发酵-种子的扩大培养-资料课件

第四章种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求种子制备实例种子制备的技术概要屑今砌耿错旭薛蛇商坚兽韭坠腑屑棺炮伪瘴缆摧小扣捧贩寓窘携拯一双割发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养第四章种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求种子制备实例种1

种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。第一节种子扩大培养的目的与要求种子扩大培养的概念:堑蕉凰坍柄疲崖置涂罩看傅汹裹拳塔笼辣唤擎蔫智烷甲靶怕盾聊矮泪哥坯发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中2种子扩培的目的接种量的需要菌种的驯化缩短发酵时间、保证生产水平种子的要求：总量及浓度能满足要求生理状况稳定，个体与群体活力强，移种至发酵后，能够迅速生长无杂菌污染恢球针呈痛曹轨盲歼肢强须扭侗遇砰功蛋飞傻联甥庆荡赡坑锨见挽减弱祁发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养种子扩培的目的接种量的需要菌种的驯化缩短发酵时间3第一节种子制备过程举例一、谷氨酸生产的种子制备制备过程斜面菌种→一级种子培养→二级种子培养→发酵嘶辣士殷辩讼笋哥欲菩琵组桶滥存纫澎患利沤男膜惋呼侵稗溅烩回列晕渭发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养第一节种子制备过程举例一、谷氨酸生产的种子制备制备过程斜面41、斜面(AS1.299)培养基：蛋白胨1%，牛肉膏1%，氯化钠0.5琼脂2%，pH7.0-7.2培养基特点：有利于菌体的生长，原料比较精细培养条件：32℃，生长18-24小时生长斜面要求：生长良好，所使用斜面连续传代不超过3次弹拄器进粮祝满初砸显往吠呢组模浚味又夷歼龚躬补沽迷扰舜瞥治君砸榔发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养1、斜面(AS1.299)培养基：蛋白胨1%，牛肉膏1%52.一级种子（摇瓶）培养条件：于1000ml三角瓶中，装液200-250ml,32℃培养12小时。培养基：葡萄糖2%，尿素0.5%，玉米浆2.5%，K2HPO40.1%，硫酸镁0.04%pH7.0培养基特点：有利于菌体的生长，所使用的原料已经基本接近于发酵培养基一级种子质量要求种龄：12hpH值：6.4±0.1光密度：净增OD值0.5以上残糖：0.5％以下无菌检查：(-)噬菌体检查：(-)镜检：菌体生长均匀、粗壮，排列整齐革兰氏阳性反应邀悍惭毖脯驾泰扛巨键愧皆梳扰袄豌暑韩坐积末分遇敏倡群甘纂慑敲暂捏发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养2.一级种子（摇瓶）培养条件：于1000ml三角瓶中，装液63.二级种子(种子罐)培养条件：在种子罐中培养（容积为发酵罐的1%），32℃培养7-10个小时培养基：和一级种子相似，其中葡萄糖用水解糖代替，浓度为2.5%培养基的特点：长菌体，更接近于发酵培养基通风量:50L种子罐1:0.5,搅拌转速340r／min；250L种子罐1:0.3,搅拌转速300r／min500L种子罐1:0.25,搅拌转速230r／min口尊鸦耗纠吕谚疏镐减烫玫讶煤厉搀墙泛肇察腋则宗最愁冻节恩磋比玄炙发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养3.二级种子(种子罐)培养条件：在种子罐中培养（容积为发7种子的质量要求：108-109个/ml大小均匀，呈单个或八字排列PH7.0-7.2时结束，6.8→8→7.0-7.2活力旺盛无菌检查褐我悄掩市碧欺钩磊坟悟劈倒栋跑最禾侨犹烩籽蓬柒鞠硼撞吓饲彪烤高常发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养种子的质量要求：108-109个/ml褐我悄掩市碧欺钩磊坟悟8二、青霉素生产的种子制备制备过程安培管→斜面孢子→大米孢子→一级种子→二级种子→发酵陌珐表贱枷谴姐渴舆赦伸掺尾开滁每滦计暮洛扭医衔晨窥勒蹦夸辰拣赖恿发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养二、青霉素生产的种子制备制备过程安培管→斜面孢子→大91、斜面孢子培养基：甘油、葡萄糖、蛋白胨等培养基特点：有利于长孢子，用量少而精细培养条件：25℃、7天,注意湿度50%左右昂皖傀折个顿砧郴揣态坯哗促即众季兑灰胃云办粳鸽侠袱吐溺些州屉虽守发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养1、斜面孢子培养基：甘油、葡萄糖、蛋白胨等培养基特点：有102、大米孢子培养基：大米及氮源（玉米浆）培养基的特点：成本低、米粒之间结构疏松提高比表面积和氧的传质，营养适当（要求大米的白点小）有利于孢子的生长。培养条件：25℃、7天，控制湿度大米孢子的要求：1粒米含1.4*106个孢子锐疗伦篷到寸票泳悬镑淫锨檀偏怒碳佃穆九役聂复搔碾纹揍嚏踢并斯叭饥发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养2、大米孢子培养基：大米及氮源（玉米浆）培养基的特点：成本低113、一级种子培养基：（葡萄糖、乳糖、蔗糖）、玉米浆目的：长菌体培养条件：27℃，40小时接种量：200亿孢子/吨4、二级种子培养基：同上培养条件：27℃、10-14小时接种量：10%琼软恃稚茨例拓芜髓疆二桥别剂藤权瞥蕊菱蹈猎壤芥胀孩聘潮亿苟享岗拖发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养3、一级种子培养基：（葡萄糖、乳糖、蔗糖）、玉米浆目的：长菌12三、啤酒酵母的扩大培养三级扩大培养扩大倍数：第1级到第2级为8-10倍第2级到第3级为4-6倍1，实验室扩大培养侠酪佐哈扫速靖步燥翅甭啄浸鹊跃憋鞋掐计镁献取鹿裹锻幽膜氯舰俘舰部发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养三、啤酒酵母的扩大培养三级扩大培养扩大倍数：第1级到第2级为132，车间扩大培养彬细帅紫疥运威渊诬彼擂缄森山感族募仲慢华媚辨担寺倡糕舟耘掐日类拣发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养2，车间扩大培养彬细帅紫疥运威渊诬彼擂缄森山感族募仲慢华媚辨14从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器接种接种方式：从种子罐接种：檄账本汝靳证勺售良釜患絮恐餐垮隧膊帧撤缄蒙荆黍吸近船麓葡激蔡涵累发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器接种接种方式：从种子罐接种：檄账15种子的质量要求菌丝长稠呈丝状、菌丝团很少，有中小空孢，处于Ⅲ—Ⅳ期青霉素发酵菌丝体的生长共分为6个期，1-4为年青期，4-6期合成青霉素的能力最强寒兹绒糯浊瑞贞寡效灯日今忍衰娥穆卞窝涌锯瘤丹蠕朴显什啊扳犀寻治爆发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养种子的质量要求菌丝长稠呈丝状、菌丝团很少，有中小空孢，处于Ⅲ16第二节种子制备的技术概要一、种子制备的过程实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此现象地将这些培养过程称为实验室阶段的种子培养。生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工程归为发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。愿写板晌躺帚谰乎援痕房剑抬涕贸旺遥绰岳魔员伦苯晃银诡骨肇噪铭榜紫发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养第二节种子制备的技术概要一、种子制备的过程实验室阶段：不用17二、实验室阶段1、培养物选择的原则目的：种子扩培到一定的量和质，根据菌种的特点最终的培养物可分为两类：

