第十九补体检测及应用课件

61、辍学如磨刀之石，不见其损，日有所亏。62、奇文共欣赞，疑义相与析。63、暧暧远人村，依依墟里烟，狗吠深巷中，鸡鸣桑树颠。64、一生复能几，倏如流电惊。65、少无适俗韵，性本爱丘山。第十九补体检测及应用第十九补体检测及应用61、辍学如磨刀之石，不见其损，日有所亏。62、奇文共欣赞，疑义相与析。63、暧暧远人村，依依墟里烟，狗吠深巷中，鸡鸣桑树颠。64、一生复能几，倏如流电惊。65、少无适俗韵，性本爱丘山。第十九补体检测及应用

第十九章补体检测及应用第一节概述一、补体成分的含量与理化特性二、补体的活化途径第二节补体总活性测定第三节单个补体成分的测定一、免疫溶血法二、免疫化学法61、辍学如磨刀之石，不见其损，日有所亏。第十九补体检测及应1第十九补体检测及应用课件2第十九补体检测及应用课件3第十九补体检测及应用课件4第十九补体检测及应用课件5分类一、补体成分的含量与理化特性根据补体系统的生物学功能，可将其分为：

补体固有成分、补体调节蛋白、补体受体(complementreceptor,CR)三大部分。分类一、补体成分的含量与理化特性根据补体系统的生物学功6补体理化性质由肝细胞、巨噬细胞以及肠粘膜上皮细胞等多种细胞产生均为多糖蛋白，大多数电泳迁移率属α、γ球蛋白含量约占血清球蛋白总量的10%，其中C3含量最高、D因子含量最低固有成份间的分子量差异较大，其中C1q最大、D因子最小。对热不稳定，56°C、30min即被灭活，0～10°C条件下活性只能保持3～4d。多种理化因素如射线、机械振荡、酒精、胆汁和某些添加剂等均可破坏补体补体理化性质由肝细胞、巨噬细胞以及肠粘膜上皮细胞等多种细胞产7补体成分分子量电泳区带血清含量参考值（μg/ml）补体成分分子量电泳区带血清含量参考值（μg/ml）C1q390γ270C979α240C1r95β35B95β210~240C1s85α35D25α2C2117β120~30P220γ225C3190β11300C1INH150α180C4180β2430~600C4bp1100250C5190β275I因子93β50C6128β260H因子159β400~480C7120β255S因子88α500C8163γ1200补体分子量电泳血清含量参考值补体分子量电泳血清含量参考值C18经典途径二、补体的活化途径经典途径二、补体的活化途径9第十九补体检测及应用课件10经典激活途径替代激活途径MBL途径激活物质抗原抗体复合物肽聚糖、酵母多糖、脂多糖MBL相关的丝氨酸蛋白酶起始分子C1qC3C2、C4参与补体成分C1、C4、C2、C3、C5-C9C3、C5-C9、B因子、D因子C2-C9、MASP所需离子Ca2+、Mg2+Mg2+Ca2+C3转化酶C4b2bC3bBbC4b2bC5转化酶C4b2b3bC3bnBbC4b2b3b生物学作用参与特异性免疫的效应阶段,感染后期发挥作用参与非特异性免疫的效应阶段,感染早期发挥作用参与非特异性免疫的效应阶段,感染早期发挥作用三种途径比较经典激活途径替代激活途径MBL途径激活物质抗原抗体复合物肽聚11第二节补体总活性测定补体总活性测定方法是以红细胞的溶解为指示，以50%溶血为判断终点，称为CH50补体活化途径不同，应用不同的激活物可活化不同的补体途径基于经典途径的CP-CH50（临床常规项目）应用于C3旁路检测的AP-CH50（尚未列入检验常规）MBL途径活性测定的可靠方法暂未建立第二节补体总活性测定补体总活性测定方法是以红细胞的溶解为指12（一）CH50测定法的原理

