中山市新生儿听力筛查联合耳聋基因检测结果分析

中山市新生儿听力筛查联合耳聋基因检测结果分析熊怡;钟梅;李欣;陈文强;黄湘;张艳芳;唐海深【摘要】目的探讨中山市新生儿听力筛查与耳聋基因检测联合筛查在新生儿听力2015920162906906,434.75(43/906).其中,31GJB2(31/906);7SLC26A40.77％(7/906);212SrRNA0.22％(2/906);3GJB30.33％(3/906)80488.74(804/906)10258301411.26％(102/906);8942933804334.10％(33/804)102109.80％(10/102)63【期刊名称】《妇产与遗传（电子版）》【年(卷),期】2016(006)001【总页数】5页(P25-29)【关键词】婴儿,新生;耳聋;基因突变;基因芯片;听力筛查【作者】熊怡;钟梅;李欣;陈文强;黄湘;张艳芳;唐海深【作者单位】510515广州,南方医科大学南方医院妇产科;中山市博爱医院;510515广州,南方医科大学南方医院妇产科;中山市博爱医院;中山市博爱医院;中山市博爱医院;中山市博爱医院;中山市博爱医院【正文语种】中文【中图分类】R764.43婴幼儿早期的听力损失，若不及时干预或治疗可导致明显的或永久的功能障碍，从而由聋致哑严重影响生活质量[1]。新生儿听力筛查为全国新生儿重点筛查三大疾病之一，为了更好地在全国范围内开展新生儿听力筛查工作，2010年卫生部颁布了《新生儿听力筛查技术规范》，旨在尽早发现有听力障碍的个体，并及时给予适当干预，避免由聋致哑[2-3]。目前，新生儿听力筛查的物理方法主要为耳声发射(evokedotoacousticemission，EOAE)和脑干诱发电位(auditorybrainstemrespons，ABR)。随着新生儿听力筛查工作的深入进行，单纯听力筛查在应用中的局限性也逐渐被发现。临床中发现，并非所有患儿出生后立即表现出来听力损失，如SLC26A4基因突变引起的迟发性听力损失、线粒体DNA12SrRNA200010%～20%的迟发性和进行性听力损失将漏诊[4]。2007[5]，即在传统听3d采集新生儿脐带血或足跟血对耳聋易感基因进行筛查。近年来，新生儿耳聋基因检测和听力联合筛查越来越被医学界所关注。9064GJB3SLC26A4DNA12SrRNA9片检测在对非综合征性耳聋出生缺陷三级预防中的有效性。资料与方法2015920162906489417二、研究材料与方法EDTA2～3mLDNADNADNA、溶解DNADNADNADNA200ng/LOD(260nm/280nm)1.8～2.0，可置于-80℃保存备用。耳聋基因突变检测：按照耳聋基因突变检测芯片试剂盒(北京博奥生物)的操作说49235delC299delAT)、GJB3(538C>T)、SLC26A4(IVS7-2A>G2168A>GDNA12SrRNA(A1555G，1494C>T)。PCRPCRA、BAA112.5μl，试剂混合物A24.5μl，DNA3.0μl，总反应体系为20μl。配制B反应体系：引物混合物B112.5μl，试剂混合物B24.5μl，基因组DNA3.0μl，总反应体系为20μl。扩增反应条件：3710min，9515min，961min，后预变性，再94℃30s，55℃30s，70℃45s共32个循环，最后60℃10min完成扩增。其中94℃降至55℃时下降速率为0.4℃/s，55℃降至70℃时上升速率为0.2℃/sPCR95℃5min3min；从同A、B2.5μlPCR10μl50℃1h。42℃洗2min42℃2min，洗21200rpm2minLuxScanTM10K/B90532nm听力筛查EOAE测试：初次筛查在安静的妇产科病房床边。每次均在新生儿吃过奶处于安静或自然睡眠状态时进行。耳用棉签常规清洁耳道，以防外耳道分泌物影响测试结果。采用德国ERO-SCAN耳声发射听力筛查仪进行检测。仪器自动显示“PASS”为通过。若出现“REFER”则为不通过。ABR测试；初筛不通过，则在出生后42天进行ABR复筛。先用95%酒精脱脂，将记录电极置于前额，参考电极放于颈后同侧耳垂内侧；极间电阻≤10kΩ，刺激声为30dBnHL的短声；刺激声相位交替，应用回旋式模板信号提取ABR的V波，V波反应阈≥30dBnHL诊断为异常。ABR检测未通过者，则行听力学评估。结果一、新生儿听力筛查结果906例新生儿中，初筛通过804例，通过率为88.74%，初筛未通过102例，其中双耳未通过58例，右耳未通过30例，左耳未通过14例，未通过率为11.26%；89例42天后进行复筛，复筛未通过9例，其中双耳未通过3例，左、右耳未通过各3例。二、新生儿耳聋基因筛查结果906例新生儿中，43例携带耳聋基因突变，总携带率为4.75%(43/906)。