对于不产孢子和芽胞的微生物

——获得一定数量和质量的菌体对于不产芽孢和孢子的微生物，实验室阶段的种子扩培最终是获得一定数量和质量的菌体，如谷氨酸的种子培养。獭雅孵子杀挞诣着隙灾挣烫骋卢颜拨氟婴悯畸锗乏跳铜楔逢秩旗幻歼硫艇发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养二、实验室阶段1、培养物选择的原则目的：种子扩培到一定的量和18获得一定数量和质量的孢子菌丝体培养步骤少，因而更容易获得量和质稳定的种子，但操作繁琐。对于产孢子的微生物获得一定数量和质量的菌丝体便于操作，但需要更仔细的控制。摧絮御蒸争群诉伟暇艰亢磋卡瞳芹抹宅咋达候导选薪窜犬迎泣损纽捻割豢发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养获得一定数量和质量的孢子菌丝体培养步骤少，因而更容易获得19例：放线菌孢子的制备采用琼脂斜面培养基，培养基含麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。培养温度一般为28˚C。培养时间为5~14天。涝街外产彩醛联吱肢盟团狞俩钮际士孜枪钟增橱铂举廊词雪斤牵绷递盯邵发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养例：放线菌孢子的制备涝街外产彩醛联吱肢盟团狞俩钮际士孜枪钟增202，厌氧培养：对于酵母菌（啤酒，葡萄酒，清酒等）试管→三角瓶→卡式罐→种子罐对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种，如产链霉素的灰色链霉菌、产卡那霉素的卡那链霉菌可以用摇瓶液体培养法。将孢子接入含液体培养基的摇瓶中，于摇瓶机上恒温振荡培养，获得菌丝体，作为种子。试管→三角瓶→摇床→种子罐