应用绵羊红细胞（sheepredbloodcell,SRBC）和其相应的抗体（溶血素），作为能诱导补体活化经典途径的指示物和激活剂。补体能使溶血素特异性结合的绵羊红细胞溶解，当溶血素和绵羊红细胞浓度恒定时，溶血程度与补体含量和活性相关。将新鲜待检血清作不同稀释后，加入反应体系，测定溶血程度，以50%溶血时的最小血清用量作为判定终点，可测知补体总溶血活性（一）CH50测定法的原理应用绵羊红细胞（sheepre13溶血程度与补体含量的关系

在适当、稳定的反应系统中，溶血反应与补体的剂量依赖关系呈现“S”形曲线在轻微溶血和接近完全溶血时，补体量的变化对溶血程度的影响不大，即溶血对补体量的依赖不敏感。但在30％～70%溶血时，补体含量仅出现较小的变动，溶血程度也会发生较大的改变溶血程度与补体含量的关系在适当、稳定的反应系统中，溶血反应14（二）CH50测定方法1.红细胞浓度的调整绵羊红细胞（SRBC）采自绵羊颈静脉，制备脱纤维羊血或用阿氏（Alsever）血液保存液制成抗凝血，4℃保存备用。使用前，调制成2%～5%SRBC悬液。为使红细胞浓度标准化，可吸取少量红细胞悬液，加入20～30倍的稀释液，在542nm波长处测定吸光值以调整红细胞浓度。

（二）CH50测定方法1.红细胞浓度的调整绵羊红细胞（SRB152.溶血素滴定溶血素可通过SRBC免疫家兔获得，一般无需纯化试验前需先行加热56℃30min或60℃3min以灭活补体溶血素有商品销售，可按标识效价稀释使用自行制备的溶血素需进行滴定，确定使用浓度，在补体活性测定中，大多使用2个单位。溶血素效价稳定，一般使用3个月后再作重新滴定2.溶血素滴定溶血素可通过SRBC免疫家兔获得，一般无需纯化16

3.稀释缓冲液4.50%溶血标准管

5.50%溶血总补体值的计算3.稀释缓冲液17（三）方法评价与临床意义方法简便、快速，但敏感性低，补体的活性除与反应体积成反比外，还与反应所用的缓冲液、SRBC的数量以及反应温度有关总补体活性的参考范围为50～100U/mlCH50增高见于：急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤等CH50降低见于：系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和强直性脊柱炎、急性肾小球肾炎等（三）方法评价与临床意义方法简便、快速，但敏感性低，补体的活18第三节单个补体成分的测定常作为单个补体成分的检测指标：C3、C4、C1q、B因子和C1酯酶抑制物等测定方法：免疫溶血法（检测单个补体成分的活性）免疫化学法（检测单个补体成分的含量）自动化免疫散射比浊法第三节单个补体成分的测定常作为单个补体成分的检测指标：C319一、免疫溶血法

定义:是根据补体参与抗体介导溶细胞作用的级联效应特征建立的单一补体成分检测法指示系统:以SRBC-抗SRBC为激活物和指示系统参照体系:以人为设计的缺乏某种补体成分的血清为参照结果判度:若有溶血发生，表明待检标本存在参照血清所缺乏的补体成分，且溶血程度与此补体成分的量呈正比，仍以50％溶血为终点一、免疫溶血法定义:是根据补体参与抗体介导溶细胞作用的级联20参照血清常称之“R（remove）”试剂，即去除某种补体成分之意。已能筛选到的血清有人C2缺乏、豚鼠C4缺乏、小鼠C5缺乏和家兔C6缺乏的血清免疫溶血法常用于C2、C3、C4、C5、C6等补体成分的检测。其中以C3、C4两成分的检测更为常见

参照血清常称之“R（remove）”试剂，即去除某种补体成分21二、免疫化学法免疫化学法分类1.单向免疫扩散2.火箭免疫电泳3.透射比浊法4.散射比浊法前两种方法：手工操作繁琐、耗时长、影响因素多、结果重复性差，已趋于淘汰后两种方法：通过仪器对补体的C3、C4、B因子等单个成分进行自动化测定二、免疫化学法免疫化学法分类1.单向免疫扩散22比浊法

