（SFE）是以超临界流体代替各种溶剂来萃取样品中待测组分的萃CO2中加放少量极性溶剂如甲醇、异丙醇等，具有高效快速、节约溶剂、避免污染等优点[32]。Synde等[33]在从环境土样中萃取有机氯、有机磷酸酯时，将SFE的萃取结果同超声波和索氏抽提进行了比较，用于研究三种技术的萃取效率。农药残留的分析检测技术（（（（）等技术光谱法是根据农药中某些官能团在显色剂的作用下发生氧化、酯化等化学反应，产生特定的波长颜色反应来进行定性测定，杨宏伟等[34]利用分光光度法测定水和土壤中敌敌畏等农药最低检出限可为0.021mg/mL，平均加标回收范围90%～98%，周向阳[35]等采用近红外光谱法测定蔬菜中甲胺磷的残留。AOAC规定了用红外光谱法检测敌敌畏、保棉磷、甲拌磷，用分光光度法检测马拉硫磷、对硫磷等。目前傅里叶转换红外光谱技术征浓度，用荧光光谱差异鉴别种类[37]。测方法进行确证实验[38]。TLCRf薄层板的吸附剂种类、展开剂的选择与配比等进行了探索研究[35]。（FPD）[39]GC在许多有机磷农药检测中应用。高效液相色谱（HPLC）采用的是液体流动相参与分配的分离体系。适合测定不易[40]MalletN.7HPLC来检测。CarabiasR.HPLC来检测水果中的有机磷农药[41]。层层析法则更多的应用于快速检测。蔬菜表面有机磷农药的去除方法物理方法洗涤入一定量的洗涤剂，有助于农药脱离蜡质层，增加农药在水中的溶出量。谭燕琼等[43]别。而流水冲洗的效果相比浸泡的效果更差。宗荣芬等[44]85%左右。Smith.S.等[45]30s能去除莴苣88%[46]80%[47]则对比了率最高。剥皮与去壳SolirranK.M.等[48]670%20%35%[49]。热处理[43]用沸水烫1、3、5、10min92%加而变好。朱惠莲等[50]1min后1min过冷水的损失率最大。化学方法光化学降解光化学降解主要是因为当有机分子中某一个化学键的键能小于其吸收的光子能量MarinasA等[51]125min紫外光照射MalatoS等[52]Fenton试剂联合光催化降解水可溶性农药，结果表明：50mg/L30mg/L200mg/L0.05mmol/LFe2+90%[53]研究对光降解有催化作用。陈士夫等[54]固定在空心玻璃球上作为光催化剂，研究了磷酸脂类农药光催化降解的规律。结果表明：4.0×10-4mol/L的敌敌畏和久效磷农药，375W中1.5h10%3.5h，有机磷被完全光催化降解。臭氧降解[55][56]对臭氧消解水中残留农[57]对臭氧降解大白菜30min50%。余向阳等[58]2Vc含量基本没有影响，但明显降低类胡萝卜素含量。生物方法储藏保鲜作用[59]98%～100%。微生物降解[60][61,62]和韭蛆没有不良影响。解毒酶[63]研究了解毒酶对小白本研究的目的与意义NY/T761-2008《蔬菜和水果中有机磷、有机氮、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药[64]用的有机磷农药多残留进行同时检出。T761-200《蔬行蔬菜基质对检测干扰影响的研究，以明确本检测方法的适用范围。我国在蔬菜出口中曾发生因农药残留超标而导致的经济损失。尤其是在广州地区，地处珠江三角洲，属南亚热带季风气候，热量资源丰富，光能可利用率高，雨量充沛，（主要检验常用20多种90%60%以上[65]。为了解广州地区蔬菜中有机磷农药残留情况，41种常见有机磷农药的检测。1、24种相对简单易操作的清洗方研究内容本论文拟通过改变前处理中的净化条件以提高敌敌畏、甲拌磷等易挥发物质的回收NY/T761-2008前处理结合检测的基质适应性。DB-1711果类、根茎类、茄果类共四个大类13个品种。4磷农药残留的去除作用。第二章 蔬菜中11种有机磷农药残留的气色谱检测及蔬菜基质影响的研究引言2008年，我国农业部发布了标准：NY/T761-2008有机氮、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》（以下均简称为761-2008。此标准前处理方法简单、快捷和经济等优点，适用于基层检测单位易挥发农药回收率低的问题[66]。同时此标准中需将待测样用双自动进样器同时（FPD磷滤光片法的适用范围具有实际意义。NY/T761-2008使用80℃氮吹10mL样品进行浓缩，但是有部分样品室易挥发用该方法对各种蔬菜中有机磷农药残留量进行检测，以分析本检测条件与NY/T761-2008前处理结合检测的基质适应性。