实验六从土壤中分离特定功能微生物课件

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下周实验准备课程内容补充

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下周实验准备1重要提示爱护实验室公共用品，维持实验场所的清洁卫生；用后的药品必须立即加盖收拾好，并清理天平上的杂物。灭菌锅锅盖上的通气软管不能弯折放置！微生物实验中用到的培养基固态为多，弃置时不得倒入水池，必须倾倒入厕所的下水道。水池内的防堵过滤网可以有效防止水池的通畅，不得擅自移取丢弃。显微镜使用后一定要注意做清洁工作，特别是油镜的清洁工作。亮度可调时要打小档后关闭。以上工作，由劳动委员总负责，班委成员和组长应在所在小组里发挥带头模范作用，班级成员要自觉执行。重要提示爱护实验室公共用品，维持实验场所的清洁卫生；用后的药2课程内容微生物所需要的营养物质培养基及其种类土壤中的微生物及其分布特点课程内容微生物所需要的营养物质3碳源（carbonsource）

氮源（nitrogensource）

生长因子（growthfactor）水（water）

无机盐（mineralsalts）3.1.2微生物需要的营养物质碳源（carbonsource）氮源（nitrogen4

水微生物细胞含水约占细胞鲜重的70－90％，水作用是多方面的水的功能：是细胞中生化反应的良好介质水的比热高，能有效的吸收代谢过程中放出的热量，不致使细胞的温度骤然上升物质运输载体；水微生物细胞含水约占细胞鲜重的70－90％，水作用是多方5凡能供给微生物碳素的各种含碳化合物称为碳源。碳源碳源功能：

碳素构成细胞各种有机成分的骨架

碳素也是异养微生物代谢所需的能量来源

碳源种类：

无机C源：CO2、碳酸盐，只能被自养微生物利用

有机C源：各种糖类，其次是有机酸、醇类、脂类、

烃类化合物，以及其他含碳污染物凡能供给微生物碳素的各种含碳化合物称为碳源。碳源碳源功能：

6凡是可以构成微生物细胞和代谢产物中氮素来源的营养物质都称为氮源。氮源功能：为微生物提供合成其重要组分如蛋白质、

核酸等的原料

氮源凡是可以构成微生物细胞和代谢产物中氮素来源的营养物质都称为氮7分子态氮：固氮微生物以分子氮为

唯一氮源无机态氮：铵盐、硝酸盐，

几乎所有微生物能利用有机态氮：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏

等水解程度越高越容易利用在利用微生物技术处理单一的缺乏氮素工业污水时，必须添加氮，如尿素或人畜粪便。

氮源种类分子态氮：固氮微生物以分子氮为

唯一氮8构成微生物细胞的组成成分有些无机盐如S、Fe还可做为自养微生物的能源构成酶活性基的组成成分，维持酶活性。Mg、Ca、K是多种酶的激活剂.

无机盐构成微生物细胞的组成成分无机盐9无机盐种类阴离子盐：磷酸盐、硫酸盐、氯化物、碳酸盐、碳酸氢盐。阳离子盐：氨、钾、钠、钙、镁、铁的盐P和S、Fe、Mg的需求量较大同时还需要锌、锰、钴、铝、铜、硼、钒、镍等微量元素。无机盐种类阴离子盐：磷酸盐、硫酸盐、氯化物、碳酸盐、碳酸氢盐10生长因子：指微生物需要的，而又不能自己合成的微量有机物质，这些微量有机物对微生物生长有极重要作用。包括：维生素：如B1、B2、B6、B12、VC氨基酸：如赖氨酸、蛋氨酸、精氨酸等碱基如：嘌呤、嘧啶

请比较：微量元素和生长因子的区别？

生长因子生长因子：指微生物需要的，而又不能自己合成的微量有机物质，这11培养基及培养条件

-----学会养菌培养基定义：

根据各类微生物的营养需求，将水、碳源、氮源、无机盐及生长因子按照一定比例配制，适合微生物的生长繁殖及其他生理功能的组合基质。培养基及培养条件

-----学会养菌培养基定义：

12培养基按成分来源的不同分

1．天然培养基:主要成分是复杂的天然有机物质，如马铃薯、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等。这些复杂天然有机物质的成分不完全了解，每次所用的原料，其中各成分的数量也不恒定。这类培养基是实验室常用的培养基，例如牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基等。2．合成培养基:用化学成分完全了解的纯试剂配制而成的培养基，如高氏1号培养基，查氏培养基等。一般用于营养代谢、分类鉴定、菌种选育、遗传分析等。3、半合成培养基培养基按成分来源的不同分1．天然培养基:主要成分是复杂的天13按培养基的物理状态分类