比浊法原理

借助补体的抗原性和与相应抗体反应的前带现象建立的补体单个成分定量检测法。比浊法不足

必需以过量的某种补体相应抗体为保证

自动免疫比浊法

反映所测补体成分的绝对量可进行标准化流程管理与质量控制比浊法比浊法原理23第四节补体结合试验补体结合试验(complementfixationtest，CFT)

将免疫溶血作为指示系统，用以检测另一反应系统中抗原或抗体的传统方法。第四节补体结合试验补体结合试验(complementfi24一、试验原理作用原理：利用补体的溶细胞作用进行各种物理状态的抗原抗体测定5种成分，3个系统反应系统：已知抗原（或抗体）与待测抗体（或抗原）补体系统指示系统：SRBC与相应溶血素。试验时常将其预先结合，成为致敏绵羊红细胞（sensitizedsheepredbloodcell,SRBCS）。一、试验原理作用原理：利用补体的溶细胞作用进行各种物理状态的25反应分两步进行

第一步:反应系统与补体的作用

第二步:指示系统利用剩余补体的反应不溶血为补体结合试验阳性，而溶血为试验阴性反应分两步进行不溶血为补体结合试验阳性，而溶血为试验阴性26（一）.试剂的准备二、补体结合试验方法1.抗原或抗体用于试验的抗原或抗体:

需要纯化纯度愈高，特异性愈强抗原与抗体比例适当:

确定抗原或抗体相应的使用单位采用方阵或棋盘法进行抗原与抗体滴定（一）.试剂的准备二、补体结合试验方法1.抗原或抗体27由于该试验基于指示和试验两对抗原抗体系统竞争补体因此，补体必须恒量，且以满足指示系统的溶血为度，过多会导致假阴性，而过少则引起假阳性。

2.补体采用豚鼠血清为补体对补体进行滴定和确定其用量，以能产生完全溶血的最少补体用量为1个实用单位正式试验时使用2个实用单位补体的性质不稳定，每次试验前均应进行滴定由于该试验基于指示和试验两对抗原抗体系统竞争补体2.补体采用28血清标本遇有抗补体现象时，可作下列处理：加热灭活时提高12℃－20℃冻融后离心去沉淀以3mmol/L盐酸处理加入少量补体后再行灭活以白陶土处理通入CO2以小白鼠肝粉处理用含10％新鲜鸡蛋清的生理盐水稀释血清3.待测标本采血并及时分离血清用于检测或－20℃保存备用。试验前，应先将血清56℃加热30min（或60℃3min）以灭活补体。血清标本遇有抗补体现象时，3.待测标本采血并及时分离血清用于29（二）正式试验

分类:小量法、微量法，以小量法常用

实验过程:稀释和处理后的标本与已知抗原或抗体、不同含量的补体温育与指示系统共育结果判度:对照管:

阴性对照管:溶血阳性对照管:不溶血抗体或抗原对照管:完全溶血待检血清对照管:完全溶血绵羊红细胞对照管:不出现自发性溶血（二）正式试验分类:小量法、微量法，以小量法常用30补体对照管：受检血清

阳性:不溶血阴性:溶血注意:

若上述各对照管不出现预期结果，则试验结果不可靠，其可能原因应根据出错的对照管进行分析。

2个单位:全溶1个单位:全溶或略带少许红细胞0.5个单位:不发生溶血2个单位:全溶31三、方法评价

优点灵敏度高、所测定的抗体水平可达0.05μg/ml，出现交叉反应的机率较小，可检测的抗原或抗体范围广泛，无需特殊设备、结果容易观察、试验条件要求不高现状影响的因素多、各种制剂需要烦琐的稀释和滴定等，现代化、自动化抗原抗体检测方法的不断涌现，补体结合试验逐渐被遗弃补体结合试验作为一种经典的免疫方法类型，其设计和原理仍对新型免疫方法的建立有着启迪和指导作用