实验材料与仪器设备乙腈（色谱纯）丙酮（AR重蒸）天津市科密欧；氯化钠（AR）上海瑞泉；敌敌畏（s、甲胺磷（Methaidophos、甲拌磷（e、甲基对硫磷（MethylparathionDiethoateOethoat（s（s（Acephate（n（Isocarbophos标准品农业部环境保护科研监测所，20µg/mL100µg/mL。SHIMADZUGC-2014FPD火焰光度检测器（P滤光片）和AOC-20i自动进样器日本岛津公司Agilent6890N/5975气质连用仪配7683B自动进样器美国Agilent公司N-EVAP111氮吹仪美国Organomation公司DB-17色谱柱（30m×0.32mmID×0.25µmDB-23色谱柱（30m×0.25mmID×0.25µm）Agilent公司AC-1色谱柱（30m×0.25mmID×0.25µm）澳大利亚SGE公司MX-PSC101G1榨汁机日本松下公司FJ-200高速分散均质机上海标本模型厂WH-90A微型漩涡混合器上海振荣科学仪器有限公司实验方法气相色谱分析条件11进样口温度：240℃，不分流进样。升温程序：50℃120℃i180℃（4i）i2402501.00µ4.13/i/i。毛细管柱：DB-17（30m×0.32mmID×0.25µm）基质峰影响验证色谱分析条件23050℃n250（5i.进样口温度：230℃，升温程序：50℃125℃（10min）其它同C.分流比：1∶5D.毛细管住：AC-1（30m×0.25mmID×0.25µm）其它同GC-MS进样口温度250℃；升温程序：50℃120℃180℃210℃（5i270℃；I0℃；柱流量1.00µL；溶剂切除时间3min；SIM模式；色谱柱DB-23（30m×0.25mmID×0.25µm）样品提取25.0g50.0mL2min5g~7g100mL具塞量40mL~50mL1min30min乙腈相和水相分层[64]。净化150mL40℃水浴锅上1.0mL丙酮，盖上铝箔，备用。将上述备用液完全转移至10mL1.5mL丙酮分三次冲洗烧杯，2.5mL结果与讨论11图2‐111种有机磷农药混合色谱分离效果图Fig.2‐1GCchromatographyof11organophosphoruspesticides1.敌敌畏；2.内吸磷；3.甲胺磷；4.乙酰甲胺磷；5.内吸磷；6.甲拌磷；7.氧乐果；8.内吸磷；9.久效磷；710.乐果；11.甲基对硫磷；12.马拉氧磷；13.水胺硫磷7图2-2使用AC-1柱的敌敌畏和甲胺磷分离效果图Fig.2‐2GCchromatographyofDichlorovosandMethamidophosbyAC-1column将各农药标准液用分别用丙酮稀释成10µg/mL（2µg/mL）的单一标准使用液，在同一色谱分析条件下确定各自的保留时间，气相分离效2-1所示，11种有机磷农药能在此条件下完全分离，其中敌敌畏和甲胺磷得到了很好的分离，而在NY/T761-2008中敌敌畏和甲胺磷被分在两个DB-1柱对这两种农药的分离效果更加不理想，本试验尝试用AC-1柱将敌敌畏和甲胺磷分离（2-2，分离效果不理想。DB-17为中等极性柱，对有机磷农药的分离效果较好。而DB-1AC-1柱为非极性柱，对敌敌畏和甲胺磷分离能力弱。敌敌畏和甲胺磷是使用最广泛的两种有机磷农药，均为广谱高效杀虫剂，另外2008年我国将甲胺磷列为禁止使用的农药之一。因此这两种农药残留在蔬菜中的一次性同时检测方法有重要意义。通过改变升温条件，发现采用50℃开始升温，升温时间共21.5min的程序，可将溶剂以及样品中大部分干扰物先通过色谱柱形成色谱峰，避免杂质对样品峰的影响，如图2-3所示。图2-1中2、5、8号峰均存在内吸磷标准液。2、5号峰可能是治螟磷[68]和异内吸磷[2]。治螟磷与内吸磷有相似官能团，内吸磷与其异构体异内吸磷在一定条件下能相互转化。本文以8号峰作为内吸磷的定量峰。氮吹温度对敌敌畏、甲拌磷回收率的影响11种农药中，敌敌畏和甲拌磷是挥发性较强的物质[69]畏蒸汽压为：1.5998Pa（20℃；甲拌磷蒸汽压为：0.12Pa（20℃，相比之下氧乐果蒸汽压为：3.333×10-3P（20℃2.266×10-4Pa（24℃NY/T761-200880℃高温下的氮吹浓缩，操作难控制，易使敌敌畏和甲拌磷挥发损失。使用较低的蒸发温度可以减少两者的挥发，提高回收率。另外NY/T761-2008的浓缩方法为：吸取10mL乙腈溶液氮吹，浓缩5mL10mL80℃氮吹后加入一定量的标准液定容至5mL溶液作为对照，80℃、60℃、40℃条件下氮吹进回收率的对比。