对大脑皮层形态学改变的试验课件

一氧化碳中毒动物模型复制

和形态学技术实验形态学中心实验室贾雪梅

一氧化碳中毒动物模型复制

和形态学技术实验形态学中心实验室

石蜡包埋技术

石蜡包埋技术

1、熟悉石蜡包埋技术基本过程

目的和要求1、熟悉石蜡包埋技术基本过程

在显微镜下要观察人体组织，必须将组织切成以微米为单位的薄片，使其透光并易于观察，但直接切取柔软组织是难以办到的。

原理在显微镜下要观察人体组织，必须将组织切成以微米为单

石蜡包埋法是将“支持物质”----石蜡渗入组织内部，为此，必须先将组织中水分除净，用酒精进行脱水(70％→80％→90%→95%→l00％)。再用二甲苯置换出组织中的酒精，使其透明，然后放入融化的石蜡中。将浸蜡的组织块置于包埋框中，冷却后组织块便具有石蜡的硬度，切片机便能将组织切成薄片。

石蜡包埋法是将“支持物质”----石蜡渗入组织内部

操作步骤

1.取材直接取材或灌注后取新鲜组织

（不超过6h），切成3×5×2mm小块。2.固定保持细胞原有形态和结构，解决组织

自溶问题。10%中性甲醛、4%多聚甲醛等。3.冲洗自来水流水冲洗，目的：停止固定液

对组织的作用，去除固定液，以免影响染色。

操作步骤

4.脱水通常多用酒精脱水，为减少组织收缩，脱水酒精的浓度由低浓度开始，逐级升高浓度。

60%(1h)→70%(1h)→80%酒精(1h)→

90%(1h)→95%(2h)→100%(2h)

注意:脱水的具体时间视组织块

大小体积与厚度而定。

4.脱水通常多用酒精脱水，为减少组织收缩，脱水酒精的5.透明透明剂常有二甲苯、冬青油等等。6.浸蜡将透明组织移入已熔化的石蜡中，使熔化的石蜡能浸透到组织中，然后包埋成组织蜡块。浸蜡过程在温箱中进行，温度不能超过60oC，温度过高或时间过长，组织容易收缩和脆变。

方法：1/2石蜡→石蜡I→石蜡II→石蜡III。对大脑皮层形态学改变的试验课件

7.包埋将组织块和石蜡置于包埋框内，

冷却即成蜡块，组织获得了一定

硬度和韧度，就可以切成微薄的

切片。包埋机7.包埋将组织块和石蜡置于包埋框内，

8.切片载玻片先用蛋白甘油处理；

Leica切片机进行切片，厚5μm；

45oC漂烘仪内进行展片。

切片机切片机

9.裱片将蜡片裱贴于载玻片上

10.烤片将切片烤干待用漂片仪漂片仪

Nisslbody

染色技术

Nisslbody染色技术

1.熟悉Nisslbody染色原理

2.掌握Nisslbody染色操作方法

目的和要求1.熟悉Nisslbody染色原理

尼氏体由大量粗面内质网和游离核糖体构成，是神经元合成蛋白质的部位。机体组织是无色的，必须经过染色，增加组织结构的对比度，便于在显微镜下观察鉴别。甲苯胺蓝为碱性染料，可将尼氏体染为紫蓝色。尼氏体形态和数量的观察可作为判定神经元功能状态的一种标志。