三、方法评价优点32第五节补体受体的测定补体受体：

存在于多种细胞清除免疫复合物、净化机体内环境检测补体受体，有助于判断机体抗感染能力和计数相应的细胞数量第五节补体受体的测定补体受体：33补体受体目前已知的补体受体归为以下五类：CR1（CD35）

CR2（CD21）CR3（CD11b/CD18）CR4(gp150/95，CD11c/18)C3aR/C5aR补体受体目前已知的补体受体归为34名称别名CD分类配体细胞分布CR1C3b受体，C4B/C3b受体CD35iC3b、C3b，C4b、iC4b，C3c红细胞、中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、B细胞、树突状细胞、肾小球上皮细胞CR2C3d受体，EB病毒受体CD21iC3b、C3dg、C3d、EB病毒、IFN-αB细胞、树突状细胞CR3iC3b受体、Mac-1抗原CD11b/CD18iC3b、植物凝集素、某些细胞多糖中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、NK细胞CR4gp150/95CD11C/CD18iC3b、C3d、C3dg中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、血小板C5aR/C3aRCD88C5a/C3a(活化G蛋白)内皮细胞、肥大细胞、吞噬细胞补体受体特性名称别名CD分类配体细胞分布CR135第六节补体测定的应用补体相关试验：

诊断梅毒螺旋体感染的华氏反应（已淘汰）HLA分型的补体依赖性细胞毒试验抗原抗体检测的脂质体免疫试验、免疫粘连血凝试验抗体形成细胞定量检测的溶血空白斑技术免疫复合物测定的胶固素结合试验和C1q结合试验第六节补体测定的应用补体相关试验：36应用于补体含量和活性检测的试验

AP-CH50和AP-H50试验:反映总补体活性

溶血试验

免疫化学试验

免疫荧光技术检测补体单个成分及其裂解产物（C1q、C3SP、C3、C4、B因子等）和补体受体应用于补体含量和活性检测的试验检测补体单个成分及其裂解产物（37(图)血管神经性水肿补体含量和活性相关的疾病1．免疫相关性疾病：如自身免疫性疾病时，C1、C2、C3、C4和Hf等缺陷；超敏反应时（III型超敏反应），C3a、C5a等过敏毒素的产生。2．与补体有关的遗传性疾病：

