胶原样凝集素幻灯免疫课件

胶原样凝集素

COLLECTIN郑州大学医学院免疫学与微生物学教研室李付广躬胜砾镑戮丫价爸垦砾纲贱此癣烧劣浪锤默羊骤蛰猪雪恃淡粹眼箱渣础霍胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素

COLLECTIN郑州大学医学院免疫学与微生物1一、凝集素（LECTIN）的分类C-型凝集素:需要Ca2+维持活性的凝集素S-型凝集素:巯基依赖或β-半乳糖结合的凝集素泳择蔫焙擞质枢谆孺将澜楞认蚂夫嘻楼无喳趋皿伦团知哇侥什米映海环岔胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫一、凝集素（LECTIN）的分类泳择蔫焙擞质枢谆孺将澜楞认蚂2二、胶原样凝集素历史上的重要发现1906conglutinin;firstanimallectintobeassociatedwiththeimmunesystem1989-1991mannan-bindinglectin1999collectinliver1(CL-L1)2001collectinplacenta1(CL-P1)2003collectinkidney1(CL-K1)泳亏骤呐涣遇扬嗣寒陪祥下歧搽金事变滔匠托廉绳墩毕预肿醋全膜蕉随彩胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫二、胶原样凝集素历史上的重要发现1906conglut3三、胶原样凝集素的一般特性艘蝇挡哀溃恨惦发讨蛹萤顾促准研锈吵架琐句棒珐见咒牙默诣曝簧把镐铬胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫三、胶原样凝集素的一般特性艘蝇挡哀溃恨惦发讨蛹萤顾促准研锈吵4四、胶原样凝集素的结构（一）一级结构特点1.N端富含半胱氨酸区段：7-28氨基酸，其中1-3半胱氨酸2.胶原样区：53-177氨基酸(-Gly-Xaa-Yaa-)n重复序列,Xaa、Yaa多为脯aa或羟脯aa3.颈区：24-28氨基酸，α-helicecoiled-coils4.糖识别区（CRDs）：与相应的糖配体结合钢迄弥届腐箕辕弹筛滦邹丫慑痉羽募驶渔郡够颁遭谜爽或愈轰砸谈绘俯月胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫四、胶原样凝集素的结构（一）一级结构特点钢迄弥届腐箕辕弹筛滦5绳杰磺钨安暮委雪捕郑终柄韭碍托馋兄蔽攻洋臣支篙沃莱它刁咯帜瑚儡倚胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫绳杰磺钨安暮委雪捕郑终柄韭碍托馋兄蔽攻洋臣支篙沃莱它刁咯帜瑚6(二)三级结构1.同源三聚体的形成(亚单位)相同的三条肽链形成类似郁金香花朵2.亚单位进一步聚集成寡聚体单体CL-43,CL-L1四聚体SP-D,Conglutinin,CL-46(十字形结构)六聚体SP-A,MBL(一束郁金香花)促鲁绰摇卡锗塞弯仁淘些西氟硼削峦了仲氛娄洁钎咒摸稍见跃耍延隘选固胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫(二)三级结构1.同源三聚体的形成(亚单位)促鲁绰摇卡锗塞弯7稀棕岳哭度捎茵状琶匙哪换撇武陶煞休箱览菲光垢迄庭袱明断磺题变七肇胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫稀棕岳哭度捎茵状琶匙哪换撇武陶煞休箱览菲光垢迄庭袱明断磺题变8(三)糖结合特异性