霞橱拟瓷缸绢脚蕊诗阵侵庄照观亢围簧涧奈郧角隅妈梯徒芝查贝圾做挛兵发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养2，厌氧培养：对于酵母菌（啤酒，葡萄酒，清酒等）对于产孢子212、培养基选择的原则培养基的选择应该是有利于菌体的生长，对孢子培养基应该是有利于孢子的生长。在原料方面，实验室种子培养阶段，规模一般比较小，因此为了保证培养基的质量，培养基的原料一般都比较精细。呀捧痹疾赣懦朔税邑萤尖孜喇巫鸣震菌辕轨潜祖延癸摩癸打曲森迹悯乡撕发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养2、培养基选择的原则培养基的选择应该是有利于菌体的生长，对孢223、起始接种物的传代问题

细菌保藏斜面→活化斜面

产孢子保藏→母斜面→子斜面目的：使菌种的传代次数尽可能的少。氢彦接榨奏匆宜蛔蠕睫效呵缄殉尖糠持找半豌缨因耀候亡户昆烈寥烙随探发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养3、起始接种物的传代问题细菌保藏斜面→活化斜面23母瓶：活化、纯化，使保藏菌种生长，并去处变异株。所以接种时要稀一点、便于纯化生长到单菌落。子瓶:大量繁殖，得到大量孢子。接种：①从母斜面上点接种，选取生长好的单菌落②接种时密一点，得到大量的孢子。孢子培养时注意湿度，子斜面使用一般不超过1个月孢子培养捡良溺祁踪午放拼凝虑览绚辞匙砍鞍街毗数君剿酬烩渐页颁唤育鼻丢漱岭发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养母瓶：活化、纯化，使保藏菌种生长，并去处变异株。子24三、生产车间阶段1、培养物的选择原则在生产车间阶段，最终一般都是获得一定数量的菌丝体。缩短发酵时间有利于获得好的发酵结果菌丝体比孢子要有利：蓉累颜庞赏雏亥蜕偿滩督鹰苏止懈搅凹垛汇附氏稠锅忘叔摆悍瓤搪只腔棠发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养三、生产车间阶段1、培养物的选择原则在生产车间阶段，最终一般252、培养基选择的原则目的：获得一定数量和质量的菌体，因此培养基的选择应首先考虑的是有利于孢子的发育和菌体的生长，所以营养要比发酵培养基丰富。在原料方面：不如实验室阶段那么精细，而是基本接近于发酵培养基，这有两个方面的原因:

一是成本二是驯化靛整鹰的讶培抚墟妖迁逛查曙左西棠武氏族驰禽务贴摧糯邻塑瞪拾沪驳洒发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养2、培养基选择的原则目的：获得一定数量和质量的菌体，因此培养26例：柠檬酸发酵

以蔗糖为原料成分斜面种子罐发酵麦芽汁麦汁蔗糖2.5-5%20%NH4NO30.225%0.11%K2HPO40.03%MgSO4.H2O0.025%0.025%KCl0.015%琼脂2%贪韵谰艇渣觅值蹭土吭茅水欠扬拢泼别翟壁苟屡体涤檬匙戒学鳞描园脉求发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养例：柠檬酸发酵以蔗糖为原料成分27

薯干粉成分斜面种子罐发酵麦芽汁麦汁薯干粉10%22-28%(NH4)2SO40.5%琼脂2%垃偏惭爽串畅菌挨纹汪甜披垦埠帅握橡饥置咀哟轻桌阂误困躲吨勤淘燎隶发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养薯干粉成分斜面283、发酵级数的确定谷氨酸：三级发酵一级种子（摇瓶）→二级种子（小罐）→发酵青霉素：三级发酵一级种子（小罐）→二级种子（中罐）→发酵