①C2、C3缺陷导致的严重感染；

②与C1抑制物缺陷相关的遗传性血管神经性水肿

③SLE患者出现的细胞表面CR1缺陷与C1C清除障碍

④涉及I因子、H因子缺陷的肾小球肾炎；

⑤DAF缺陷引起的阵发性血红蛋白尿；

⑥C1q缺陷表现的严重顽固性皮肤损害，以及C1q、C1r、C4、C2缺陷造成的免疫复合物性血管炎（包括肾炎）等。(图)血管神经性水肿(图)血管神经性水肿补体含量和活性相关的疾病1．免疫相关性疾383．补体含量显著降低的疾病：①消耗增多:免疫复合物形成导致的补体活化和消耗增多.如SLE.②补体的大量丢失:主要见于大面积烧伤、失血及肾脏病患者③补体合成不足:常见于肝脏疾病患者或营养不良的病人。4．高补体血症：偶见于感染恢复期和某些恶性肿瘤患者，正常妊娠时，也可观察到补体值的增高。第十九补体检测及应用课件391.已知补体的活化有三条途径，试述三条激活途径有何不同？2.试述补体在抗感染免疫中有何作用？3.补体有30余种成分，各自的作用不同但相互联系，补体的网络系统中起关键作用的成分是哪几个？4.补体在参与机体免疫系统效应中发挥的主要作用是什么？5.应用补体检测抗原抗体的方法有几种？有无你认为可以建立但尚无人提及的？思考题1.已知补体的活化有三条途径，试述三条激活途径有何不同？思考406.补体在参与人类疾病的病理损伤中发挥什么作用？7.机体的免疫损伤或炎症多发生于什么情况下？损伤的机制是什么？8.试比较各种补体检测方法的优缺点和如何进行临床应用选择？9.补体缺陷所表现的主要临床特征是什么？10.补体的主要理化特点是什么？6.补体在参与人类疾病的病理损伤中发挥什么作用？41小结补体是重要的参与固有免疫的可溶性球蛋白分子，同时有助于特异性抗体产生后效应的发挥，可有效地清除机体的可溶性免疫复合物，发挥彻底排除异物的功效。与此同时，也可通过清除抗原抗体反应形成于组织或细胞膜上的复合物，造成炎症损伤，参与疾病的形成过程。补体清除可溶性免疫复合物，与补体的溶细胞作用和调理吞噬作用的发挥相关。补体的检测，主要是根据补体的抗原性和溶细胞活性设计的。补体检测的方法涉及总补体活性的测定和单个补体成分的检测，其中总补体活性测定，在临床应用广泛者当数经典途径的CH50检测法；而单个补体成分检测则包括溶血法与免疫化学法，后者可用于定量测定。小结补体是重要的参与固有免疫的可溶性球蛋白分子，同时有助于特426、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎

7、自知之明是最难得的知识。——西班牙

8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加

9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯

10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿Thankyou拯畏怖汾关炉烹霉躲渠早膘岸缅兰辆坐蔬光膊列板哮瞥疹傻俘源拯割宜跟三叉神经痛-治疗三叉神经痛-治疗6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺4361、辍学如磨刀之石，不见其损，日有所亏。62、奇文共欣赞，疑义相与析。63、暧暧远人村，依依墟里烟，狗吠深巷中，鸡鸣桑树颠。64、一生复能几，倏如流电惊。65、少无适俗韵，性本爱丘山。第十九补体检测及应用第十九补体检测及应用61、辍学如磨刀之石，不见其损，日有所亏。62、奇文共欣赞，疑义相与析。63、暧暧远人村，依依墟里烟，狗吠深巷中，鸡鸣桑树颠。64、一生复能几，倏如流电惊。65、少无适俗韵，性本爱丘山。第十九补体检测及应用

第十九章补体检测及应用第一节概述一、补体成分的含量与理化特性二、补体的活化途径第二节补体总活性测定第三节单个补体成分的测定一、免疫溶血法二、免疫化学法61、辍学如磨刀之石，不见其损，日有所亏。第十九补体检测及应44第十九补体检测及应用课件45第十九补体检测及应用课件46第十九补体检测及应用课件47第十九补体检测及应用课件48分类一、补体成分的含量与理化特性根据补体系统的生物学功能，可将其分为：

