细菌耐药监测的质量控制课件

细菌耐药监测的质量控制湖南省临床检验中心赵艳华细菌耐药监测的质量控制湖南省临床检验中心细菌耐药性监测的的意义：监测病源微生物对抗生素的敏感性和耐药性，避开其耐药机制，指导合理用药细菌耐药性监测的的意义：监测病源微生物对抗生素的敏感性和耐药抓好细菌耐药性监测中的质量控制，是保证监测数据的准确性、可靠性的至关重要的环节抓好细菌耐药性监测中的质量控制，是保证监测数据的准确性、可靠各成员单位进行耐药监测工作时需严格执行质量控制措施。外部质量控制体系内部质量控制体系各成员单位进行耐药监测工作时需严格执行质量控制措施。内部质量控制体系：各成员单位临床微生物室（科）要建立完善的质量管理体系，建立健全室内质量控制体系；内部质量控制体系：各成员单位临床微生物室（科）要建立完善的质外部质量控制体系：各成员单位定期参加国家或省临床检验质量控制中心的质控考核并合格。外部质量控制体系：各成员单位定期参加国家或省临床检验质量控制质量控制概念的引入

历史上，现代风险管理的概念引入实验室之后，就以质量控制的形式出现。狭义上指的是一项持续的、系统性的评估工作来确保终产品的一致性——根据可接受的程度：事先建立好的允许限度下的精确度和准确度。质量控制概念的引入

历史上，现代风险管理的概念引入实验室细菌耐药性监测的内部质量控制体系主要目标保证实验结果的准确性、可靠性和可重复性实验室应对分析前、分析中、分析后三个阶段实行全面质量管理细菌耐药性监测的内部质量控制体系标本分析前的质量控制：

微生物学特殊性——得到正确分析结果的基础标本分析前的质量控制：样本质量控制样本质量是影响细菌学实验室结果的关键环节实验室应给标本采集者提供标本采集和运送的指导手册实验室应持续监测标本采集和运送过程实验室应对标本质和量（包括体积和数量）进行监测样本质量控制样本质量是影响细菌学实验室结果的关键环节样本质量控制标本采集：采集部位、采集数量和体积、采集时机、污染…标本保存：保存条件、保存时间标本运输：防止污染标本验收：标本采集时间、标本量、标本评估标本分离接种：病理成分的选取、选择合适的分离培养基和方式样本质量控制标本采集：采集部位、采集数量和体积、采集时机、污收集和运送微生物标本的容器要求1、无菌2.

无防腐剂3.

足够大4.

安全严密5.

不易碎6.

运送培养基加强无生长因子或保持特定菌的培养基避免用木质的棉试子对细菌有毒害收集和运送微生物标本的容器要求1、无菌收集细菌实验的标本避免污染抽血前，皮肤必须经过严格消毒。如果可能，化脓性损伤应通过皮肤抽血，因为这种方法比黏膜更容易消毒液体标本比拭子标本更适合检测。抽取物用注射器送到实验室之前应先把针头去掉，注射器口用安全帽封好。开放伤口，擦去表层分泌物，防止其它细菌干扰。用拭子取伤口边缘处收集细菌实验的标本避免污染抽血前，皮肤必须经过严格消毒。运送时间及运输贮存温度运送时间-短，运输贮存温度因细菌不同而异标本因冷藏及pH改变或在氧气中暴露，可能减少很多种细菌的存活时间脑膜炎球菌，淋病奈瑟菌，流感嗜血杆菌，肺炎链球菌，布氏杆菌，沙门菌，志贺氏菌，霍乱弧菌，空肠弯曲菌及厌养菌。对环境敏感菌株在运送中数量快速减少时，如果运送时间太长，其它菌则成倍增长，这给需定量评价数的培养造成困难（尿标本），需要寻找的细菌可同其它菌一起过度生长。需进行细菌学检测的所有标本，应在收集后2小时内送到实验室