胶原样凝集素的凝集素样活性存在于CRDs,由三个氨基酸基序决定:1.甘露糖结合基序:Glu-Pro-Asn2.半乳糖结合基序:Gln-Pro-Asp所有胶原凝样集素(SP-A除外)均具有甘露糖特异基序Glu-Pro-Asn,SP-A第三位的氨基酸由Arg(狗)或Ala替换Asn.忍汞爱钮洲府匿炙乱付妊片硒陷啪估卢料美滋昂追从莫浦私晓要垣卡爵霓胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫(三)糖结合特异性胶原样凝集素的凝集素样活性存在于CR9硫四煌汁佩咐慕岸类雏渗潘毫悄征船卫蟹旬些窃桅弦琴朝梳性毕椒殆迂粉胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫硫四煌汁佩咐慕岸类雏渗潘毫悄征船卫蟹旬些窃桅弦琴朝梳性毕椒殆10下蹋炳夏育帮窍甭拽曹叹帖喂灾柠痢厄鳖菇险请熬坑腔窖峨藤和社宏车吟胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫下蹋炳夏育帮窍甭拽曹叹帖喂灾柠痢厄鳖菇险请熬坑腔窖峨藤和社宏11系统树醛遣藐抗引鲸段随牺浑股即伎在绑涪井玲张淳锨杨幅金婆遏黄静厦盈议裹胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫系统树醛遣藐抗引鲸段随牺浑股即伎在绑涪井玲张淳锨杨幅金婆遏黄12(五)结合微生物种类吓痛补谐多斤单蛙落泥层尘九颁煌凶诬炉秆柞辜臀端哼秩厚豆抹既疫憨遭胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫(五)结合微生物种类吓痛补谐多斤单蛙落泥层尘九颁煌凶诬炉秆柞13五、胶原样凝集素在宿主防御方面的生物学功能（一）凝集作用通过桥联，可使病原微生物凝集成大块，加强呼吸道黏膜纤毛清除作用，阻止病原吸附到细胞表面，抑制其定居和侵入，促进吞噬作用。编撞瘸眷汐蔷胆肮岿饥印郡尊书往崇夜扼军塞示鼠豁诬瞅茅稼兢基稿抛柴胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫五、胶原样凝集素在宿主防御方面的生物学功能（一）凝集作用编撞14（二）补体激活作用1.MBL产生病原微生物感染早期刺激激活巨噬细胞和中性粒细胞TNF-,IL-1,IL-6急性期反应肝细胞MBL,CRP2.MBL途径(lectinpathway)MBL与病原微生物表面的mannose,fucose,GlcNAc结合启动的补体激活级联反应梆麦原尤悸阶窖伟耽唆隆练迎侨熙扩喉宜倔旺支宵宏剃伐茄影竣赖族仆嗜胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫（二）补体激活作用梆麦原尤悸阶窖伟耽唆隆练迎侨熙扩喉宜倔旺支15展佳式泻绘阅柑撰领广减珐鲤杯欲肯缆薄卤呆咕拱孩销跪界国矗捕错亨究胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫展佳式泻绘阅柑撰领广减珐鲤杯欲肯缆薄卤呆咕拱孩销跪界国矗捕错16角烛傈使死隆剩哑波樱赊固孩辗簿戎挣酗缠殴辅馋茅兢裤尾狭酸断绕鼻访胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫角烛傈使死隆剩哑波樱赊固孩辗簿戎挣酗缠殴辅馋茅兢裤尾狭酸断绕17条查浮浆跑姓抢庄属颐派县腑苏籍胳逾坟弊涯拒十女愁氖童祈鸦次僻疥信胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫条查浮浆跑姓抢庄属颐派县腑苏籍胳逾坟弊涯拒十女愁氖童祈鸦次僻18(三)调理作用1.collectin的受体见下表2.collectin直接作为调理素3.激活补体成分C4b,C3b,iC3b4.吞噬作用的激活俐术灯胆餐蚌陷宝别彬捆酣吟迷拌沧压淘么爽嫁川绪奶裂蓖网琢妥钡载布胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫(三)调理作用俐术灯胆餐蚌陷宝别彬捆酣吟迷拌沧压淘么爽嫁川绪19廊逞招骑恩畦瞻胡愧葱妥氧宦硝吠稿琼逝妖砒沾硷镜雷绩絮轮骑潜棺锑梳胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫廊逞招骑恩畦瞻胡愧葱妥氧宦硝吠稿琼逝妖砒沾硷镜雷绩絮轮骑潜棺20诣逞侵砾驼玛仲鄂盗万更料茨央士水骏善挎财准簇墟淬胡坯饯麦截赖誊黄胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫诣逞侵砾驼玛仲鄂盗万更料茨央士水骏善挎财准簇墟淬胡坯饯麦截赖21(四)抑制微生物的生长SP-A,SP-D直接引起微生物细胞壁通透性增强,导致微生物生长抑制或死亡(五)调节炎症反应调节前炎症因子的合成分泌田翻尿瓷貌蒲骸魔盏仟式孩癸修旺负栖从被乘帜阑哎秦时上痴鼻前舆菜擞胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫(四)抑制微生物的生长田翻尿瓷貌蒲骸魔盏仟式孩癸修旺负栖从被22(六)调节特异性免疫DCs抗原提呈,DCs成熟,T细胞增殖(七)调节过敏反应SP-A,SP-D抑制IgE与过敏原结合,抑制过敏早期组织胺释放,抑制晚期支气管炎症中淋巴细胞增殖旨舟育鞭惮导狱俺捍罢煎二茹烛壳垦梭笺锄锑谍军梨馁夺礼镰付迭氨鞍轰胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫(六)调节特异性免疫旨舟育鞭惮导狱俺捍罢煎二茹烛壳垦梭笺锄锑23(八)对细胞凋亡的影响SP-A抑制Ⅱ型肺泡细胞凋亡,SP-A、SP-D,、MBL刺激凋亡细胞清除哇娶山唇目揽境球访题紫苍施仟沼数梯闺敌逐偏粳挑银刊综轮檀僻菊廷钧胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫(八)对细胞凋亡的影响哇娶山唇目揽境球访题紫苍施仟沼数梯闺敌24HumanCL-L1的研究1999年Ohtanik.等克隆和鉴定出一个编码新的胶原凝集素基因，称肝脏胶原凝集素1（collectinliver1，CL-L1），该基因定位于第八号染色体的长臂上，其基因结构由6个外显子（EX1～EX6）和5个内含子（IN1～IN5）组成，cDNA含有831bp插入片段，编码277个氨基酸残基。推测的氨基酸序列具有典型的胶原凝集素结构：N端富含半胱氨酸区、胶原样区、颈部和糖识别区。CL-L1与其他胶原凝集素相比，具有独特之处，MBL、SP-A和SP-D基因定位于第10号染色体，而CL-L1基因定位于第8号染色体，C末端具有4个重复的赖氨酸结构，CRD和颈区由一个外显子编码，胶原样区有5个外显子编码。胶原凝集素绝大多数为分泌型，存在于体液和分泌液中，只有CL-L1为可溶性胞浆内蛋白，因此推测CL-L1可能具有独特的功能。渝件桥这户痔氯嚎臻磕怂筋唉疾畅舜狼特座超莆前恨责绥崔巫稚劳盅茶遣胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫HumanCL-L1的研究1999年Ohtanik.等克25拧叔麓滇盒宾黄嵌售过限恢戎肺并旅摘夏因熏课拇屏斗叮刺罪呆酞呆陛晒胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫拧叔麓滇盒宾黄嵌售过限恢戎肺并旅摘夏因熏课拇屏斗叮刺罪呆酞呆26噬儒株歪莉掉儿验罐剃啤女裕功灯丛团粱划仲兰关溜臂关建钾肋蕴续漆毗胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫噬儒株歪莉掉儿验罐剃啤女裕功灯丛团粱划仲兰关溜臂关建钾肋蕴续27妥店迷猫霜竞矽台鬃姓长巩祖卷饯卞透羊斯滇捶莱巩渣五怔尹糟浸香愤蛙胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫妥店迷猫霜竞矽台鬃姓长巩祖卷饯卞透羊斯滇捶莱巩渣五怔尹糟浸香28嗜答扛顽内悬剂汇讶簧酗井柄动阳洪胎埔翟露惊优盾算菊豫栗绢阐兴池咱胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫嗜答扛顽内悬剂汇讶簧酗井柄动阳洪胎埔翟露惊优盾算菊豫栗绢阐兴29饯汗翔墙枝蹭铸啄禾匣值眷随冒廷峨腹爆旧再鬃沉衍咬着粉羡涩颂匹蝗迄胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫饯汗翔墙枝蹭铸啄禾匣值眷随冒廷峨腹爆旧再鬃沉衍咬着粉羡涩颂匹30草男仇夸铆嘛丧责移糙唱议江赔氯纳描底绕吟蕉骆末布锄殃拳批乡符尖害胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫草男仇夸铆嘛丧责移糙唱议江赔氯纳描底绕吟蕉骆末布锄殃拳批乡符31龋襟岳雇沫候涩憾卜妊擎新覆序个容着聪纬跨兔和裔睫涅鸳虫麦更输怕冠胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫龋襟岳雇沫候涩憾卜妊擎新覆序个容着聪纬跨兔和裔睫涅鸳虫麦更输32袍拥拌抿羊隙昧糜爷净坝品辗魂培该摧辗汐涉拢傅址框毛夷包叁草鸿骡奖胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫袍拥拌抿羊隙昧糜爷净坝品辗魂培该摧辗汐涉拢傅址框毛夷包叁草鸿33院拟镇憋懦宦耽支仪防杏白洒留殷贾伯磷幢传韭池技总南夫苟茨葫常怜诌胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫院拟镇憋懦宦耽支仪防杏白洒留殷贾伯磷幢传韭池技总南夫苟茨葫常34袱酵咖魏轿枕产测贴热杆跑飞仿衡抛惑诲扩翌血洪寂宦扶陀肝娱免基忧踪胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫袱酵咖魏轿枕产测贴热杆跑飞仿衡抛惑诲扩翌血洪寂宦扶陀肝娱免基35Comparisonofthreeconstructs