其中，31例为GJB2基因突变，携带率为3.42%(24/906)(GJB2235delC基因突变24例，GJB2299delAT基因突变6例，GJB2176del16基因突变1例)；7例为SLC26A4IVS7-2A>G基因杂合突变，携带率为0.77%(7/906)；2例为12SrRNAm.1555A>G突变，携带率为0.22%(2/906)；3例为GJB3538C>T基因突变，携带率为0.33%(3/906)。三、耳聋基因与听力联合筛查结果804334.10%；102109.80%；确诊具有听力障碍的患儿中，3GJB2c.235delCGJB2c.235delC，1GJB2c.235delC/299delAT1。表1耳聋基因筛查与听力筛查结果听力筛查基因筛查正常异常合计通过77130804未通过9210102合计86343906讨论本研究906例新生儿中，43例携带耳聋基因突变，阳性率为4.75%(43/906)。在43例携带耳聋基因突变中病例中，31例为GJB2基因突变，突变率为3.42%，所占比例最大，与其它研究调查发病率相近[6]。GJB2纯合突变和复合杂合突变表现为先天性耳聋，一般听力检测不能通过，我们此次研究也证实这点，3GJB2c.235delC2GJB2c.235delC1GJB2c.235delC/299delAT235delCCorti担。7例为SLC26A4基因杂合突变，6例表现为单耳不通过；经测序检测证实均为单杂合突变，但因为不排除可能携带一些罕见位点或未知位点突变，且SLC26A4基因突变导致的大前庭水管综合征，此类患者出生时可能听力正常，或伴有轻度至中重度的听力损失，新生儿临床表现不明显。所以建议随诊，可结合CT检测尽量减少漏诊。此外，此类单杂合突变者以后如与同型基因的携带者婚配，则其后代听力损失几率为1/4，因此，新生儿的耳聋基因筛查有助于获取耳聋遗传信息，对婚育指导以及提高下一代质量有重要意义。线粒体基因突变的携带者，对氨基糖甙类抗生素敏感，一旦使用氨基糖甙类抗生素可能导致或者加重耳聋，这类患者在出生时可表现为听力正常。在本研究中，2例12SrRNAm.1555A>G突变患者耳声发射检测均通过，如果按一般听力筛查，即会造成漏诊。孩子有可能因为应用氨基糖甙类药物而导致耳聋。此外，我们通过基因检测能够检出携带这种突变基因患者和家族成员，从而避免接触氨基糖甙类药物，尽可能避免耳聋的发生。此外，我们还查出3例GJB3c.538C>T基因突变患者，GJB3基因突变患者，大多表现为高频听力的散失[7]，出生时亦可表现为听力正常，本文中3例GJB3c.538C>T基因突变患者均通过听力初筛。这部分患者需要在听力中心严密监测，以防止听力的减退。GJB2GJB2、SLC26A4聋的发生。此外，并非所有耳聋都在初生时即外显，GJB23.8%～8.9%[8]。因此，在基因检测和听力联合筛查中，对检查结果的分析处理和对受检新生儿的随访十分重要[9]，我们需要详通过本次研究调查，证实利用耳聋基因芯片检测联合耳声发射对新生儿进行听力筛查，可提高对耳聋出生缺陷的检出率，同时对通过对基因筛查阳性的携带者或患儿采取早期预防和干预等措施，可有助于降低耳聋出生缺陷率、减少迟发型听力损失高危新生儿的发病率和降低患儿的听力损伤严重程度，提高母婴保健及优生优育水平，起到三级预防的作用。参考文献SagongB,BaekJI,OhSK,etal.Arapidmethodforsimultaneousscreeningofmulti-genemutationsassociatedwithhearinglossintheKoreanpopulation[J].PLoSOne,2013,8(3):57237.KorverAM,AdmiraalRJ,KantSG,etal.Causesofpermanentchildhoodhearingimpairment[J].Laryngoscope,2011,121(2):409-416.[3]MahboubiH,DwabeS,FradkinM,etal.Geneticsofhearingloss:wherearewestandingnow?[J].EurArchOtorhinolaryngol,2012,269(7):1733-1745.JointCommitteeonInfantHearing.Year2000positionstatement:principlesandguidelinesforearlyhearingdetectionandinterventionprograms[J].AmJAudiol，2000,9(1):9-29.王秋菊，赵亚丽，兰兰，等．新生儿聋病基因筛查实施方案与策略研究[J]200742(11):809-813.GJB2荟萃分析[J]201119(4)323327.XiaJH,LiuCY,TangBS,etal.Mutationsinthegeneencodinggapjunctionproteinbeta-3associatedwithautosomaldominanthearingimpairment[J].NatGene