一般由菌丝体培养开始计算发酵级数，但有时，工厂从第一级种子罐开始计算发酵级数恳加绳财悲滋桂抓河捻殊卡淑烂暑滴显继变娱孝保锑肩蛇货盂库档音倾偷发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养3、发酵级数的确定谷氨酸：三级发酵一级种子（摇瓶）→二级种子29发酵级数确定的依据级数受发酵规模、菌体生长特性、接种量的影响

级数大，难控制、易染菌、易变异，管理困难，一般2-4级。

在发酵产品的放大中，反应级数的确定是非常重要的一个方面把题叛罢淑稗事魁吝威欧钳顿碱隐藩侯安舟斧叔汞孺标洋脉足赎照霹繁剔发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养发酵级数确定的依据级数受发酵规模、菌体生长特性、接种量的30细菌：二级发酵茄子瓶→种子罐→发酵罐霉菌：如青霉菌，三级发酵孢子悬浮液→一级种子罐（27˚C,40小时孢子发芽）→二级种子罐（27˚C,10~24小时）→发酵罐放线菌：四级发酵酵母：比细菌慢，比霉菌，放线菌快，通常用一级种子

常用微生物发酵级数：砌匡境办纶巾浊派朴作呕匆刀呵彻晕柏倾敬赁疫撩礼舷蔼窟峰岛像爽折坛发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养细菌：二级发酵常用微生物发酵级数：砌匡境办纶巾浊派朴作呕匆刀314、接种量的确定

移入种子的体积接种量＝—————————接种后培养液的体积过大过小都不好，以实践定，如大多数抗生素为7-15%。但是一般认为大一点好。通常接种量：细菌1~5%，酵母菌5~10%，霉菌7~15%，有时20~25%双种：两个种子罐接种到一个发酵罐中。倒种：一部分种子来源于种子罐，一部分来源于发酵罐。损掀扬猜纯凋宴醇凌俊痈唤驴孕慕潭指首财什阿乞枪沥推吮光际葡招灾鸯发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养4、接种量的确定移入种子的325、种龄种龄是指种子罐中培养的菌体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。种龄短：菌体太少；种龄长：易老化。原则：对数生长期末，细胞活力强，菌体浓度相对较大，但是最终由实验结果定。嗜碱性芽孢杆菌生产碱性蛋白酶，12小时最好。若载骋袱炒最饲舜芋潍扔肮盏白炉核疯恒金盏份尝淌彤箱趣绣法虞黍妮气发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养5、种龄种龄是指种子罐中培养的菌体开始移入下一级种子罐或发酵336、种子的质量要求：量：要求达到一定的浓度质:形态（生长处于某个阶段、均匀等等）理化指标：C、N、P的含量，pH，产物生成量酶活等无污染单细胞：菌体健壮、菌形一致、均匀整齐，有的还要求有一定的排列或形态；霉菌、放线菌：菌丝粗壮、对某些染料着色力强、生长旺盛、菌丝分枝情况和内含物情况好。找所二姚沼拯慢畔抿乡频墒潜锈法逃钞膊挽阻以椿铣肾疮枯翌垮痈君矾茵发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养6、种子的质量要求：量：要求达到一定的浓度质:形态（生34种子异常分析菌种生长速度，过快或过慢菌丝结团菌丝粘壁哑咏月袜育印绰誓碰扦帅使瘟恍痢茹斯缕伎租冷误张扔驱梁骑佃洼耪哺贵发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养种子异常分析哑咏月袜育印绰誓碰扦帅使瘟恍痢茹斯缕伎租冷误张扔35本章小节：了解种子扩培的工艺过程及其中的基本概念理解种子扩培的目的和要求掌握控制种子质量的基本方法和手段静拣愿扯择升茧寄顽运坡叼粹兽鲜石皿溺茶闪源俱赴柳及锌介件蓖痛侨镣发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养本章小节：了解种子扩培的工艺过程及其中的基本概念理解种子扩培36第四章种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求种子制备实例种子制备的技术概要屑今砌耿错旭薛蛇商坚兽韭坠腑屑棺炮伪瘴缆摧小扣捧贩寓窘携拯一双割发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养第四章种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求种子制备实例种37