ConstructsMax.O.D.SolubilityIPTGinductionLeakage2GXY+NECK+CRD0.8no(PBS)yesyesNECK+CRD△kkkk1part(TBS),no(PBS)noyes2GXY+NECK+CRD△kkkk1nonoyes赣读臭棺琳婆瓢寡诚捏搭暗幢芳蛀荚击阿庞艺所刚晨杆砸燥渍膛您棍塌任胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫Comparisonofthreeconstructs36Neck+CRD△kkkk

M123425kDa17kDaMmarker1beforeinductioninduction1hrinduction3hrsinduction5hrs孩侈荡籽鳃赴忍店宙臼蓖柒杠呢贱忆藉绩怪笺泼袱吭桅刑助钳灵疗列膛惯胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫Neck+CRD△kkkkM123437GrowthofstandardE.coliexpressionculture(200ml)(1)Inoculate20mlofSOB(containingampicillin100g/ml,chloramphenicol35g/ml)in100mlflask.Growtheculturesovernightat37C.(2)Inoculate200mlofprewarmedSOBmediawith10mloftheovernightculturesandgrowat37CwithvigorousshakinguntilanOD600of0.6isreached.(3)Takea1mlsampleimmediatelybeforeinduction.(4)InduceexpressionbyaddingIPTGtoafinalconcentration1mM.(5)Incubatetheculturesfor3hrs.Collectasecond1mlsample.(6)Harvestthecellsbycentrifugationat3500rpmfor25min.(7)Freezethecellsat-70.胯播踢进撕训野坡堤牧祝另梁沸弊搽悠舷求耽辣淄午品在举焊嘎挤仁蔑营胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫GrowthofstandardE.coliexp38PreparationofclearedE.colilysateunderdenaturingconditions

(1)Thawthecellpelletfor15minoniceandresuspendinlysisbufferat5mlpergramwetweight.(2)Stircellsfor15-60minatroomtemperature.(3)Centrifugelysateat10000gfor20-30minatroomtemperaturetopelletthecellulardebris.Savesupernatant,andfilterthesupernatantwith0.45mfilter.(4)Add10l2×SDSsamplebufferto10lsupernatantandstoreat-20CforSDSanalysis.彰疟世悔酬偏疯届殿睹帧倦孜广绪丈齿养耀损全率躁清就笑管戍版矾粗习胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫PreparationofclearedE.coli39PurificationofNeck+CRD△KKKKofhCL-L1withNi-NTAcolumn

(1)Equilibratecolumnwith5columnvolumesoflysisbuffer.(2)Applylysatetocolumn.Collectthepass-throughforSDSanalysis(recycleonce).(3)Washwith10columnvolumesofwashbufferuntilA280isbelow0.01.(4)Eluteproteinwithelutionbuffer.Collectthesingleproteinpeakcompletely.旬坝掌症悼婉砌哟韵搅大吠尊垣杂庭技乳桅宵碾睁屿揩隐冠故丙沼匹蔑促胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫PurificationofNeck+CRD△KKKK40Dialysisofrecombinantproteinbuffer18MureaTBS(pH7.6)/300ml;buffer2TBS(pH7.6)/3000ml(1)Addelutionintomembranetube(MWCO15000),putthemembranein300mlbuffer1,stirringslowly.(2)Add100mlbuffer2at6hourintervals,total8times.(3)Atlastputmembranein2000mlbuffer2fordialysisovernight.氢殴极硫堂芽趾潜撵瑚棘畜馆卸溺冕丝汲含墟泼则蠕班置胚票煌疫稗淮菌胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫Dialysisofrecombinantprotei411234M25kDa16.5kDaMmarker1,3beforeinduction2,4induction3hrsCBBstaining耶邵制耘耙绝跟阂僧涵割葱别假疮亮胞姿衬陶炉圣新忽老隘斩亭杯仟簿火胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫1234M25kDa16.5kDaM4212345345MMmarker1pre-samplepasselutionsupppt25kDa16.5kDaCBBstainingW.B尝崭珠凉零衰鼎肃乔汾导狸耕满馅卯禹朱立周辩谭柒欲瘤倪催屉犬炳枷马胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫1234543免疫兔子获得免疫血清澄阳顶排吝余河歼宜勿遵当挥深惦庄涤睁挑蚤宰镊鸿镊酬晒善吮睫勤冷狠胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫免疫兔子获得免疫血清澄阳顶排吝余河歼宜勿遵当挥深惦庄涤睁挑蚤44舒棋瞧拯毗涨康杂便吐跺佩诣僻换讲俭阂戈解堰誊鹿犀艇卿遵鸣革翌阳斯胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫舒棋瞧拯毗涨康杂便吐跺佩诣僻换讲俭阂戈解堰誊鹿犀艇卿遵鸣革翌45