如表2-1所示，随着氮吹温度的降低，敌敌畏和甲拌磷的回收率明显提高，但氮吹时间较长。为了降低氮吹过程中温度对回收率的影响，使用40℃氮吹。表2-1氮吹温度对敌敌畏、甲拌磷回收率的影响Table2-1EffectoftemperatureonrecoveriesofDichlorovosandPhorateinN2blowing氮吹温度temperature806040（℃）乙腈溶液体积（mL）1055氮吹时间（min）121928对照（µg/mL）0.400.200.400.200.400.20敌敌畏（µg/mL）0.093±0.0130.088±0.0160.24±0.0110.079±0.00380.29±0.00150.19±0.0024回收率（%）23.2544.0060.0039.5072.5095.00对照（µg/mL）0.610.300.610.300.610.30甲拌磷（µg/mL）0.41±0.00720.21±0.0230.46±0.0170.22±0.00630.51±0.00890.31±0.0025回收率（%）67.2170.0075.4173.3383.66103.3不同基质对检测效果的影响不同蔬菜含有的成分可能会在气相分析时产生背景峰，从而对样品峰形成干扰，因此，针对不同蔬菜进行个别分析，了解本方法的适用范围。本试验选取了黄瓜、青椒、萝卜、茄子、苦瓜、娃娃菜、上海青、韭菜、胡萝卜、西红柿、生姜、包菜、生菜等十余种常见蔬菜进行检测。大部分蔬菜的背景峰都出现在升温程序的初始阶段，不影响11种农药残留的检测，特别的如生姜、茄子和青椒，在此条件下没有任何杂峰。通过多次检测发现甘蓝中存在影响乙酰甲胺磷的杂峰（2-3，通过两种不同的升温程序方法（AB）对甘蓝基质和乙酰甲胺磷标准2-4中，ABA，CDB，通过气相色谱检测发现此峰与乙酰甲胺磷峰的保留时间仍然一致。为了避免假阳性结果的出现，使用双柱法和GC-MS的方法进行验证，使用AC-1柱和C未出现干扰乙酰甲胺磷的杂峰（2-4E、FGC-MS做进一步验证，选择乙酰甲胺磷的特征离子（9413642SIM模式检测，以检出物中碎片离子的种类和丰度比作为依据。未发现存在与乙酰甲胺磷特征离子匹配度高的离子。应此判断此干扰峰为基质峰。本检测结果与吴岩等[70]的报道一致。此外通过多次检测不同地点采样的上海青菜和娃娃菜样品，发现上海青和娃娃菜色谱图中均在甲胺磷出峰处出现杂峰，疑似为样品基质峰。通过在基质中加入混标进行检测以判断基质对112-3。将处理娃娃菜和上海青样品通过GC-MS（GC-MS检测，均未出现与甲胺磷的特征离子匹配度高的离子。韭菜基质有强烈的干扰，严重影响农药的检出，结果见图2-5。可能是因为韭菜中含有大量的含磷物质，而FPD检测器对含硫磷物质极其灵敏[67]，易将此类物质检测出。图2‐33种蔬菜基质对有机磷农药检出的影响Fig.2‐3Effectof3kindsvegetablematrixtoorganophosphoruspesticides’detection1.甘蓝基质峰；2.甲胺磷；3.娃娃菜基质峰；4.上海青基质峰图2‐4甘蓝基质对乙酰甲胺磷检出的影响Fig2‐4TheeffectofgreenpeppermatrixtoAcephate’sdetection1.甘蓝基质峰；2.乙酰甲胺磷图2-5韭菜基质的色谱效果图Fig2-5GCchromatographyofgarlicchive’smatrix线性范围、标准曲线、检出限和保留时间根据不同农药在同一色谱条件下响应值不同，准确吸取适量的标准溶液，配成不同浓度的混合标准工作液，通过峰面积定量，绘制标准曲线，并计算回归方程及相关系数。同时按3倍信噪比（S/N）计算检出限，得到的回归方程等见表2-2。由表2-2可知，11种农药在采用本方法进行测定时，其线形范围内相关系数均>99.9%，其检出限范围为0.005~0.06mg/kg。符合农药残留限量检测要求。表2-211种有机磷农药的保留时间、检出限、线形范围及相关系数Table2-2Retentiontime,Minimumdetectionlimit,linearityrangeandcorrelativecoefficient检出限保留时间线性范围相关系数Retentiontime（min）linearityrange（µg/mL）correlativecoefficient（%）Minimumdetectionlimit（mg/kg）敌敌畏6.3960.05~199.9950.005甲胺磷7.1660.05~199.9220.01乙酰甲胺磷9.8310.1~299.9400.06甲拌磷12.5210.05~199.9770.01氧乐果13.0490.05~199.9710.03内吸磷13.8100.1~299.9910.02久效磷15.0180.05~199.9420.03乐果15.7950.05~199.9680.01甲基对硫磷17.3830.05~199.9960.01马拉氧磷17.5930.1~299.9680.03水胺硫磷19.4000.05~199.9850.03回收率和精密度实验分别将农药添加水平为1.0mg/kg、0.5mg/kg、0.1mg/kg的黄瓜、西红柿、生姜空白蔬菜进行加标回收率的测定。