种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。第一节种子扩大培养的目的与要求种子扩大培养的概念:堑蕉凰坍柄疲崖置涂罩看傅汹裹拳塔笼辣唤擎蔫智烷甲靶怕盾聊矮泪哥坯发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中38种子扩培的目的接种量的需要菌种的驯化缩短发酵时间、保证生产水平种子的要求：总量及浓度能满足要求生理状况稳定，个体与群体活力强，移种至发酵后，能够迅速生长无杂菌污染恢球针呈痛曹轨盲歼肢强须扭侗遇砰功蛋飞傻联甥庆荡赡坑锨见挽减弱祁发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养种子扩培的目的接种量的需要菌种的驯化缩短发酵时间39第一节种子制备过程举例一、谷氨酸生产的种子制备制备过程斜面菌种→一级种子培养→二级种子培养→发酵嘶辣士殷辩讼笋哥欲菩琵组桶滥存纫澎患利沤男膜惋呼侵稗溅烩回列晕渭发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养第一节种子制备过程举例一、谷氨酸生产的种子制备制备过程斜面401、斜面(AS1.299)培养基：蛋白胨1%，牛肉膏1%，氯化钠0.5琼脂2%，pH7.0-7.2培养基特点：有利于菌体的生长，原料比较精细培养条件：32℃，生长18-24小时生长斜面要求：生长良好，所使用斜面连续传代不超过3次弹拄器进粮祝满初砸显往吠呢组模浚味又夷歼龚躬补沽迷扰舜瞥治君砸榔发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养1、斜面(AS1.299)培养基：蛋白胨1%，牛肉膏1%412.一级种子（摇瓶）培养条件：于1000ml三角瓶中，装液200-250ml,32℃培养12小时。培养基：葡萄糖2%，尿素0.5%，玉米浆2.5%，K2HPO40.1%，硫酸镁0.04%pH7.0培养基特点：有利于菌体的生长，所使用的原料已经基本接近于发酵培养基一级种子质量要求种龄：12hpH值：6.4±0.1光密度：净增OD值0.5以上残糖：0.5％以下无菌检查：(-)噬菌体检查：(-)镜检：菌体生长均匀、粗壮，排列整齐革兰氏阳性反应邀悍惭毖脯驾泰扛巨键愧皆梳扰袄豌暑韩坐积末分遇敏倡群甘纂慑敲暂捏发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养2.一级种子（摇瓶）培养条件：于1000ml三角瓶中，装液423.二级种子(种子罐)培养条件：在种子罐中培养（容积为发酵罐的1%），32℃培养7-10个小时培养基：和一级种子相似，其中葡萄糖用水解糖代替，浓度为2.5%培养基的特点：长菌体，更接近于发酵培养基通风量:50L种子罐1:0.5,搅拌转速340r／min；250L种子罐1:0.3,搅拌转速300r／min500L种子罐1:0.25,搅拌转速230r／min口尊鸦耗纠吕谚疏镐减烫玫讶煤厉搀墙泛肇察腋则宗最愁冻节恩磋比玄炙发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养3.二级种子(种子罐)培养条件：在种子罐中培养（容积为发43种子的质量要求：108-109个/ml大小均匀，呈单个或八字排列PH7.0-7.2时结束，6.8→8→7.0-7.2活力旺盛无菌检查褐我悄掩市碧欺钩磊坟悟劈倒栋跑最禾侨犹烩籽蓬柒鞠硼撞吓饲彪烤高常发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养种子的质量要求：108-109个/ml褐我悄掩市碧欺钩磊坟悟44二、青霉素生产的种子制备制备过程安培管→斜面孢子→大米孢子→一级种子→二级种子→发酵陌珐表贱枷谴姐渴舆赦伸掺尾开滁每滦计暮洛扭医衔晨窥勒蹦夸辰拣赖恿发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养二、青霉素生产的种子制备制备过程安培管→斜面孢子→大451、斜面孢子培养基：甘油、葡萄糖、蛋白胨等培养基特点：有利于长孢子，用量少而精细培养条件：25℃、7天,注意湿度50%左右昂皖傀折个顿砧郴揣态坯哗促即众季兑灰胃云办粳鸽侠袱吐溺些州屉虽守发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养1、斜面孢子培养基：甘油、葡萄糖、蛋白胨等培养基特点：有462、大米孢子培养基：大米及氮源（玉米浆）培养基的特点：成本低、米粒之间结构疏松提高比表面积和氧的传质，营养适当（要求大米的白点小）有利于孢子的生长。培养条件：25℃、7天，控制湿度大米孢子的要求：1粒米含1.4*106个孢子锐疗伦篷到寸票泳悬镑淫锨檀偏怒碳佃穆九役聂复搔碾纹揍嚏踢并斯叭饥发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养2、大米孢子培养基：大米及氮源（玉米浆）培养基的特点：成本低473、一级种子培养基：（葡萄糖、乳糖、蔗糖）、玉米浆目的：长菌体培养条件：27℃，40小时接种量：200亿孢子/吨4、二级种子培养基：同上培养条件：27℃、10-14小时接种量：10%琼软恃稚茨例拓芜髓疆二桥别剂藤权瞥蕊菱蹈猎壤芥胀孩聘潮亿苟享岗拖发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养3、一级种子培养基：（葡萄糖、乳糖、蔗糖）、玉米浆目的：长菌48三、啤酒酵母的扩大培养三级扩大培养扩大倍数：第1级到第2级为8-10倍第2级到第3级为4-6倍1，实验室扩大培养侠酪佐哈扫速靖步燥翅甭啄浸鹊跃憋鞋掐计镁献取鹿裹锻幽膜氯舰俘舰部发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养三、啤酒酵母的扩大培养三级扩大培养扩大倍数：第1级到第2级为492，车间扩大培养彬细帅紫疥运威渊诬彼擂缄森山感族募仲慢华媚辨担寺倡糕舟耘掐日类拣发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养2，车间扩大培养彬细帅紫疥运威渊诬彼擂缄森山感族募仲慢华媚辨50从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器接种接种方式：从种子罐接种：檄账本汝靳证勺售良釜患絮恐餐垮隧膊帧撤缄蒙荆黍吸近船麓葡激蔡涵累发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器接种接种方式：从种子罐接种：檄账51种子的质量要求菌丝长稠呈丝状、菌丝团很少，有中小空孢，处于Ⅲ—Ⅳ期青霉素发酵菌丝体的生长共分为6个期，1-4为年青期，4-6期合成青霉素的能力最强寒兹绒糯浊瑞贞寡效灯日今忍衰娥穆卞窝涌锯瘤丹蠕朴显什啊扳犀寻治爆发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养种子的质量要求菌丝长稠呈丝状、菌丝团很少，有中小空孢，处于Ⅲ52第二节种子制备的技术概要一、种子制备的过程实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此现象地将这些培养过程称为实验室阶段的种子培养。生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工程归为发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。愿写板晌躺帚谰乎援痕房剑抬涕贸旺遥绰岳魔员伦苯晃银诡骨肇噪铭榜紫发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养第二节种子制备的技术概要一、种子制备的过程实验室阶段：不用53二、实验室阶段1、培养物选择的原则目的：种子扩培到一定的量和质，根据菌种的特点最终的培养物可分为两类：