运送时间及运输贮存温度运送时间-短，运输贮存温度因细菌不同而各种标本的运送及贮存条件标本运送贮存温度血血培养瓶

室温或37℃

脓、脑脊液、胸水、心包液、腹水、关节滑液、鼻窦分泌物

短时间内运送:标本在带帽的注射器内保证厌氧条件；长时间运送：使用运送培基室温，不用培养，避免冷藏支气管肺泡灌洗液、痰，其它分泌物、便

立刻送检（2-3小时）冷藏眼、耳、嘴、咽、鼻、尿道、生殖道、直肠、伤口拭子放在运送培养基(>4小时运送时间)室温，不培养各种标本的运送及贮存条件标本运送贮存温度血血培养瓶室温或痰标本合格标准痰标本留取后应先涂片,进行革兰染色镜检合格后再接种痰标本鳞状上皮细胞白血球细菌种类合格<=10/低倍>=101-3种不合格>=25/低倍<=10>3种痰标本合格标准痰标本留取后应先涂片,进行革兰染色镜检合格后拒收标本指标•除非不能再采集的标本，否则不予检测；如果培养或检测，要对结果进行说明。书写错误容器问题干燥试子厌养菌容器无菌、无防腐剂、足够大、安全严密不易碎、运送培养基、无生长因子或保持特定菌的培养基、避免用木质的棉试子对细菌有毒害拒收标本指标•除非不能再采集的标本，否则不予检测；无菌、无细菌学实验室检测方法确认临床细菌学实验室选择的检测方法准确性和重复性好检测结果的临床相关性好更换新的检测方法应证明其准确度和精密度良好应在工作人员具备相应的操作能力和具备研判和报告结果的能力后进行细菌学实验室检测方法确认临床细菌学实验室选择的检测方法细菌学实验室检测方法确认不需确认的试验方法SFDA批准的一般试验不需进行确认试验单个试剂和培养基通过日常质控进行检测，不需进行确认试验需确认的试验方法如抗菌药物敏感试验血培养非培养的检测方法SFDA批准试验方法的改良方法未经SFDA批准的方法自己开发的方法细菌学实验室检测方法确认不需确认的试验方法细菌学实验室检测方法确认确认的内容实验室可否获得与制造商相同的检测结果非商品检测方法应与可接受的参考方法进行比较应评价方法的敏感性、特异性、准确性、精密度和预测值细菌学实验室检测方法确认确认的内容细菌学实验室检测方法确认方法确认需至少20个阳性标本和20-50个阴性标本至少检测12-15个种的50株菌与参考方法比较，新方法的敏感性和特异性应≥95%经方法学确认的试验方法，在实践中应记录其质控资料、人员能力、PT结果、仪器校准、临床相关性等资料，达到临床确认细菌学实验室检测方法确认方法确认需分析中质量控制•常规仪器和设备•成品商业培养基（诊断抗血清）、试剂分析中质量控制•常规仪器和设备设备的质量控制预防性维护与保养可保证仪器的精确性和使用寿命按照制造商的建议，有计划的定期检查可减少仪器故障和维修需要明确维护保养的责任是保障设备完好的前提商家的支持是保障设备完好的后盾设备的质量控制预防性维护与保养可保证仪器的精确性和使用寿命设备的质量控制新设备的检查，包括如安全性、配件、有无破损等新设备比对实验（与旧设备比对或与参考设备或方法比对）设备运行记录、维护保养记录、维修记录制定和执行标准操作规程培训操作人员设备的质量控制新设备的检查，包括如安全性、配件、有无破损等设备的质量控制培养箱、冰箱、水浴箱每天有温度记录二氧化碳培养箱每天检查CO2含量高压灭菌器和干热灭菌器应有温度记录装置和灭菌指示剂厌氧罐或厌氧箱美篮为指示剂，无氧时应无色生物安全柜更换滤网由专门技术人员进行细菌培养仪对每批培养瓶进行生长试验。保证在有效期内使用微生物鉴定仪及时更新系统操作软件