1．固体培养基:在液体培养基中加入凝固剂即为固体培养基。实验用的凝固剂有琼脂、明胶和硅胶，后者用于配制自养微生物的固体培养基。对其他多数微生物来讲，以琼脂最为合适，一般加入1．5—2．5%即可凝固成固体。此培养基可供分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏等用。2．半固体培养基:在液体培养基中加入少量凝固剂即为半固体培养基，例如琼脂只需加入0．2—0．7%。常用作细菌动力检查和菌种保存、噬菌体制剂的制备等。3．液体培养基:没有加琼脂，配好后成液体状态的培养基。常用于生理代谢的研究和工业发酵等。按培养基的物理状态分类1．固体培养基:在液体培养基中加入凝14按培养基的用途分类

1．基础培养基：如牛肉膏蛋白胨培养基是培养细菌的基础培养基；2．营养培养基（加富培养基）：如培养人百日咳杆菌时必须添加血清的加富培养基；3．选择培养基：如纤维素分解菌培养基，固氮培养基等；4、鉴别培养基：如EMB（伊红美兰培养基）可以迅速根据生长的外观判断大肠杆菌的存在。按培养基的用途分类1．基础培养基：如牛肉膏蛋白胨培养基是培15一些典型的培养基

（1）细菌培养基：如牛肉膏蛋白胨培养基（2）放线菌培养基：如高氏一号培养基（3）真菌培养基：如马铃薯葡萄糖培养基（4）

大肠杆菌鉴别培养基：EMB培养基一些典型的培养基16

成品培养基（快餐型）成品培养基（快餐型）17微生物的培养条件适宜的生长温度适宜的PH值氧气需求光照与否微生物的培养条件适宜的生长温度18根据微生物最适生长温度的不同，可将微生物划为三个类型：温度影响低温型微生物（嗜冷微生物）中温型微生物（嗜温微生物）高温型微生物（嗜热微生物）根据微生物最适生长温度的不同，可将微生物划为三个类型：温度影19专性好氧菌：必须在有较高的氧浓度条件下才能生长。微好氧菌：只能较低的氧分压下才能正常生长兼性好氧菌：在有氧或无氧条件下均能生长，但有氧情况下生长得更好。氧气对微生物生长的影响专性好氧菌：必须在有较高的氧浓度条件下才能生长。微好氧菌：只20耐氧菌：可在分子氧存在下进行厌氧生活的厌氧菌。生活不需要氧，分子氧也对它无毒害。厌氧菌：分子氧对它有毒害，短期接触空气，也会抑制其生长甚至致死；在空气中，固体培养基表面上不能生长，只有在其深层的无氧或低氧化还原电势的环境下才能生长耐氧菌：可在分子氧存在下进行厌氧生活的厌氧菌。生活不需要氧，21在培养不同类型的微生物时，要采用相应的措施保证不同微生物的生长。培养好氧微生物：需震荡或通气，保证充足的氧气。

好氧活性污泥工艺中，要保持溶解氧浓度≥2mg/l培养专性厌氧微生物：需排除环境中的氧气。培养兼性厌氧或耐氧微生物：可深层静止培养。供氧或隔氧一般措施在培养不同类型的微生物时，要采用相应的措施保证不同微生物的生22习题是微生物需要的，但又不能自己分成的微量有机物质。微生物需要的营养物质有:________、_______、__________、和。微生物的生长繁殖除了需要营养外，还需要一些合适的培养条件：、、和。实验室常用的碳源有