每个浓度做3个平行样，每个样在相同的条件下连续测定5次，计算精密度。从表3可知，加标回收率范围为回收率为71.2%-117.9%，RSD为11.2%-2.1%。符合农药检测方法要求[14]。第二章蔬菜中11种有机磷农药残留的气相色谱检测及蔬菜基质影响的研究表2-311种有机磷农药的加标回收率及精密度试验Table2-3RecoveriesandRelativestandarddeviation(RSD)of11organophosphoruspesticides黄瓜 西红柿 生姜农药 加标回收率（%） 精密度（%） 加标回收率（%） 精密度（%） 加标回收率（%） 精密度（%）123123123123123123敌敌畏71.281.889.777.972.473.3甲胺磷71.473.276.978.981.910.378.380.210.1乙酰甲胺磷109.1116.2119.29.811.35.6111.1102.94.6101.9103.43.8甲拌磷79.982.183.986.384.57.8氧乐果102.0111.24.3112.1117.37.5内吸磷101.1105.35.389.993.298.14.06.65.2久效磷108.1112.14.2101.8103.93.999.0102.35.4乐果89.990.04.290.393.85.1甲基对硫磷91.890.892.47.03.43.589.998.36.1马拉氧磷102.1104.74.2108.4103.22.3水胺硫磷87.383.57.089.9101.592.24.08.13.790.399.45.525本章小节1、具体的样品前处理方法的改进内容NY/T761-200880℃高温下的氮吹浓缩，操作难控制，易使敌敌畏和甲拌磷挥发损失。使用较低的蒸发温度可以减少两者的挥发，提高回收率。另外NY/T761-2008的浓缩方法为：10mL乙腈溶液氮吹，浓缩至5mL。为了节约时间，降低成本，可将浓405mL样品能够使回收率明显提高。增加检测的准确度。2、同时测定了蔬菜中敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷等11种有机磷农药。使用毛细管DB-17毛细管柱可以将11种农药分离，特别是能很好的分离在非极性柱内难以分离的敌敌畏和甲胺磷。FPD检测器对于含磷物质灵敏度高，方法检出限低。样品前处理方法简单，且仅使用单柱，设备要求简单，节约时间和检测成本。适合于广大基层单位使用。此外，本方法适合于大部分的蔬菜的11种农药同时检出，但是由于FPD检测器对于硫磷元素的高灵敏性，一些富含硫磷物质的蔬菜不适合此方法。此外，本方法在检测甘蓝等样品时会有基质影响，此时可通过双柱法和GC-MS定性，以避免假阳性结果。3、检测的11种农药中包括两种NY/T761中没有涉及的农药—马拉氧磷和内吸磷。马拉氧磷是马拉硫磷的氧化产物，是一种毒性不很高（大白鼠口服急性LD50为87-90mg/kg）而药效较优的品种，内吸磷是一种禁用高毒农药（大白鼠口服急性LD50为30mg/kg）[69]。此外在近年众多有关文献记录中，仅有一篇关于马拉氧磷在水中的检测[71]。本方法用于检测蔬菜中马拉氧磷，为今后的相关检测工作提供一定的依据。4、由于前处理简单，省去净化除色素等杂质的步骤。由于待测样品中含有色素、脂肪等成分，易堵塞色谱柱和污染检测器，因此在进行大批量检测时，仪器和色谱柱的日常维护则更为重要，以免影响检测的准确度和精密度。第三章 广州市售蔬菜有机磷农药残留情况调查分析引言在我国，农药品种单一，剧毒、高毒农药品种居多，存在着“三个70%；杀虫剂中有机磷类品种占70%；有机磷类中少数几个高毒品种占70%[1]。蔬菜是人们日常生活中必不可少的食品，也是有机磷农药污导致食物中毒和餐桌污染已引起政府部门和居民的重视[65]。而广州市地处珠江DB-1741处农贸市场的蔬菜进11种常见有机磷农药的检测。