设备的质量控制培养箱、冰箱、水浴箱每天有温度记录使用细菌鉴定仪要注意维持比色的清洁，不要在比色板上方添加试剂；取、放鉴定条要小心，以免打翻溢出；比

色完毕即将比色板送入机体内。定期请工程师校对比色、比浊系统，也可用标准菌株作质控对照使用细菌鉴定仪要注意维持比色的清洁，不要在比色板上方添加试剂仪器设备质量控制标准设备控制标准允许范围高压灭菌器121℃

≥121℃

孵育箱35℃

±1℃

水温箱37℃

±1℃冰箱

4℃

±2℃

低温冰箱-20℃

±5℃

二氧化碳培养菌5%~10%<10%仪器设备质量控制标准设备培养基质量控制1．一般性状培养基的一般性状包括外观、厚度、pH值等液体培养基、固体培养基2．无菌试验压力蒸汽灭菌后倾注的固体培养基灭菌后无菌操作分装的液体培养基无需高压灭菌只需煮沸消毒的选择性培养基培养基质量控制1．一般性状培养基名称

质控菌株

ATCC

鉴定标准

血平板

金黄色葡萄球菌

化脓性链球菌

肺炎链球菌

大肠埃希菌

25923

19615

6305

25922

中度到大量生长

生长，β-溶血

生长，α溶血

生长

巧克力平板

流感嗜血杆菌

脑膜炎奈瑟菌

淋病奈瑟菌

10211

13090

43096

生长

生长

生长

伊红美蓝平板

鼠伤寒沙门菌

大肠埃希菌

粪肠球菌

14028

25922

29212

生长，无色到琥珀色菌落

生长，蓝黑菌落，金属光泽

部分抑制

麦康凯平板

大肠埃希菌

奇异变形杆菌

鼠伤寒沙门菌

粪肠球菌

25922

12453

14028

29212

生长，红色菌落

生长，无色菌落，迁徒现象部分抑制

生长，无色菌落

部分抑制11种常用培养基的质量鉴定质控菌株ATCC鉴定标准血平板金黄色葡萄球菌

化脓性SS平板

鼠伤寒沙门菌

福氏志贺菌

粪肠球菌

大肠埃希菌

14028

12022

29212

25922

生长，无色菌落，有或无黑心

生长，无色菌落

全部抑制

部分或全部抑制TCBS平板

霍乱弧菌

副溶血弧菌

大肠埃希菌

9459

17802

25922

生长，黄色菌落

生长，蓝色菌落

部分或全部抑制

营养琼脂平板

沙保弱平板

福氏志贺菌

白色念珠菌

大肠埃希菌

12022

10231

25922

中度到大量生长

生长

部分或全部抑制

罗氏培养基

结核分枝杆菌H37Rａ

大肠埃希菌

25177

25922

生长

部分或全部抑制

淋病选择性

培养基淋病奈瑟菌

奇异变形杆菌

表皮葡萄球菌

43096

43071

12228

生长

部分抑制

部分抑制

11种常用培养基的质量鉴定SS平板鼠伤寒沙门菌

福氏志贺菌

粪肠球菌

大肠埃希菌测定羊血琼脂平板的性能

培养基质控菌株判定标准生长试验金黄色葡萄球菌ATCC25923生长溶血反应肺炎链球菌ATCC19615生长，α溶血化脓性链球菌ATCC6305生长，β溶血杆菌肽敏感（纸片法）化脓性链球菌ATCC6305＞10mm，敏感B群链球菌＜10mm，耐药测定羊血琼脂平板的性能培养基质控菌株判定标准生长试验金黄色染色液质量控制

染色液应每周作一次质量控制。用金黄色葡萄球菌(ATCC25923)。大肠埃希菌(ATCC25922)作革兰染色液的室内质控。用结核分枝杆菌H37Ra(ATCC25177)对抗酸染色液进行质量鉴定。染色液质量控制染色液应每周作一次质量控制。用金黄色葡萄球菌试剂质控诊断血清的质控