和__

_等，常用的有机氮源有__

__和__

等，无机氮源有__

__和

等。习题是微生物需要的，但又不能自己分成的微量有机23习题下面哪项不属于生长因子（）

A．维生素B。氨基酸

C。硫酸盐D。核苷酸下列属于微量元素的是（）

A：C、H、O

B：Ca.、Mg

C.：Zn.Cu

D：P.、S常用来进行菌种分离鉴定的培养基是（）Ａ固体培养基Ｂ液体培养基

Ｃ半固体培养基

习题下面哪项不属于生长因子（）

A．维生素24微生物需要的营养物质有很多，但以下哪一种是不需要的？（）

A、水B、无机盐

C、琼脂D、生长因子下面哪种培养基适合放线菌生长：（）

A、生肉膏蛋白胨B、麦芽汁琼脂C、高氏一号培养基D、伊红美培养基微生物需要的营养物质有很多，但以下哪一种是不需要的？（）25实验六土壤中特定功能微生物的富集和分离纯化方法理论讲解：土壤中微生物分布特点；土壤中微生物的富集和纯化方法；特定功能微生物的种类和富集方法；实验六土壤中特定功能微生物的富集和分离纯化方法理论讲解：26土壤微生物的种类、数量和分布土壤微生物的种类和数量；细菌最多，其次是放线菌和真菌，藻类和原生动物数量最少

土壤微生物的作用

转化土壤中各种物质的状态、改变土壤的理化性质，是构成土壤肥力的重要因素；

是土壤自净作用的基础，也是土壤修复的主力军；

土壤微生物的种类、数量和分布土壤微生物的种类和数量；27土壤微生物的分布状况土壤微生物的水平分布在油田存在较多分解石油的微生物；林区存在较多分解纤维素的微生物；果园土则含有较多的酵母菌

土壤微生物的垂直分布

表土微生物数量少，在5—20cm的土层中微生物数量最多，再往深处则又减少

土壤微生物的分布状况土壤微生物的水平分布28土壤中微生物富集纯化的意义

土壤是微生物生活最适宜的环境、它具有微生物所需要为一切营养物质和微生物进行生长繁殖及生存的各种条件．所以土壤中微生物的数量和种类都很多。它们参与土壤的氮、碳、硫、磷等元素的循环作用。此外，土壤中微生物的活动对土壤形成、土壤肥力和作物生产都有非常重要的作用。因此，查明土壤中微生物的数量和组成情况，从土壤中分离出特定功能的微生物，对发掘土壤微生物资源和对土壤微生物实行定向控制无疑是十分必要的。土壤中微生物富集纯化的意义土壤是微生物生活最适宜的环境29实验六

土壤中特定功能微生物的富集和纯化实验六30一、实验目的：1.进一步熟练和掌握培养基的配制和分装、灭菌等技术。2、了解固氮菌和纤维素分解菌的培养基组成特点；了解从土壤中分离纯化特定功能微生物的方法和操作过程。

一、实验目的：1.进一步熟练和掌握培养基的配制和分装、灭菌31（第1、2排）固氮菌培养基（1L水）

葡萄糖

15.0gK2HPO40.5gMgS040.2gCaSO40.1gNaCl0.2gCaCO35.0gpH7--8如需要做固体培养基，所加琼脂含氮量低为好。（第1、2排）固氮菌培养基（1L水）葡萄糖32（第3、4排）

固氮菌培养基（1L水）

甘露糖醇

15.0gK2HPO40.5gMgS040.2gCaSO40.1gNaCl0.2gCaCO35.0gpH7--8（第3、4排）固氮菌培养基（1L水）甘露糖醇33平板上固氮菌的富集培养程序1、用已灭菌后冷却至50oC左右的阿斯毕培养基倒成平板。2、用已灭菌的镊子将黄豆粒大的菜园土摆入已冷凝的平板培养基上。3、正面放置培养箱中培养，28oC培养3~4天后，在土粒周围有混浊半透明的胶状菌落出现，有的在后期会产生褐色的色素。第一排、第三排做固体平板上的固氮菌富集。平板上固氮菌的富集培养程序1、用已灭菌后冷却至50oC左右的34液体培养基中固氮菌的富集将配制好的无氮液体培养基，分装于100ml的三角瓶中，每瓶装30ml，灭菌冷却后，各接种少许土壤，于28--30度下培养约7天，在液面可见到灰白色菌膜，慢慢会变为黑褐色。取液面菌膜制片，镜检。并对菌液做进一步的分离纯化。第二排、第四排做液体培养基中的固氮菌富集。液体培养基中固氮菌的富集将配制好的无氮液体培养基，分装于1035（第5、6排）