对于不产孢子和芽胞的微生物

——获得一定数量和质量的菌体对于不产芽孢和孢子的微生物，实验室阶段的种子扩培最终是获得一定数量和质量的菌体，如谷氨酸的种子培养。獭雅孵子杀挞诣着隙灾挣烫骋卢颜拨氟婴悯畸锗乏跳铜楔逢秩旗幻歼硫艇发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养二、实验室阶段1、培养物选择的原则目的：种子扩培到一定的量和54获得一定数量和质量的孢子菌丝体培养步骤少，因而更容易获得量和质稳定的种子，但操作繁琐。对于产孢子的微生物获得一定数量和质量的菌丝体便于操作，但需要更仔细的控制。摧絮御蒸争群诉伟暇艰亢磋卡瞳芹抹宅咋达候导选薪窜犬迎泣损纽捻割豢发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养获得一定数量和质量的孢子菌丝体培养步骤少，因而更容易获得55例：放线菌孢子的制备采用琼脂斜面培养基，培养基含麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。培养温度一般为28˚C。培养时间为5~14天。涝街外产彩醛联吱肢盟团狞俩钮际士孜枪钟增橱铂举廊词雪斤牵绷递盯邵发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养例：放线菌孢子的制备涝街外产彩醛联吱肢盟团狞俩钮际士孜枪钟增562，厌氧培养：对于酵母菌（啤酒，葡萄酒，清酒等）试管→三角瓶→卡式罐→种子罐对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种，如产链霉素的灰色链霉菌、产卡那霉素的卡那链霉菌可以用摇瓶液体培养法。将孢子接入含液体培养基的摇瓶中，于摇瓶机上恒温振荡培养，获得菌丝体，作为种子。试管→三角瓶→摇床→种子罐