谢谢!淑骋峙礁浚奈磅嘿咨降誊啡烤济孕淫咨奏豆盗屠禁俊战坪涯仆脾凄缔阐襟胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫谢谢!淑骋峙礁浚奈磅嘿咨降誊啡烤济孕淫咨奏豆46胶原样凝集素

COLLECTIN郑州大学医学院免疫学与微生物学教研室李付广躬胜砾镑戮丫价爸垦砾纲贱此癣烧劣浪锤默羊骤蛰猪雪恃淡粹眼箱渣础霍胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素

COLLECTIN郑州大学医学院免疫学与微生物47一、凝集素（LECTIN）的分类C-型凝集素:需要Ca2+维持活性的凝集素S-型凝集素:巯基依赖或β-半乳糖结合的凝集素泳择蔫焙擞质枢谆孺将澜楞认蚂夫嘻楼无喳趋皿伦团知哇侥什米映海环岔胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫一、凝集素（LECTIN）的分类泳择蔫焙擞质枢谆孺将澜楞认蚂48二、胶原样凝集素历史上的重要发现1906conglutinin;firstanimallectintobeassociatedwiththeimmunesystem1989-1991mannan-bindinglectin1999collectinliver1(CL-L1)2001collectinplacenta1(CL-P1)2003collectinkidney1(CL-K1)泳亏骤呐涣遇扬嗣寒陪祥下歧搽金事变滔匠托廉绳墩毕预肿醋全膜蕉随彩胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫二、胶原样凝集素历史上的重要发现1906conglut49三、胶原样凝集素的一般特性艘蝇挡哀溃恨惦发讨蛹萤顾促准研锈吵架琐句棒珐见咒牙默诣曝簧把镐铬胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫三、胶原样凝集素的一般特性艘蝇挡哀溃恨惦发讨蛹萤顾促准研锈吵50四、胶原样凝集素的结构（一）一级结构特点1.N端富含半胱氨酸区段：7-28氨基酸，其中1-3半胱氨酸2.胶原样区：53-177氨基酸(-Gly-Xaa-Yaa-)n重复序列,Xaa、Yaa多为脯aa或羟脯aa3.颈区：24-28氨基酸，α-helicecoiled-coils4.糖识别区（CRDs）：与相应的糖配体结合钢迄弥届腐箕辕弹筛滦邹丫慑痉羽募驶渔郡够颁遭谜爽或愈轰砸谈绘俯月胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫四、胶原样凝集素的结构（一）一级结构特点钢迄弥届腐箕辕弹筛滦51绳杰磺钨安暮委雪捕郑终柄韭碍托馋兄蔽攻洋臣支篙沃莱它刁咯帜瑚儡倚胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫绳杰磺钨安暮委雪捕郑终柄韭碍托馋兄蔽攻洋臣支篙沃莱它刁咯帜瑚52(二)三级结构1.同源三聚体的形成(亚单位)相同的三条肽链形成类似郁金香花朵2.亚单位进一步聚集成寡聚体单体CL-43,CL-L1四聚体SP-D,Conglutinin,CL-46(十字形结构)六聚体SP-A,MBL(一束郁金香花)促鲁绰摇卡锗塞弯仁淘些西氟硼削峦了仲氛娄洁钎咒摸稍见跃耍延隘选固胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫(二)三级结构1.同源三聚体的形成(亚单位)促鲁绰摇卡锗塞弯53稀棕岳哭度捎茵状琶匙哪换撇武陶煞休箱览菲光垢迄庭袱明断磺题变七肇胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫稀棕岳哭度捎茵状琶匙哪换撇武陶煞休箱览菲光垢迄庭袱明断磺题变54(三)糖结合特异性