实验材料与仪器设备采用随机抽取的方式，于2009年9月份至12月份在广州市天河区4家超市（好当家、世纪联华、百佳、好又多），1家农贸市场（龙洞农贸市场）抽样蔬菜64份，包括叶菜类、瓜果类、根茎类、茄果类共四个大类13个品种。其他同第二章。实验方法测定方法NY/T761-2008虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》[64]方法进行样品前处理。气相色谱检测条件为：进样口温度240℃；不分流进样；升温程序：50℃120℃180℃（4i）2402501.00µL4.13mL/min10mL/min。毛细管柱：7（30×0.32mmID×0.2m。使用火焰光度检测器（FPD）进行检测，以保留时间定性，以峰面积定量，其农药标准品色谱图见图2-1。评定标准检测结果按《GB27632-2005食品中农药最大残留限量》和《中华人民共和国农药管理条例》所规定的各项指标进行判定，检出禁用农药或超出农药最大残留限量标准的结果判定为不合格。结果与讨论总体检测情况64份蔬菜样品中12份含有机磷农药，检出率为18.75%，其中10份判定为不合格，超标率为15.63%。在检出农药残留的12份样品中，只检出1种农药的有9份，检出2种农药的有3份。不同种类农药检出率甲拌磷、甲基对硫磷、氧乐果、内吸磷、久效磷、水胺硫磷、马拉氧磷；限制使用的有敌敌畏、乐果、乙酰甲胺磷[73]。样品中检出的农药品种有甲胺磷、563-1表3-1不同种类农药检出率Table3-1Comparisonofpesticidesindifferenttypes农药甲胺磷甲拌磷氧乐果乙酰甲胺磷敌敌畏检出次数101121检出率（%）15.631.561.563.131.562742004630[74]。分析其原因，一是由于农民缺乏必要的农药使用知识；二是农民由于其杀[75]。不同类别蔬菜中农药残留情况按照蔬菜结构特点及商品分类将13种被检蔬菜分为叶菜类、瓜菜类、根茎4大类[75]，其中叶菜类包括甘蓝、娃娃菜、上海青、生菜、小白菜；菜类＝茄果类，这与不同部位接触农药面积不同有关[76]。结果表明，农药残留71.43%，瓜菜类、根茎类、茄果类的样品检3-2不同类别蔬菜中农药残留情况Table3-2Comparisonofpesticideresiduesindifferenttypesofvegetables类别样本数检出数检出率（%）超标数超标率（%）叶菜类351131.431028.57瓜菜类90000根茎类1011000茄果类100000不同品种蔬菜中农药残留情况在检测的13种蔬菜中，检出农药残留的有娃娃菜、上海青、小白菜、萝卜49中未能检出（3-3。表3-3不同品种蔬菜中农药残留情况Table3-3Comparisonofpesticideresiduesindifferentvegetablescultivars蔬菜样本数检出农药允许含量检出次数检出量平均浓度（mg/kg）（mg/kg）（mg/kg）娃娃菜16甲胺磷不得检出40.127~0.2640.185氧乐果不得检出10.287—上海青12甲胺磷不得检出60.0980~0.2830.186甲拌磷不得检出10.127—乙酰甲胺磷110.239—小白菜3敌敌畏0.210.0500—乙酰甲胺萝卜4磷110.191—25%50%。禁用农药残留0.098~0.287mg/kg0.186mg/kg。在所检64100.191mg/kg7天[77]，低毒有机磷农药能满足收获间隔期要求便可大大降低超标率。和乙酰甲胺磷各一次，说明很可能存在农药混合使用情况。不同来源蔬菜的农药残留检测情况检测4家超市蔬菜样品共42份，合格率为90.48%；检测农贸市场蔬菜样品共22份，合格率为71.43%。经卡方分析，其χ2＝4.04<6.64＝χ2（1001，且χ2＝4.04>3.84＝χ2（10050.01<P<0.05，说明差异有统计学意义，即合格与否与蔬菜来源有联系。表3-4不同来源蔬菜的农药残留检测情况Table3-4Comparisonofpesticideresiduesindifferentvegetablesource蔬菜来源检测份数合格份数合格率（%）好当家超市272488.89世纪联华超市5480.00百佳超市77100.00好又多超市44100.00龙洞农贸市场211571.43广州市蔬菜的生产者主要包括三部分，一类是菜场，种植面积有一定规模，管理较完善；一类是外来种植户，租用广州农户的菜田种植蔬菜；一类是广州本地农户，种植面积普遍较小[2]。大型超市蔬菜来源是菜场，菜场对农90%蔬菜的质量波动大，这很可能是导致其合格率偏低的主要原因。