补体固有成分、补体调节蛋白、补体受体(complementreceptor,CR)三大部分。分类一、补体成分的含量与理化特性根据补体系统的生物学功49补体理化性质由肝细胞、巨噬细胞以及肠粘膜上皮细胞等多种细胞产生均为多糖蛋白，大多数电泳迁移率属α、γ球蛋白含量约占血清球蛋白总量的10%，其中C3含量最高、D因子含量最低固有成份间的分子量差异较大，其中C1q最大、D因子最小。对热不稳定，56°C、30min即被灭活，0～10°C条件下活性只能保持3～4d。多种理化因素如射线、机械振荡、酒精、胆汁和某些添加剂等均可破坏补体补体理化性质由肝细胞、巨噬细胞以及肠粘膜上皮细胞等多种细胞产50补体成分分子量电泳区带血清含量参考值（μg/ml）补体成分分子量电泳区带血清含量参考值（μg/ml）C1q390γ270C979α240C1r95β35B95β210~240C1s85α35D25α2C2117β120~30P220γ225C3190β11300C1INH150α180C4180β2430~600C4bp1100250C5190β275I因子93β50C6128β260H因子159β400~480C7120β255S因子88α500C8163γ1200补体分子量电泳血清含量参考值补体分子量电泳血清含量参考值C151经典途径二、补体的活化途径经典途径二、补体的活化途径52第十九补体检测及应用课件53经典激活途径替代激活途径MBL途径激活物质抗原抗体复合物肽聚糖、酵母多糖、脂多糖MBL相关的丝氨酸蛋白酶起始分子C1qC3C2、C4参与补体成分C1、C4、C2、C3、C5-C9C3、C5-C9、B因子、D因子C2-C9、MASP所需离子Ca2+、Mg2+Mg2+Ca2+C3转化酶C4b2bC3bBbC4b2bC5转化酶C4b2b3bC3bnBbC4b2b3b生物学作用参与特异性免疫的效应阶段,感染后期发挥作用参与非特异性免疫的效应阶段,感染早期发挥作用参与非特异性免疫的效应阶段,感染早期发挥作用三种途径比较经典激活途径替代激活途径MBL途径激活物质抗原抗体复合物肽聚54第二节补体总活性测定补体总活性测定方法是以红细胞的溶解为指示，以50%溶血为判断终点，称为CH50补体活化途径不同，应用不同的激活物可活化不同的补体途径基于经典途径的CP-CH50（临床常规项目）应用于C3旁路检测的AP-CH50（尚未列入检验常规）MBL途径活性测定的可靠方法暂未建立第二节补体总活性测定补体总活性测定方法是以红细胞的溶解为指55（一）CH50测定法的原理

应用绵羊红细胞（sheepredbloodcell,SRBC）和其相应的抗体（溶血素），作为能诱导补体活化经典途径的指示物和激活剂。补体能使溶血素特异性结合的绵羊红细胞溶解，当溶血素和绵羊红细胞浓度恒定时，溶血程度与补体含量和活性相关。将新鲜待检血清作不同稀释后，加入反应体系，测定溶血程度，以50%溶血时的最小血清用量作为判定终点，可测知补体总溶血活性（一）CH50测定法的原理应用绵羊红细胞（sheepre56溶血程度与补体含量的关系

在适当、稳定的反应系统中，溶血反应与补体的剂量依赖关系呈现“S”形曲线在轻微溶血和接近完全溶血时，补体量的变化对溶血程度的影响不大，即溶血对补体量的依赖不敏感。但在30％～70%溶血时，补体含量仅出现较小的变动，溶血程度也会发生较大的改变溶血程度与补体含量的关系在适当、稳定的反应系统中，溶血反应57（二）CH50测定方法1.红细胞浓度的调整绵羊红细胞（SRBC）采自绵羊颈静脉，制备脱纤维羊血或用阿氏（Alsever）血液保存液制成抗凝血，4℃保存备用。使用前，调制成2%～5%SRBC悬液。为使红细胞浓度标准化，可吸取少量红细胞悬液，加入20～30倍的稀释液，在542nm波长处测定吸光值以调整红细胞浓度。

（二）CH50测定方法1.红细胞浓度的调整绵羊红细胞（SRB582.溶血素滴定溶血素可通过SRBC免疫家兔获得，一般无需纯化试验前需先行加热56℃30min或60℃3min以灭活补体溶血素有商品销售，可按标识效价稀释使用自行制备的溶血素需进行滴定，确定使用浓度，在补体活性测定中，大多使用2个单位。溶血素效价稳定，一般使用3个月后再作重新滴定2.溶血素滴定溶血素可通过SRBC免疫家兔获得，一般无需纯化59