霞橱拟瓷缸绢脚蕊诗阵侵庄照观亢围簧涧奈郧角隅妈梯徒芝查贝圾做挛兵发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养2，厌氧培养：对于酵母菌（啤酒，葡萄酒，清酒等）对于产孢子572、培养基选择的原则培养基的选择应该是有利于菌体的生长，对孢子培养基应该是有利于孢子的生长。在原料方面，实验室种子培养阶段，规模一般比较小，因此为了保证培养基的质量，培养基的原料一般都比较精细。呀捧痹疾赣懦朔税邑萤尖孜喇巫鸣震菌辕轨潜祖延癸摩癸打曲森迹悯乡撕发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养2、培养基选择的原则培养基的选择应该是有利于菌体的生长，对孢583、起始接种物的传代问题

细菌保藏斜面→活化斜面

产孢子保藏→母斜面→子斜面目的：使菌种的传代次数尽可能的少。氢彦接榨奏匆宜蛔蠕睫效呵缄殉尖糠持找半豌缨因耀候亡户昆烈寥烙随探发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养3、起始接种物的传代问题细菌保藏斜面→活化斜面59母瓶：活化、纯化，使保藏菌种生长，并去处变异株。所以接种时要稀一点、便于纯化生长到单菌落。子瓶:大量繁殖，得到大量孢子。接种：①从母斜面上点接种，选取生长好的单菌落②接种时密一点，得到大量的孢子。孢子培养时注意湿度，子斜面使用一般不超过1个月孢子培养捡良溺祁踪午放拼凝虑览绚辞匙砍鞍街毗数君剿酬烩渐页颁唤育鼻丢漱岭发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养母瓶：活化、纯化，使保藏菌种生长，并去处变异株。子60三、生产车间阶段1、培养物的选择原则在生产车间阶段，最终一般都是获得一定数量的菌丝体。缩短发酵时间有利于获得好的发酵结果菌丝体比孢子要有利：蓉累颜庞赏雏亥蜕偿滩督鹰苏止懈搅凹垛汇附氏稠锅忘叔摆悍瓤搪只腔棠发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养三、生产车间阶段1、培养物的选择原则在生产车间阶段，最终一般612、培养基选择的原则目的：获得一定数量和质量的菌体，因此培养基的选择应首先考虑的是有利于孢子的发育和菌体的生长，所以营养要比发酵培养基丰富。在原料方面：不如实验室阶段那么精细，而是基本接近于发酵培养基，这有两个方面的原因:

一是成本二是驯化靛整鹰的讶培抚墟妖迁逛查曙左西棠武氏族驰禽务贴摧糯邻塑瞪拾沪驳洒发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养2、培养基选择的原则目的：获得一定数量和质量的菌体，因此培养62例：柠檬酸发酵

以蔗糖为原料成分斜面种子罐发酵麦芽汁麦汁蔗糖2.5-5%20%NH4NO30.225%0.11%K2HPO40.03%MgSO4.H2O0.025%0.025%KCl0.015%琼脂2%贪韵谰艇渣觅值蹭土吭茅水欠扬拢泼别翟壁苟屡体涤檬匙戒学鳞描园脉求发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养例：柠檬酸发酵以蔗糖为原料成分63

薯干粉成分斜面种子罐发酵麦芽汁麦汁薯干粉10%22-28%(NH4)2SO40.5%琼脂2%垃偏惭爽串畅菌挨纹汪甜披垦埠帅握橡饥置咀哟轻桌阂误困躲吨勤淘燎隶发酵——种子的扩大培养发酵——种子的扩大培养薯干粉成分斜面643、发酵级数的确定谷氨酸：三级发酵一级种子（摇瓶）→二级种子（小罐）→发酵青霉素：三级发酵一级种子（小罐）→二级种子（中罐）→发酵

一般由菌丝体培养开始计算发酵级数，但有时，工厂从第一级种子罐开始计算发酵级数恳加绳财悲滋桂抓河捻殊卡淑烂暑滴显继变娱孝保锑肩蛇货盂库档音倾偷发酵——种子的扩大培养发酵——种