富集纤维素分解菌的培养基11L水中含：

KH2PO4

1.00；

MgSO40.3；

NaCl0.1；NaNO32.5；CaCl2·6H2O

0.1；FeCl30.01；pH自然

第五排：固体培养基第六排：液体培养基（第5、6排）

富集纤维素分解菌的培养基11L水中含：

36纤维素好氧分解实验步骤1．制作平板：取已融化的纤维素好氧培养基，倒入无菌培养皿中，制成平板2．放置滤纸；用镊子取无菌滤纸1张，放入已凝固的琼脂平板上，紧贴，使滤纸表面湿润。3．加放土粒：用镊子取肥沃菜园土10余粒（或森林土粒），均匀排在滤纸表面，进行接种(图5--1)。纤维素好氧分解实验步骤1．制作平板：取已融化的纤维素好氧37图五纤维素好氧分解实验

4．恒温培养：放入培养箱，28—30C条件下培养7—10d。5．结果检查：先观察土粒周围有无黄色、桔黄色、棕色等色斑出现。土粒周围滤纸有无破损变薄现象。用解剖针从带有色斑处挑取少许滤纸至载玻片上，涂片，固定，染色，在油镜下观察并绘图。图五纤维素好氧分解实验4．恒温培养：放入培养箱，2838液体培养基中纤维素分解菌的富集将配制好的纤维素液体培养基，分装于100ml的三角瓶中，每瓶装30ml，灭菌冷却后，用无菌镊子夹取滤纸条放入培养液，再接种少许土壤，于28--30度下培养约7天，观察培养液中滤纸条有无被分解而透空的地方，如果滤纸有空洞或滤纸边缘有破碎现象，表示厌氧纤维分解细菌已大量繁殖，否则应继续培养。4。镜检：用接种环从发酵液滤纸破碎处取菌液一环至载玻片上，涂片，固定，染色，在油镜下观察并绘图。第六排做液体培养基中的纤维素分解菌富集。液体培养基中纤维素分解菌的富集将配制好的纤维素液体培养基，分39B纤维素厌氧分解实验3．目检：取出试管，观察培养液中滤纸条有无被分解而透空的地方，如果滤纸有空洞或滤纸边缘有破碎现象，表示厌氧纤维分解细菌已大量繁殖，否则应继续培养。4。镜检：用接种环从发酵液滤纸破碎处取菌液一环至载玻片上，涂片，固定，染色，在油镜下观察并绘图。B纤维素厌氧分解实验3．目检：取出试管，观察培养40（第7、8排）

富集纤维素分解菌的培养基21L水中含：

羧甲基纤维素钠(CMC-Na)20；Na2HPO42.5；KH2PO41.5；蛋白胨2.5；pH7.0—7.5第七排做固体培养基；第八排做液体培养基。注意：在无菌培养基内直接接如土粒即可，不需要加滤纸，因为已经含

羧甲基纤维素钠

（第7、8排）

富集纤维素分解菌的培养基21L水中含：

41注意事项第2、4、6、8排做液体培养基，每人限量1个；做固体平板富集菌种的，每人2个平板；慎重选取采土地点，确保土样中相应的微生物含量较高，易于分离。要采集多种类型的土样，并在标签和报告中注明土样来源。注意事项第2、4、6、8排做液体培养基，每人限量1个；42全班同学务必采取多种土样来源，确保实验结果显著！必须确保所取土样的质量：一是要采土来源多样性，如森林土，草地土，沼泽土，菜园土等；另外取表土层5--10cm以下的。数量满足接种就可以了。周二下午或者周三早上上课前取土为好。全班同学务必采取多种土样来源，确保实验结果显著！43课程内容补充