3.稀释缓冲液4.50%溶血标准管

5.50%溶血总补体值的计算3.稀释缓冲液60（三）方法评价与临床意义方法简便、快速，但敏感性低，补体的活性除与反应体积成反比外，还与反应所用的缓冲液、SRBC的数量以及反应温度有关总补体活性的参考范围为50～100U/mlCH50增高见于：急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤等CH50降低见于：系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和强直性脊柱炎、急性肾小球肾炎等（三）方法评价与临床意义方法简便、快速，但敏感性低，补体的活61第三节单个补体成分的测定常作为单个补体成分的检测指标：C3、C4、C1q、B因子和C1酯酶抑制物等测定方法：免疫溶血法（检测单个补体成分的活性）免疫化学法（检测单个补体成分的含量）自动化免疫散射比浊法第三节单个补体成分的测定常作为单个补体成分的检测指标：C362一、免疫溶血法

定义:是根据补体参与抗体介导溶细胞作用的级联效应特征建立的单一补体成分检测法指示系统:以SRBC-抗SRBC为激活物和指示系统参照体系:以人为设计的缺乏某种补体成分的血清为参照结果判度:若有溶血发生，表明待检标本存在参照血清所缺乏的补体成分，且溶血程度与此补体成分的量呈正比，仍以50％溶血为终点一、免疫溶血法定义:是根据补体参与抗体介导溶细胞作用的级联63参照血清常称之“R（remove）”试剂，即去除某种补体成分之意。已能筛选到的血清有人C2缺乏、豚鼠C4缺乏、小鼠C5缺乏和家兔C6缺乏的血清免疫溶血法常用于C2、C3、C4、C5、C6等补体成分的检测。其中以C3、C4两成分的检测更为常见

参照血清常称之“R（remove）”试剂，即去除某种补体成分64二、免疫化学法免疫化学法分类1.单向免疫扩散2.火箭免疫电泳3.透射比浊法4.散射比浊法前两种方法：手工操作繁琐、耗时长、影响因素多、结果重复性差，已趋于淘汰后两种方法：通过仪器对补体的C3、C4、B因子等单个成分进行自动化测定二、免疫化学法免疫化学法分类1.单向免疫扩散65比浊法

比浊法原理

借助补体的抗原性和与相应抗体反应的前带现象建立的补体单个成分定量检测法。比浊法不足

必需以过量的某种补体相应抗体为保证

自动免疫比浊法

反映所测补体成分的绝对量可进行标准化流程管理与质量控制比浊法比浊法原理66第四节补体结合试验补体结合试验(complementfixationtest，CFT)

将免疫溶血作为指示系统，用以检测另一反应系统中抗原或抗体的传统方法。第四节补体结合试验补体结合试验(complementfi67一、试验原理作用原理：利用补体的溶细胞作用进行各种物理状态的抗原抗体测定5种成分，3个系统反应系统：已知抗原（或抗体）与待测抗体（或抗原）补体系统指示系统：SRBC与相应溶血素。试验时常将其预先结合，成为致敏绵羊红细胞（sensitizedsheepredbloodcell,SRBCS）。一、试验原理作用原理：利用补体的溶细胞作用进行各种物理状态的68反应分两步进行

第一步:反应系统与补体的作用

第二步:指示系统利用剩余补体的反应不溶血为补体结合试验阳性，而溶血为试验阴性反应分两步进行不溶血为补体结合试验阳性，而溶血为试验阴性69（一）.试剂的准备二、补体结合试验方法1.抗原或抗体用于试验的抗原或抗体:

需要纯化纯度愈高，特异性愈强抗原与抗体比例适当:

确定抗原或抗体相应的使用单位采用方阵或棋盘法进行抗原与抗体滴定（一）.试剂的准备二、补体结合试验方法1.抗原或抗体70由于该试验基于指示和试验两对抗原抗体系统竞争补体因此，补体必须恒量，且以满足指示系统的溶血为度，过多会导致假阴性，而过少则引起假阳性。