本章小节2009年9至12月所检测的64个样品中合格率为84.37%，其中超市采集的样品与农贸市场采集的样品有显著差异，前者合格率为90.70%，后者为71.43%。检测的蔬菜中，农药残留超标样品全为叶菜类，以上海青与娃娃菜超标率最高。叶菜类蔬菜容易生虫，生长期较短，农药喷洒接触面积大，应对其进行重点管理。数据显示叶菜类蔬菜与其它蔬菜相比存在较严重的安全隐患。通过本次检测发现农药超标的原因主要是使用了禁用农药，所占比例为100%11机磷农药以外的农药残留有待进一步分析。第四章 清洗方法对蔬菜中有机磷农残留去除效果的研究引言105kg的水平[78]，蔬菜作为一种健康食品，越来越受到当今而引起中毒的事件时有发生[74]。蔬菜采摘后经科学处理以减少对农药残留的最50℃温水比冷水的清除效果好[3]。章维华等研究结果表明臭氧对有机磷农药的降解具有一定效果[57]。目前的相关1、24种相对简单易实验材料与仪器设备77.5%华洗洁精（500L；榄菊野菊花不伤手洗洁精(500L)；雕牌全效加浓洗洁精(500mL)；AXE斧头牌柠檬护肤洗洁精(500mL)A生姜洗洁精(500mL)；超能离子去油洗洁精(500mL)；市售食用碱。其他同第二章。实验方法样品处理方法210min12h1000倍[79]。样品前处理方法NY/T761-2008和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》的改进方法。GC进样口温度：240℃，不分流进样。升温程序：50℃120℃i180℃（4i）i2402501.00µ4.13/i/i。毛细管柱：DB-17（30m×0.32mmID×0.25µm）清洗方法5min10mim15min20min25min后1min。将冲洗后的娃娃菜用吸水纸吸干表面水，待提取、检测。空白为不经过浸泡的样品中所含有的农药残留量。100Hz、25℃的超声波清洗机中超声5min、10mim、15min、20min、25min后用流水冲洗1min。将冲洗后的娃娃菜用吸水纸吸干表面水，待提取、检测。空白为不经过浸泡的样品中所含有的农药残留量。1/1000（v/v）10min1min。将冲洗后的娃娃菜用吸水纸吸干表面水，待提取、检测。空白为不经过任何溶液浸泡的样品中所含有的农药残留量。（2%5%7%10%15%）的食用碱水中10min1min提取、检测。空白为不经过浸泡的样品中所含有的农药残留量。所有样品均重复处理3次，取其平均值。农药残留率的计算农药残留率的计算-经过清洗处理的娃娃菜样品中农药含量/未经过清洗处理的娃娃菜样品中农药含量）]×100%结果与讨论清水浸泡时间对农药的去除效果4-1延长，敌敌畏和乐果的残留量均呈现先降低后增加的趋势，两者的残留量均在10min[43]也发4-1中得到当25min层，两者接触时，更有利于敌敌畏在菜表面的吸附和富集[80]，长时间浸泡后，4-110min的清水浸泡能使43.31%57.11%，10min为最佳的清水浸泡时间。图4‐1清水不同浸泡时间对农药残留量的影响Fig.4-1Effectofsoakingtimewithwateronpesticideresidues表4-1清水不同浸泡时间对农药去除率的影响Table4-1Effectsofsoakingtimewithwateronremovalratiosofpesticideresidues敌敌畏去除率/%10029.4256.6936.7432.80-3.85乐果去除率/%10018.5142.8940.9940.4125.37超声波清洗对农药的去除效果[81-83]但是超4-25min10min15压，导致自由基形成，从而引起细胞破碎，影响果蔬表面细胞的渗透作用[84,85]可能导致农药在蔬菜的内吸和富集。图4‐2超声清洗不同时间对农药残留量的影响Fig.4‐2Effectofsoakingtimewithultrasoniconpesticideresidues表4-2超声清洗不同时间对农药去除率的影响Table4-2Effectsofsoakingtimewithultrasoniconremovalratiosofpesticideresidues敌敌畏去除率/%10026.1928.9414.08乐果去除率/%10048.1133.476.42洗涤剂浸泡对农药的去除效果64-34-315.62%20.68%；不同的洗洁精4-3110min清水1[43]50%清除作用。