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下周实验准备课程内容补充

实验内容回顾

下周实验准备44重要提示爱护实验室公共用品，维持实验场所的清洁卫生；用后的药品必须立即加盖收拾好，并清理天平上的杂物。灭菌锅锅盖上的通气软管不能弯折放置！微生物实验中用到的培养基固态为多，弃置时不得倒入水池，必须倾倒入厕所的下水道。水池内的防堵过滤网可以有效防止水池的通畅，不得擅自移取丢弃。显微镜使用后一定要注意做清洁工作，特别是油镜的清洁工作。亮度可调时要打小档后关闭。以上工作，由劳动委员总负责，班委成员和组长应在所在小组里发挥带头模范作用，班级成员要自觉执行。重要提示爱护实验室公共用品，维持实验场所的清洁卫生；用后的药45课程内容微生物所需要的营养物质培养基及其种类土壤中的微生物及其分布特点课程内容微生物所需要的营养物质46碳源（carbonsource）

氮源（nitrogensource）

生长因子（growthfactor）水（water）

无机盐（mineralsalts）3.1.2微生物需要的营养物质碳源（carbonsource）氮源（nitrogen47

水微生物细胞含水约占细胞鲜重的70－90％，水作用是多方面的水的功能：是细胞中生化反应的良好介质水的比热高，能有效的吸收代谢过程中放出的热量，不致使细胞的温度骤然上升物质运输载体；水微生物细胞含水约占细胞鲜重的70－90％，水作用是多方48凡能供给微生物碳素的各种含碳化合物称为碳源。碳源碳源功能：

碳素构成细胞各种有机成分的骨架

碳素也是异养微生物代谢所需的能量来源

碳源种类：

无机C源：CO2、碳酸盐，只能被自养微生物利用

有机C源：各种糖类，其次是有机酸、醇类、脂类、

烃类化合物，以及其他含碳污染物凡能供给微生物碳素的各种含碳化合物称为碳源。碳源碳源功能：

49凡是可以构成微生物细胞和代谢产物中氮素来源的营养物质都称为氮源。氮源功能：为微生物提供合成其重要组分如蛋白质、

核酸等的原料

氮源凡是可以构成微生物细胞和代谢产物中氮素来源的营养物质都称为氮50分子态氮：固氮微生物以分子氮为

唯一氮源无机态氮：铵盐、硝酸盐，

几乎所有微生物能利用有机态氮：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏

等水解程度越高越容易利用在利用微生物技术处理单一的缺乏氮素工业污水时，必须添加氮，如尿素或人畜粪便。

氮源种类分子态氮：固氮微生物以分子氮为

唯一氮51构成微生物细胞的组成成分有些无机盐如S、Fe还可做为自养微生物的能源构成酶活性基的组成成分，维持酶活性。Mg、Ca、K是多种酶的激活剂.

无机盐构成微生物细胞的组成成分无机盐52无机盐种类阴离子盐：磷酸盐、硫酸盐、氯化物、碳酸盐、碳酸氢盐。阳离子盐：氨、钾、钠、钙、镁、铁的盐P和S、Fe、Mg的需求量较大同时还需要锌、锰、钴、铝、铜、硼、钒、镍等微量元素。无机盐种类阴离子盐：磷酸盐、硫酸盐、氯化物、碳酸盐、碳酸氢盐53生长因子：指微生物需要的，而又不能自己合成的微量有机物质，这些微量有机物对微生物生长有极重要作用。包括：维生素：如B1、B2、B6、B12、VC氨基酸：如赖氨酸、蛋氨酸、精氨酸等碱基如：嘌呤、嘧啶

请比较：微量元素和生长因子的区别？

生长因子生长因子：指微生物需要的，而又不能自己合成的微量有机物质，这54培养基及培养条件

-----学会养菌培养基定义：

根据各类微生物的营养需求，将水、碳源、氮源、无机盐及生长因子按照一定比例配制，适合微生物的生长繁殖及其他生理功能的组合基质。培养基及培养条件

-----学会养菌培养基定义：

55培养基按成分来源的不同分

1．天然培养基:主要成分是复杂的天然有机物质，如马铃薯、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等。这些复杂天然有机物质的成分不完全了解，每次所用的原料，其中各成分的数量也不恒定。这类培养基是实验室常用的培养基，例如牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基等。2．合成培养基:用化学成分完全了解的纯试剂配制而成的培养基，如高氏1号培养基，查氏培养基等。一般用于营养代谢、分类鉴定、菌种选育、遗传分析等。3、半合成培养基培养基按成分来源的不同分1．天然培养基:主要成分是复杂的天56按培养基的物理状态分类