2.补体采用豚鼠血清为补体对补体进行滴定和确定其用量，以能产生完全溶血的最少补体用量为1个实用单位正式试验时使用2个实用单位补体的性质不稳定，每次试验前均应进行滴定由于该试验基于指示和试验两对抗原抗体系统竞争补体2.补体采用71血清标本遇有抗补体现象时，可作下列处理：加热灭活时提高12℃－20℃冻融后离心去沉淀以3mmol/L盐酸处理加入少量补体后再行灭活以白陶土处理通入CO2以小白鼠肝粉处理用含10％新鲜鸡蛋清的生理盐水稀释血清3.待测标本采血并及时分离血清用于检测或－20℃保存备用。试验前，应先将血清56℃加热30min（或60℃3min）以灭活补体。血清标本遇有抗补体现象时，3.待测标本采血并及时分离血清用于72（二）正式试验

分类:小量法、微量法，以小量法常用

实验过程:稀释和处理后的标本与已知抗原或抗体、不同含量的补体温育与指示系统共育结果判度:对照管:

阴性对照管:溶血阳性对照管:不溶血抗体或抗原对照管:完全溶血待检血清对照管:完全溶血绵羊红细胞对照管:不出现自发性溶血（二）正式试验分类:小量法、微量法，以小量法常用73补体对照管：受检血清

阳性:不溶血阴性:溶血注意:

若上述各对照管不出现预期结果，则试验结果不可靠，其可能原因应根据出错的对照管进行分析。

2个单位:全溶1个单位:全溶或略带少许红细胞0.5个单位:不发生溶血2个单位:全溶74三、方法评价

优点灵敏度高、所测定的抗体水平可达0.05μg/ml，出现交叉反应的机率较小，可检测的抗原或抗体范围广泛，无需特殊设备、结果容易观察、试验条件要求不高现状影响的因素多、各种制剂需要烦琐的稀释和滴定等，现代化、自动化抗原抗体检测方法的不断涌现，补体结合试验逐渐被遗弃补体结合试验作为一种经典的免疫方法类型，其设计和原理仍对新型免疫方法的建立有着启迪和指导作用

三、方法评价优点75第五节补体受体的测定补体受体：

存在于多种细胞清除免疫复合物、净化机体内环境检测补体受体，有助于判断机体抗感染能力和计数相应的细胞数量第五节补体受体的测定补体受体：76补体受体目前已知的补体受体归为以下五类：CR1（CD35）

CR2（CD21）CR3（CD11b/CD18）CR4(gp150/95，CD11c/18)C3aR/C5aR补体受体目前已知的补体受体归为77名称别名CD分类配体细胞分布CR1C3b受体，C4B/C3b受体CD35iC3b、C3b，C4b、iC4b，C3c红细胞、中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、B细胞、树突状细胞、肾小球上皮细胞CR2C3d受体，EB病毒受体CD21iC3b、C3dg、C3d、EB病毒、IFN-αB细胞、树突状细胞CR3iC3b受体、Mac-1抗原CD11b/CD18iC3b、植物凝集素、某些细胞多糖中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、NK细胞CR4gp150/95CD11C/CD18iC3b、C3d、C3dg中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、血小板C5aR/C3aRCD88C5a/C3a(活化G蛋白)内皮细胞、肥大细胞、吞噬细胞补体受体特性名称别名CD分类配体细胞分布CR178第六节补体测定的应用补体相关试验：

诊断梅毒螺旋体感染的华氏反应（已淘汰）HLA分型的补体依赖性细胞毒试验抗原抗体检测的脂质体免疫试验、免疫粘连血凝试验抗体形成细胞定量检测的溶血空白斑技术免疫复合物测定的胶固素结合试验和C1q结合试验第六节补体测定的应用补体相关试验：79应用于补体含量和活性检测的试验

AP-CH50和AP-H50试验:反映总补体活性

溶血试验

免疫化学试验

免疫荧光技术检测补体单个成分及其裂解产物（C1q、C3SP、C3、C4、B因子等）和补体受体应用于补体含量和活性检测的试验检测补体单个成分及其裂解产物（80(图)血管神经性水肿补体含量和活性相关的疾病1．免疫相关性疾病：如自身免疫性疾