初次使用时应注意：根据使用说明来使用和保存，冻干制品还应注明配成水溶液的日期，应用已知菌效价和特异性进行测定，合格者方可使用。贮存于4℃，每3个月对血清进行一次质控。

试剂质控细菌耐药监测的质量控制课件试剂名称

阳性对照菌种

阴性对照菌种

监控频率

凝固酶血浆

金黄色葡萄球菌

表皮葡萄球菌

每天

杆菌肽

A群链球菌

B群链球菌

每周

Optochin纸片

肺炎链球菌

每周

10%去氧胆酸钠

肺炎链球菌

每周三氯化铁

（马尿酸钠试验）

B群链球菌

A群链球菌

每次

常用试剂的质量鉴定

试剂名称监控频率凝固酶血浆金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌过氧化氢金黄金葡萄球菌

A群链球菌

每天

氧化酶

铜绿假单胞菌

大肠埃希菌

每天

甲基红试剂

雷极普罗威登斯菌

阴沟肠杆菌

每周

VP试剂

粘质沙雷菌

雷极普罗威登斯菌每周

三氯化铁

（苯丙氨酸脱氢酶试验）

雷极普罗威登斯菌阴沟肠杆菌每周

常用试剂的质量鉴定

过氧化氢金黄金葡萄球菌A群链球菌每天氧化酶铜绿假“X”因子条状物

嗜沫嗜血杆菌

副流感嗜血杆菌

每周“

V”因子条状物

副流感嗜血杆菌

流感嗜血杆菌

每周

“X+V”因子条状物

流感嗜血杆菌

副流感嗜血杆菌

每周

芽管血清

白色念珠菌

热带念珠菌

每次

常用试剂的质量鉴定

“X”因子条状物嗜沫嗜血杆菌副流感嗜血杆菌每周“抗菌药物敏感性试验

AST

目的检出细菌对抗生素的耐药性，预测临床治疗结果体外R≈体内R，对R的结果可以相信体外S≠体内S，对S的结果应持怀疑态度定义：AST是一个检测细菌耐药性的体外抑菌试验（ART）抗菌药物敏感性试验AST如果没有细菌耐药性检测治疗过度：用药不当，过度使用抗生素治疗错误：用药错误，危重患者丧失抢救时机增加不必要的副作用增加不必要的费用增加细菌的耐药性降低医疗服务的质量如果没有细菌耐药性检测（1）手工试验1.纸片扩散法（S，I，R）2.稀释法（MIC）3.Etest（MIC）（2）自动仪器Vitek，Microscan，Phoenix（3）分子试验PCR直接检测mecA基因（4）酶试验Nitrocefin、ESBL检测方法：（1）手工试验1.纸片扩散法（S，I，R）方法：纸片法最适合常规实验室使用。其特点是方便、易操作，测定的药物随意可变，灵活性强。重要的是纸片法药敏试验有一套完善的质量控制方法，结果相当可靠。纸片法唯一的不足是中度耐药的菌株会出现问题。纸片法最适合常规实验室使用。其特点是方便、易操作，测定的药物肉汤稀释法和琼脂稀释法是把抗菌药物倍比稀释在肉汤或琼脂中定量测定MIC的方法。稀释法可以精确测定一些厌氧菌及苛养菌，而对这些菌纸片扩散法是无能为力的。琼脂稀释法较肉汤稀释法精确的原因在于细菌的生长情况可查，且一套平皿可测多株细菌。这两种方法的缺点的耗时费力。肉汤稀释法和琼脂稀释法是把抗菌药物倍比稀释在肉汤或琼脂中定量自动化药敏仪目前，有Vitek系统、Microscan系统、SensstiterARIS等。但自动化仪也有一定的局限性。首先药物的选择缺乏灵活性，其次检测一些特殊菌的耐药性时有困难，尤其是快速药敏板，其可靠性不佳。