表4-3不同洗涤剂清洗对农药去除率的影响Table4-3Effectsofdifferentdetergentonremovalratiosofpesticideresidues敌敌畏去除率/%41.3064.8471.3284.3861.4355.56乐果去除率/%45.0061.1059.1079.3259.3656.55食用碱浸泡对农药去除的效果4-410%76.1%%（4-44-44-110min5%10%药的作用；2%15%不如清水浸泡的效果显著。图4‐4不同浓度的食用碱浸泡对农药残留Fig.4-4Effectsofdifferentconcentrationofediblealkalionpesticideresidues表4-4不同浓度的食用碱浸泡对农药去除率的影响Table4-4Effectsofdifferentconcentrationofediblealkalionremovalratiosofpesticideresidues/%02571015农药敌敌畏去除率/%10043.0251.8556.9276.1126.68乐果去除率/%10055.8656.8664.1273.7939.60本章小节1、四种清洗方法中，除了超声波清洗外，其余洗涤方法对娃娃菜中残留的10%食用碱浸泡的效果较好，两者对敌敌畏和乐果的去除率分别为84.38%、79.32%、73.79%。2、本章实验选用常用的两种有机磷农药，其他有机磷、有机氯以及拟除虫菊酯等农药品种的清除效果有待进一步研究。3、农药在清洗过程中的去除机理包括物理去除和化学去除。食用碱的进一步去除效果很可能是因为化学分解。其余方法的去除机理尚待进一步研究。结论与展望一、结论本文建立了11种常用有机磷农药残留的气相色谱检测条件，对《NY/T761-20084除效果。1、样品的前处理改进方法NY/T761-2008前处理方法中氮吹温度过高（80℃，存在难控制终点，而且敌敌畏甲拌磷等常见的有机磷农药存在蒸汽压低易4040NY/T761-2008的氮吹条件进行改进具有明显改善检测结果的作用。2DB-17检测器进行检种有机磷农药分离30.005mg/kg-0.06mg/kg留时间为6.396in-19.400in。在各自限性范围内线性关系好（9；对NY/T761-2008《蔬菜和水果中有机磷、有机氮、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农4095.00%103.3%133、检测广州市售蔬菜样品64份，其中农药残留阳性的有10份，超标率为15.63%。叶菜类蔬菜合格率为71.43%，而瓜菜类、根茎类和茄果类全部合格。在11种标的农药中，检测出5种，其中3种为国家禁用农药。4、除了超声波清洗之外，清水、洗涤剂以及食用碱均能不同程度的去除娃娃菜中残留的农药。斧牌洗洁精对敌敌畏和乐果两种农药残留的去除效果最佳，斧牌洗洁精对两种农药的去除率为分别为84.38%和76.11%。二、创新点1、本文改进了农业部《NY/T761-2008单位使用。2NY/T761中没有涉及的农药—据。三、展望以集中在以下几个部分：1、有机磷农药的快速检测：目前有机磷农药的快速检测成为一种趋势，主相比还要差一些。因此今后可在提高快速检测方法的灵敏度等方面进行深入研究。2、家用去除农药清洗方法还有待进一步研究，将各种常用的有机磷、有机高效的洗涤剂。参考文献赵为武.农产品农药残留问题及治理对策2001（310-13[2]张立言.有机磷农药[M].1973：21，132，194高桂枝，王圣巍，王俏，吕俊芳.残留农药污染危害及其防治[J].延安大学学报（自然科学版，2002，21（1）.蔬菜水果中的农药残留分析进展[J].山西农业科学，2003，31（2：49-55吴钜文，张敏恒.无公害蔬菜生产对农药的需要.农药，2003，42（1：1-3宋嵩.蔬菜农残现状及日本相关法规简介江苏质量，2002（4：8-10刘海燕.安徽省蔬菜农药残留现状与控制对策[J].安徽农业科学，2002，30（2）：277-282.胡兴启..200（1：3-5刘本书，盛启荣.蔬菜农药残留的现状及防除措施[J].湖北农业科学，2002（16：27-282006年济南市市售蔬菜农药残留监测结果调查[J].防医学论坛，2007：13（11）王瑞，黄昭瑜，古松浩.2006年市售蔬菜农药残留情况分析[J].徽农业科学，lofii2007，35（31：9961-9962孙胜龙，李雪飞，刘歆瑜.长春市主要蔬菜中农药残留分析[J].