1．固体培养基:在液体培养基中加入凝固剂即为固体培养基。实验用的凝固剂有琼脂、明胶和硅胶，后者用于配制自养微生物的固体培养基。对其他多数微生物来讲，以琼脂最为合适，一般加入1．5—2．5%即可凝固成固体。此培养基可供分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏等用。2．半固体培养基:在液体培养基中加入少量凝固剂即为半固体培养基，例如琼脂只需加入0．2—0．7%。常用作细菌动力检查和菌种保存、噬菌体制剂的制备等。3．液体培养基:没有加琼脂，配好后成液体状态的培养基。常用于生理代谢的研究和工业发酵等。按培养基的物理状态分类1．固体培养基:在液体培养基中加入凝57按培养基的用途分类

1．基础培养基：如牛肉膏蛋白胨培养基是培养细菌的基础培养基；2．营养培养基（加富培养基）：如培养人百日咳杆菌时必须添加血清的加富培养基；3．选择培养基：如纤维素分解菌培养基，固氮培养基等；4、鉴别培养基：如EMB（伊红美兰培养基）可以迅速根据生长的外观判断大肠杆菌的存在。按培养基的用途分类1．基础培养基：如牛肉膏蛋白胨培养基是培58一些典型的培养基

（1）细菌培养基：如牛肉膏蛋白胨培养基（2）放线菌培养基：如高氏一号培养基（3）真菌培养基：如马铃薯葡萄糖培养基（4）

大肠杆菌鉴别培养基：EMB培养基一些典型的培养基59

成品培养基（快餐型）成品培养基（快餐型）60微生物的培养条件适宜的生长温度适宜的PH值氧气需求光照与否微生物的培养条件适宜的生长温度61根据微生物最适生长温度的不同，可将微生物划为三个类型：温度影响低温型微生物（嗜冷微生物）中温型微生物（嗜温微生物）高温型微生物（嗜热微生物）根据微生物最适生长温度的不同，可将微生物划为三个类型：温度影62专性好氧菌：必须在有较高的氧浓度条件下才能生长。微好氧菌：只能较低的氧分压下才能正常生长兼性好氧菌：在有氧或无氧条件下均能生长，但有氧情况下生长得更好。氧气对微生物生长的影响专性好氧菌：必须在有较高的氧浓度条件下才能生长。微好氧菌：只63耐氧菌：可在分子氧存在下进行厌氧生活的厌氧菌。生活不需要氧，分子氧也对它无毒害。厌氧菌：分子氧对它有毒害，短期接触空气，也会抑制其生长甚至致死；在空气中，固体培养基表面上不能生长，只有在其深层的无氧或低氧化还原电势的环境下才能生长耐氧菌：可在分子氧存在下进行厌氧生活的厌氧菌。生活不需要氧，64在培养不同类型的微生物时，要采用相应的措施保证不同微生物的生长。培养好氧微生物：需震荡或通气，保证充足的氧气。

好氧活性污泥工艺中，要保持溶解氧浓度≥2mg/l培养专性厌氧微生物：需排除环境中的氧气。培养兼性厌氧或耐氧微生物：可深层静止培养。供氧或隔氧一般措施在培养不同类型的微生物时，要采用相应的措施保证不同微生物的生65习题是微生物需要的，但又不能自己分成的微量有机物质。微生物需要的营养物质有:________、_______、__________、和。微生物的生长繁殖除了需要营养外，还需要一些合适的培养条件：、、和。实验室常用的碳源有