自动化药敏仪目前，有Vitek系统、Microscan系统、E-Test法是结合扩散法和稀释法的特点，长塑料条含有连续的呈指数梯度变化的抗菌药物，具有精确、可靠、稳定性好的特点，且各种耐药表型均有良好的效果，唯一的缺点是价格昂贵。

E-Test法是结合扩散法和稀释法的特点，长塑料条含有连续的药物敏感试验的质量控制纸片扩散法:每周至少一次;更换药物或培养基是要做质控常用质控菌株:金黄色葡萄球菌ATCC25923大肠埃希菌ATCC25922铜绿假单胞菌ATCC27853稀释法(手工):每周至少一次,最好每批实验标准菌株和临床分离菌同时做常用质控菌株:金黄色葡萄球菌ATCC29213大肠埃希菌ATCC25922铜绿假单胞菌ATCC27853药物敏感试验的质量控制纸片扩散法:每周至少一次;更换药物或培药物敏感试验质量控制培养基：每批做一次质控纸片：每批并每周一次菌悬液浓度标准：为1.5×108CFU／ml药物敏感试验质量控制培养基：每批做一次质控M-H琼脂平皿定量在琼脂扩散法药敏试验中，M-H琼脂厚度是严重影响纸片药敏试验结果的重要因素，琼脂培养基越厚抑菌环直径越小、反之则越大；克服的办法是要在保持水平的平台上（水平仪）定量倾注培养基，这个问题至今未被充分的重视。10cm的平皿应倾注23-25ml的培养基。

M-H琼脂平皿定量在琼脂扩散法药敏试验中，M-H琼脂厚度是严抗菌药纸片贮藏纸片失效是造成药敏结果错误的最重要的原因，必须在-20℃或更低温度的低温冰箱中保存纸片，近期使用的纸片只需放4℃冰箱，一周后弃取，更换新纸片。抗菌药纸片贮藏纸片失效是造成药敏结果错误的最重要的原因，必药物敏感试验质量控制连续质控检测1次/天共30天，获30个检测值，如：1、≤3个值超出范围，可行每周一次质控2、≥4个值超出范围，继续做每天一次质控3、每当试剂、药敏纸片、培养基改变时，应重新行30天的质控4、每周一次质控时如某周出现一次失控，则应连续做5次质控。零失控时作每周一次质控，否则行连续30次质控药物敏感试验质量控制连续质控检测1次/天共30天，获30个检药物敏感试验(仪器法)使用厂家规定的标准菌株对相应试剂进行质控每批试剂至少一次当试验结果异常、不稳定，或缺少经验的人员操作时，应增加质控频率。药物敏感试验(仪器法)使用厂家规定的标准菌株对相应试剂进行质分析后的质量控制包括：结果分析、解释及报告（包括监测结果的正确报告）合理使用耐药性分析软件分析后的质量控制包括：结果分析、解释及报告（包括监测结果的1.不可能的结果如MRSA对青霉素类敏感；耐庆大霉素的革兰阳性球菌对其他氨基糖苷类敏感；肠杆菌科耐三代头孢却对氨基、羧基西林或一代头孢菌素敏感……此类结果必须找出原因。1.不可能的结果如MRSA对青霉素类敏感；2.需要修正的结果葡萄球菌、嗜血杆菌或淋病奈瑟菌，如β-内酰胺酶阳性时应报告对所有青霉素类耐药。耐林可霉素的葡萄球菌即使出现对克林霉素敏感的结果也应报耐药。耐庆大霉素的革兰阳性球菌即使出现对阿米卡星、奈替米星敏感的结果，因只抑菌而不杀菌，也应报告耐药。同样，托布霉素/阿米卡星也有类似规律。2.需要修正的结果葡萄球菌、嗜血杆菌或淋病奈瑟菌，如β-内酰3.提示性药物