原理尼氏体由大量粗面内质网和游离核糖体构成，是神经元合成蛋白质的

材料

1.染色液、酒精、二甲苯等；

2.染色缸、镊子、滤纸等；

材料

操作步骤

1、脱蜡：石蜡切片常规脱蜡至水二甲苯20分钟*2次

100%酒精10分钟

90%酒精10分钟

80%酒精10分钟

70%酒精10分钟

蒸馏水5分钟

操作步骤

2、染色：20~30分钟（600C温箱）

染液配制:甲苯胺蓝0.5克

50%酒精100毫升

染后蒸馏水洗

3、分色：95%酒精分色1-2’’，镜下控制

4、脱水：100%酒精10’’X25、透明：二甲苯5’X26、封片：用中性树胶进行封片

7、观察：

结果结果

对照组实验组

对照组实验组

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石蜡包埋技术

石蜡包埋技术

1、熟悉石蜡包埋技术基本过程

目的和要求1、熟悉石蜡包埋技术基本过程

在显微镜下要观察人体组织，必须将组织切成以微米为单位的薄片，使其透光并易于观察，但直接切取柔软组织是难以办到的。

原理在显微镜下要观察人体组织，必须将组织切成以微米为单

石蜡包埋法是将“支持物质”----石蜡渗入组织内部，为此，必须先将组织中水分除净，用酒精进行脱水(70％→80％→90%→95%→l00％)。再用二甲苯置换出组织中的酒精，使其透明，然后放入融化的石蜡中。将浸蜡的组织块置于包埋框中，冷却后组织块便具有石蜡的硬度，切片机便能将组织切成薄片。

石蜡包埋法是将“支持物质”----石蜡渗入组织内部

操作步骤

1.取材直接取材或灌注后取新鲜组织

（不超过6h），切成3×5×2mm小块。2.固定保持细胞原有形态和结构，解决组织

自溶问题。10%中性甲醛、4%多聚甲醛等。3.冲洗自来水流水冲洗，目的：停止固定液

对组织的作用，去除固定液，以免影响染色。

操作步骤

4.脱水通常多用酒精脱水，为减少组织收缩，脱水酒精的浓度由低浓度开始，逐级升高浓度。

60%(1h)→70%(1h)→80%酒精(1h)→

90%(1h)→95%(2h)→100%(2h)

注意:脱水的具体时间视组织块

大小体积与厚度而定。

4.脱水通常多用酒精脱水，为减少组织收缩，脱水酒精的5.透明透明剂常有二甲苯、冬青油等等。6.浸蜡将透明组织移入已熔化的石蜡中，使熔化的石蜡能浸透到组织中，然后包埋成组织蜡块。浸蜡过程在温箱中进行，温度不能超过60oC，温度过高或时间过长，组织容易收缩和脆变。

方法：1/2石蜡→石蜡I→石蜡II→石蜡III。对大脑皮层形态学改变的试验课件

7.包埋将组织块和石蜡置于包埋框内，

冷却即成蜡块，组织获得了一定

硬度和韧度，就可以切成微薄的

切片。包埋机7.包埋将组织块和石蜡置于包埋框内，

8.切片载玻片先用蛋白甘油处理；

Leica切片机进行切片，厚5μm；

45oC漂烘仪内进行展片。

切片机切片机

9.裱片将蜡片裱贴于载玻片上

10.烤片将切片烤干待用漂片仪漂片仪

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染色技术

Nisslbody染色技术

1.熟悉Nisslbody染色原理

2.掌握Nisslbody染色操作方法

目的和要求1.熟悉Nisslbody染色原理

尼氏体由大量粗面内质网和游离核糖体构成，是神经元合成蛋白质的部位。机体组织是无色的，必须经过染色，增加组织结构的对比度，便于在显微镜下观察鉴别。甲苯胺蓝为碱性染料，可将尼氏体染为紫蓝色。尼氏体形态和数量的观察可作为判定神经元功能状态的一种标志。

原理尼氏体由大量粗面内质网和游离核糖体构成，是神经元合成蛋白质的

材料

1.染色液、酒精、二甲苯等；

2.染色缸、镊子、滤纸等；

材料

操作步骤

1、脱蜡：石蜡切片常规脱蜡至水二甲苯20分钟*2次

100%酒精10分钟

90%酒精10分钟

80%酒精10分钟

70%酒精10分钟

蒸馏水5分钟

操作步骤

2、染色：20~30分钟（600C温箱）

染液配制:甲苯胺蓝0.5克

50%酒精100毫升