和__

_等，常用的有机氮源有__

__和__

等，无机氮源有__

__和

等。习题是微生物需要的，但又不能自己分成的微量有机66习题下面哪项不属于生长因子（）

A．维生素B。氨基酸

C。硫酸盐D。核苷酸下列属于微量元素的是（）

A：C、H、O

B：Ca.、Mg

C.：Zn.Cu

D：P.、S常用来进行菌种分离鉴定的培养基是（）Ａ固体培养基Ｂ液体培养基

Ｃ半固体培养基

习题下面哪项不属于生长因子（）

A．维生素67微生物需要的营养物质有很多，但以下哪一种是不需要的？（）

A、水B、无机盐

C、琼脂D、生长因子下面哪种培养基适合放线菌生长：（）

A、生肉膏蛋白胨B、麦芽汁琼脂C、高氏一号培养基D、伊红美培养基微生物需要的营养物质有很多，但以下哪一种是不需要的？（）68实验六土壤中特定功能微生物的富集和分离纯化方法理论讲解：土壤中微生物分布特点；土壤中微生物的富集和纯化方法；特定功能微生物的种类和富集方法；实验六土壤中特定功能微生物的富集和分离纯化方法理论讲解：69土壤微生物的种类、数量和分布土壤微生物的种类和数量；细菌最多，其次是放线菌和真菌，藻类和原生动物数量最少

土壤微生物的作用

转化土壤中各种物质的状态、改变土壤的理化性质，是构成土壤肥力的重要因素；

是土壤自净作用的基础，也是土壤修复的主力军；

土壤微生物的种类、数量和分布土壤微生物的种类和数量；70土壤微生物的分布状况土壤微生物的水平分布在油田存在较多分解石油的微生物；林区存在较多分解纤维素的微生物；果园土则含有较多的酵母菌

土壤微生物的垂直分布

表土微生物数量少，在5—20cm的土层中微生物数量最多，再往深处则又减少

土壤微生物的分布状况土壤微生物的水平分布71土壤中微生物富集纯化的意义

土壤是微生物生活最适宜的环境、它具有微生物所需要为一切营养物质和微生物进行生长繁殖及生存的各种条件．所以土壤中微生物的数量和种类都很多。它们参与土壤的氮、碳、硫、磷等元素的循环作用。此外，土壤中微生物的活动对土壤形成、土壤肥力和作物生产都有非常重要的作用。因此，查明土壤中微生物的数量和组成情况，从土壤中分离出特定功能的微生物，对发掘土壤微生物资源和对土壤微生物实行定向控制无疑是十分必要的。土壤中微生物富集纯化的意义土壤是微生物生活最适宜的环境72实验六

土壤中特定功能微生物的富集和纯化实验六73一、实验目的：1.进一步熟练和掌握培养基的配制和分装、灭菌等技术。2、了解固氮菌和纤维素分解菌的培养基组成特点；了解从土壤中分离纯化特定功能微生物的方法和操作过程。

一、实验目的：1.进一步熟练和掌握培养基的配制和分装、灭菌74（第1、2排）固氮菌培养基（1L水）

葡萄糖

15.0gK2HPO40.5gMgS040.2gCaSO40.1gNaCl0.2gCaCO35.0gpH7--8如需要做固体培养基，所加琼脂含氮量低为好。（第1、2排）固氮菌培养基（1L水）葡萄糖75（第3、4排）

固氮菌培养基（1L水）

甘露糖醇

15.0gK2HPO40.5gMgS040.2gCaSO40.1gNaCl0.2gCaCO35.0gpH7--8（第3、4排）固氮菌培养基（1L水）甘露糖醇76平板上固氮菌的富集培养程序1、用已灭菌后冷却至50oC左右的阿斯毕培养基倒成平板。2、用已灭菌的镊子将黄豆粒大的菜园土摆入已冷凝的平板培养基上。3、正面放置培养箱中培养，28oC培养3~4天后，在土粒周围有混浊半透明的胶状菌落出现，有的在后期会产生褐色的色素。第一排、第三排做固体平板上的固氮菌富集。平板上固氮菌的富集培养程序1、用已灭菌后冷却至50oC左右的77液体培养基中固氮菌的富集将配制好的无氮液体培养基，分装于100ml的三角瓶中，每瓶装30ml，灭菌冷却后，各接种少许土壤，于28--30度下培养约7天，在液面可见到灰白色菌膜，慢慢会变为黑褐色。取液面菌膜制片，镜检。并对菌液做进一步的分离纯化。第二排、第四排做液体培养基中的固氮菌富集。液体培养基中固氮菌的富集将配制好的无氮液体培养基，分装于1078（第