生态环境2005，14（2：214-217Dutchstateinstituteofqualitycontrolofagriculturalproducts:ResiduemonitoringinTheNetherlandsProgrammeforthequalityofagriculturalproducts.BundesinstitutfuergesundheitlichenVerbraucherschutzuudVeternaermadizi（，1997：Lebensittel-onitoring.A（1998Aem-residuemonitoring1998.（T：//\hwww.cfsan.fda.Gov）王毓秀.化学农药与环境激素农村生态环境，1999，15（4：35-37.农药残留及监控对策.20022（5：74-76无作者.科学家发现残留农药可导致人体消化功能紊乱[J].农药科学与管理，2001，22（6）[19]夏增禄.土壤环境容量及其应用[M].北京：气象出版社，1998[20]刘加莹.不安全蔬菜的安全处理企业与市场，2002（9：22-23[21]李淑云.农药与农业生态.生物学通报，2001，36（5：18-19[22]屠豫钦.关于农药鱼环境问题的反思[J].农药快讯，2001，14：13-15[23]江镇海.农药使用中的生态效应.化工之友，2001（8：48-48GerardJ，JohnExtractionClean-upandChromatographicDeterminationofOrganophosphatePyrethroidandCarbamateInsecticideinGrainandGrainProducts[J].Analyst，1988，113：1493ThurmanEM,SnavelyK.AdvancesinSPEdisksforenvironmentalcheistry[J，rendsinAnal.Che.，2000，19（1：18-26NaidongW，ShouWZ，Addisonetal.Liquidchromatography/tandemmassspectrometricbioanalysisusingnormalphasecolumnswithaqueous/organicmobilephases-anovelapproachofeliminatingevaporationandreconstitutionstepsinwellJ.dns，2002，16（20：1965-1975张海霞，朱彭龄.固相萃取.分析化学，2000，28（9：172-180.固相萃取技术在农药分析中的应用[J].19（6：35-37赵维佳，高魏等.青菜中多种农药残留发分析方法[J].南京农业大学学报.2004，27（1：105-107黄骏雄.环境样品前处理技术及其进展1994（195-105GanzkerSalgoalkoK.MicrowareextractioAnovelsaplepreparationetholforchroatography[J].JChroatography，1986，371（26：299-306CaprielPetal，HaischA，KhanSU.Supercriticalmethanol：anefficacioustechniquefortheextractionofboundpesticideresiduesfromsoilandplantsamples[J].J.Agric.FoodChem.，1986，34：70-73SnyderJL，GrobRL.ComparisonofSupercriticalFluidExtractionwithClassicalSonicationandSoxhletExtractionforSelectedPesticides[J].1992（64：1940-1946.[J].内蒙古师范大学学报自然科学（汉文）版，2003，32（4：380-385周永德，程国沛.有机磷农药薄层色谱溴酚蓝显色法的改进[J].刑事技术，2002，6：21-22.蔬菜农药残留检测的红外光谱法研究[J].光谱学与光谱分析，2004（10：1202-1204.蔬菜中西维因农药残留检测用荧光光谱仪的研究[J].技术学报，2003（3：215-220纽伟民，赵晓联，赵春城.有机磷农药检测方法综述[J]，江苏食品与发酵，2001（1）28-30SchenckJ.RapidSolidPhaseExtractionCleanupforPesticideResiduesinFreshFruitsandVegetables[J].Bull.Environ.Contam.Toxicol.1999，63：277-281孙芳.反