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专题5蛋白质技术第74天时间：____月____日1.血红蛋白的提取和分离一般分为四步：样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定。如图所示：2．第一步样品处理的注意事项：(1)洗涤红细胞(用生理盐水洗涤的目的：去除杂蛋白)→①柠檬酸钠的作用：防止血液凝固；②低速短时离心的作用：防止________________沉淀；③缓慢搅拌的目的是：防止红细胞破裂。④洗涤干净的标志是：离心后上清液中________。(2)释放血红蛋白→①蒸馏水的作用：使红细胞大量吸水胀裂；②加入甲苯的作用：溶解红细胞的细胞膜；③充分搅拌的目的：________________。(3)________血红蛋白溶液→①2000r/min离心10min：从上到下第三层红色透明为血红蛋白溶液；②滤纸过滤除去脂溶性沉淀层；③分液漏斗内静置，分出下层红色透明液。(P64)3．第二步粗分离的注意事项：(1)透析膜：是________，蛋白质是大分子，它不能透过透析膜，而小分子物质可以自由通过透析膜与周围的缓冲溶液进行溶质交换，进入到透析液。(2)1mL血红蛋白溶液装入透析袋中，再置于____________中透析12h。(3)磷酸缓冲液的作用：________________________________________。(P65)4．第三步________的注意事项：(1)纯化方法：____________，又称为____________。(2)原理：根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。分子量较小的蛋白质进入凝胶内部，路程长、移动速度慢。分子量较大的蛋白质在凝胶外移动，路程短、移动速度快。(3)纯化的步骤：①凝胶色谱柱的制作；②凝胶色谱柱的填装；③样品的加入和洗脱。(P67)【注意】1.色谱柱填装时色谱柱中不能有气泡，因为会扰乱________________；2.色谱柱制作成功的标志是________________________。5．第四步纯度鉴定的注意事项：(1)纯度鉴定方法：___________________________________________。(2)原理：在蛋白质样品加到凝胶上后，接通电源，所有SDS－蛋白质复合物都向着阳极迁移。大的蛋白质会遇到更多的阻力，因此________________________________。凝胶通过染色(常用的考马斯亮蓝染料)出现不同蛋白带，蛋白带越靠前的蛋白质分子量越小。(3)SDS的作用：使蛋白质解成单链；消除蛋白质自身净电荷对迁移速度的影响。(P69)答案(1)白细胞和淋巴细胞没有黄色(2)加速红细胞的破裂(3)分离3.(1)半透膜(2)磷酸缓冲液(3)调节pH，避免pH变化引起蛋白质结构改变4.纯化(1)凝胶色谱法分配色谱法(

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