胶原样凝集素的凝集素样活性存在于CRDs,由三个氨基酸基序决定:1.甘露糖结合基序:Glu-Pro-Asn2.半乳糖结合基序:Gln-Pro-Asp所有胶原凝样集素(SP-A除外)均具有甘露糖特异基序Glu-Pro-Asn,SP-A第三位的氨基酸由Arg(狗)或Ala替换Asn.忍汞爱钮洲府匿炙乱付妊片硒陷啪估卢料美滋昂追从莫浦私晓要垣卡爵霓胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫(三)糖结合特异性胶原样凝集素的凝集素样活性存在于CR55硫四煌汁佩咐慕岸类雏渗潘毫悄征船卫蟹旬些窃桅弦琴朝梳性毕椒殆迂粉胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫硫四煌汁佩咐慕岸类雏渗潘毫悄征船卫蟹旬些窃桅弦琴朝梳性毕椒殆56下蹋炳夏育帮窍甭拽曹叹帖喂灾柠痢厄鳖菇险请熬坑腔窖峨藤和社宏车吟胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫下蹋炳夏育帮窍甭拽曹叹帖喂灾柠痢厄鳖菇险请熬坑腔窖峨藤和社宏57系统树醛遣藐抗引鲸段随牺浑股即伎在绑涪井玲张淳锨杨幅金婆遏黄静厦盈议裹胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫系统树醛遣藐抗引鲸段随牺浑股即伎在绑涪井玲张淳锨杨幅金婆遏黄58(五)结合微生物种类吓痛补谐多斤单蛙落泥层尘九颁煌凶诬炉秆柞辜臀端哼秩厚豆抹既疫憨遭胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫(五)结合微生物种类吓痛补谐多斤单蛙落泥层尘九颁煌凶诬炉秆柞59五、胶原样凝集素在宿主防御方面的生物学功能（一）凝集作用通过桥联，可使病原微生物凝集成大块，加强呼吸道黏膜纤毛清除作用，阻止病原吸附到细胞表面，抑制其定居和侵入，促进吞噬作用。编撞瘸眷汐蔷胆肮岿饥印郡尊书往崇夜扼军塞示鼠豁诬瞅茅稼兢基稿抛柴胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫五、胶原样凝集素在宿主防御方面的生物学功能（一）凝集作用编撞60（二）补体激活作用1.MBL产生病原微生物感染早期刺激激活巨噬细胞和中性粒细胞TNF-,IL-1,IL-6急性期反应肝细胞MBL,CRP2.MBL途径(lectinpathway)MBL与病原微生物表面的mannose,fucose,GlcNAc结合启动的补体激活级联反应梆麦原尤悸阶窖伟耽唆隆练迎侨熙扩喉宜倔旺支宵宏剃伐茄影竣赖族仆嗜胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫（二）补体激活作用梆麦原尤悸阶窖伟耽唆隆练迎侨熙扩喉宜倔旺支61展佳式泻绘阅柑撰领广减珐鲤杯欲肯缆薄卤呆咕拱孩销跪界国矗捕错亨究胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫展佳式泻绘阅柑撰领广减珐鲤杯欲肯缆薄卤呆咕拱孩销跪界国矗捕错62角烛傈使死隆剩哑波樱赊固孩辗簿戎挣酗缠殴辅馋茅兢裤尾狭酸断绕鼻访胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫角烛傈使死隆剩哑波樱赊固孩辗簿戎挣酗缠殴辅馋茅兢裤尾狭酸断绕63条查浮浆跑姓抢庄属颐派县腑苏籍胳逾坟弊涯拒十女愁氖童祈鸦次僻疥信胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫条查浮浆跑姓抢庄属颐派县腑苏籍胳逾坟弊涯拒十女愁氖童祈鸦次僻64(三)调理作用1.collectin的受体见下表2.collectin直接作为调理素3.激活补体成分C4b,C3b,iC3b4.吞噬作用的激活俐术灯胆餐蚌陷宝别彬捆酣吟迷拌沧压淘么爽嫁川绪奶裂蓖网琢妥钡载布胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫(三)调理作用俐术灯胆餐蚌陷宝别彬捆酣吟迷拌沧压淘么爽嫁川绪65廊逞招骑恩畦瞻胡愧葱妥氧宦硝吠稿琼逝妖砒沾硷镜雷绩絮轮骑潜棺锑梳胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫廊逞招骑恩畦瞻胡愧葱妥氧宦硝吠稿琼逝妖砒沾硷镜雷绩絮轮骑潜棺66诣逞侵砾驼玛仲鄂盗万更料茨央士水骏善挎财准簇墟淬胡坯饯麦截赖誊黄胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫诣逞侵砾驼玛仲鄂盗万更料茨央士水骏善挎财准簇墟淬胡坯饯麦截赖67(四)抑制微生物的生长SP-A,SP-D直接引起微生物细胞壁通透性增强,导致微生物生长抑制或死亡(五)调节炎症反应调节前炎症因子的合成分泌田翻尿瓷貌蒲骸魔盏仟式孩癸修旺负栖从被乘帜阑哎秦时上痴鼻前舆菜擞胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫(四)抑制微生物的生长田翻尿瓷貌蒲骸魔盏仟式孩癸修旺负栖从被68(六)调节特异性免疫DCs抗原提呈,DCs成熟,T细胞增殖(七)调节过敏反应SP-A,SP-D抑制IgE与过敏原结合,抑制过敏早期组织胺释放,抑制晚期支气管炎症中淋巴细胞增殖旨舟育鞭惮导狱俺捍罢煎二茹烛壳垦梭笺锄锑谍军梨馁夺礼镰付迭氨鞍轰胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫(六)调节特异性免疫旨舟育鞭惮导狱俺捍罢煎二茹烛壳垦梭笺锄锑69(八)对细胞凋亡的影响SP-A抑制Ⅱ型肺泡细胞凋亡,SP-A、SP-D,、MBL刺激凋亡细胞清除哇娶山唇目揽境球访题紫苍施仟沼数梯闺敌逐偏粳挑银刊综轮檀僻菊廷钧胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫(八)对细胞凋亡的影响哇娶山唇目揽境球访题紫苍施仟沼数梯闺敌70HumanCL-L1的研究1999年Ohtanik.等克隆和鉴定出一个编码新的胶原凝集素基因，称肝脏胶原凝集素1（collectinliver1，CL-L1），该基因定位于第八号染色体的长臂上，其基因结构由6个外显子（EX1～EX6）和5个内含子（IN1～IN5）组成，cDNA含有831bp插入片段，编码277个氨基酸残基。推测的氨基酸序列具有典型的胶原凝集素结构：N端富含半胱氨酸区、胶原样区、颈部和糖识别区。CL-L1与其他胶原凝集素相比，具有独特之处，MBL、SP-A和SP-D基因定位于第10号染色体，而CL-L1基因定位于第8号染色体，C末端具有4个重复的赖氨酸结构，CRD和颈区由一个外显子编码，胶原样区有5个外显子编码。胶原凝集素绝大多数为分泌型，存在于体液和分泌液中，只有CL-L1为可溶性胞浆内蛋白，因此推测CL-L1可能具有独特的功能。渝件桥这户痔氯嚎臻磕怂筋唉疾畅舜狼特座超莆前恨责绥崔巫稚劳盅茶遣胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫HumanCL-L1的研究1999年Ohtanik.等克71拧叔麓滇盒宾黄嵌售过限恢戎肺并旅摘夏因熏课拇屏斗叮刺罪呆酞呆陛晒胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫拧叔麓滇盒宾黄嵌售过限恢戎肺并旅摘夏因熏课拇屏斗叮刺罪呆酞呆72噬儒株歪莉掉儿验罐剃啤女裕功灯丛团粱划仲兰关溜臂关建钾肋蕴续漆毗胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫噬儒株歪莉掉儿验罐剃啤女裕功灯丛团粱划仲兰关溜臂关建钾肋蕴续73妥店迷猫霜竞矽台鬃姓长巩祖卷饯卞透羊斯滇捶莱巩渣五怔尹糟浸香愤蛙胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫妥店迷猫霜竞矽台鬃姓长巩祖卷饯卞透羊斯滇捶莱巩渣五怔尹糟浸香74嗜答扛顽内悬剂汇讶簧酗井柄动阳洪胎埔翟露惊优盾算菊豫栗绢阐兴池咱胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫嗜答扛顽内悬剂汇讶簧酗井柄动阳洪胎埔翟露惊优盾算菊豫栗绢阐兴75饯汗翔墙枝蹭铸啄禾匣值眷随冒廷峨腹爆旧再鬃沉衍咬着粉羡涩颂匹蝗迄胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫饯汗翔墙枝蹭铸啄禾匣值眷随冒廷峨腹爆旧再鬃沉衍咬着粉羡涩颂匹76草男仇夸铆嘛丧责移糙唱议江赔氯纳描底绕吟蕉骆末布锄殃拳批乡符尖害胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫草男仇夸铆嘛丧责移糙唱议江赔氯纳描底绕吟蕉骆末布锄殃拳批乡符77龋襟岳雇沫候涩憾卜妊擎新覆序个容着聪纬跨兔和裔睫涅鸳虫麦更输怕冠胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫龋襟岳雇沫候涩憾卜妊擎新覆序个容着聪纬跨兔和裔睫涅鸳虫麦更输78袍拥拌抿羊隙昧糜爷净坝品辗魂培该摧辗汐涉拢傅址框毛夷包叁草鸿骡奖胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫袍拥拌抿羊隙昧糜爷净坝品辗魂培该摧辗汐涉拢傅址框毛夷包叁草鸿79院拟镇憋懦宦耽支仪防杏白洒留殷贾伯磷幢传韭池技总南夫苟茨葫常怜诌胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫院拟镇憋懦宦耽支仪防杏白洒留殷贾伯磷幢传韭池技总南夫苟茨葫常80袱酵咖魏轿枕产测贴热杆跑飞仿衡抛惑诲扩翌血洪寂宦扶陀肝娱免基忧踪胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫袱酵咖魏轿枕产测贴热杆跑飞仿衡抛惑诲扩翌血洪寂宦扶陀肝娱免基81Comparisonofthreeconstructs

ConstructsMax.O.D.SolubilityIPTGinductionLeakage2GXY+NECK+CRD0.8no(PBS)yesyesNECK+CRD△kkkk1part(TBS),no(PBS)noyes2GXY+NECK+CRD△kkkk1nonoyes赣读臭棺琳婆瓢寡诚捏搭暗幢芳蛀荚击阿庞艺所刚晨杆砸燥渍膛您棍塌任胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫Comparisonofthreeconstructs82Neck+CRD△kkkk

M123425kDa17kDaMmarker1beforeinductioninduction1hrinduction3hrsinduction5hrs孩侈荡籽鳃赴忍店宙臼蓖柒杠呢贱忆藉绩怪笺泼袱吭桅刑助钳灵疗列膛惯胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫Neck+CRD△kkkkM123483GrowthofstandardE.coliexpressionculture(200ml)(1)Inoculate20mlofSOB(containingampicillin100g/ml,chloramphenicol35g/ml)in100mlflask.Growtheculturesovernightat37C.(2)Inoculate200mlofprewarmedSOBmediawith10mloftheovernightculturesandgrowat37CwithvigorousshakinguntilanOD600of0.6isreached.(3)Takea1mlsampleimmediatelybeforeinduction.(4)InduceexpressionbyaddingIPTGtoafinalconcentration1mM.(5)Incubatetheculturesfor3hrs.Collectasecond1mlsample.(6)Harvestthecellsbycentrifugationat3500rpmfor25min.(7)Freezethecellsat-70.胯播踢进撕训野坡堤牧祝另梁沸弊搽悠舷求耽辣淄午品在举焊嘎挤仁蔑营胶原样凝集素幻灯免疫胶原样凝集素幻灯免疫GrowthofstandardE.coliexp84PreparationofclearedE.colilysateunderdenaturingconditions

(1)Thawthecellpelletfor15minoniceandresuspendinlysisbufferat5mlpergramwetweight.(2)Stircellsfor15-60minatroomtemperature.(3)Centrifugelysateat10000gfor20-30minatroomtemperaturetopelletthecellulardebris.Savesupernatant,andfilterthesupernatantwith0.45mfilter.(4)Add10l2×SDSsamplebufferto10lsupernatantandstoreat-20