细菌对此种药物耐药可提示对同类药物均耐药。葡萄球菌对苯唑西林耐药，提示对所有β-内酰胺类抗生素均耐药，也会对氨基糖苷类耐药。耐氨苄西林的肠球菌提示对所有青霉素类及亚胺培南耐药。耐庆大霉素的革兰阳性球菌对氨基糖苷类均耐药。大肠埃希菌或克雷伯菌对头孢泊肟、头孢他啶或氨曲南耐药提示会产生超广谱β-内酰胺酶（ESBL)。3.提示性药物

细菌对此种药物耐药可提示对同类药物均耐药。4.需向临床医师解释的结果MRS的体外药敏试验可能出现对某种头孢菌素类、碳青霉烯类或β-内酰胺酶抑制类抗生素的敏感结果，但用药无效。具有ESBL的大肠埃希或克雷伯菌即使试验中对某种β-内酰胺类敏感也在临床无效，均应向临床解释。4.需向临床医师解释的结果MRS的体外药敏试验可能出现对某种外部质量控制体系：室间质量评价外部质量控制体系：室间质量评价临床细菌学实验室室间质量评价目的：了解本实验室测定结果的准确性和实验室所处的水平积极参加接收标本应有检查、登记并正确保存未接到标本时或标本有破损或错误时应及时与组织者联系质评标本检测应用常规方法反馈信息应进行评估、总结与改进临床细菌学实验室室间质量评价目的：了解本实验室测定结果的准确室间质评的测定原则

室间质评样本测定时须与病人样本同样操作，不得特殊对待，并且不能与其他医院核对测定结果，要如实地反映实验室的真实工作状况和水平，如有疑问，可与室间质评的组织机构沟通。室间质评的测定原则

室间质评样本测定时须与病人样本同样室间质评活动程序1在建立实施室内质控体系的基础上，参加室间质评活动。2收到质控物后认真检查核对，如有破损、缺失、标本编号错误等及时向科室反映，以便及时与部临检或省临检中心联系，及时补寄。3仔细阅读室间质评的通知和要求，由室负责人将质评样本保存在2℃～8℃冰箱，妥善保管好报表和项目编码。室间质评活动程序质评样品的测定1质控菌株用生理盐水或肉汤溶解，按标本种类接种各种选择培养基，放适当环境培养。2培养分离病原菌，根据病原菌种类进行鉴定和耐药表型检测，并根据质控要求，病原菌进行药敏试验质评样品的测定填写报表或网上回报1填写报表时应按要求逐项填写，字迹清晰整洁。2填写完后再次核对，以防笔误、样本号顺序错误等。3然后则测定者、室负责人签字。结果存档

填写完后复印或将网页另存，一份寄出，一份存档，以备核查。填写报表或网上回报质评反馈分析收到反馈报告后要及时分析，检查各项目的准确程度、有无不合格项目，对不合格项目需要分析失误的原因。将所有的失控调查原因及纠正措施做好记录，并上报科质量控制小组和科主任，由科主任签字后，质控结果归档保存。质评反馈分析收到反馈报告后要及时分析，检查各项目的准确程度、细菌耐药监测的质量控制课件谢谢欣赏THANKYOUFORWATCHING谢谢欣赏THANKYOUFORWATCHING细菌耐药监测的质量控制湖南省临床检验中心赵艳华细菌耐药监测的质量控制湖南省临床检验中心细菌耐药性监测的的意义：监测病源微生物对抗生素的敏感性和耐药性，避开其耐药机制，指导合理用药细菌耐药性监测的的意义：监测病源微生物对抗生素的敏感性和耐药抓好细菌耐药性监测中的质量控制，是保证监测数据的准确性、可靠性的至关重要的环节抓好细菌耐药性监测中的质量控制，是保证监测数据的准确性、可靠各成员单位进行耐药监测工作时需严格执行质量控制措施。外部质量控制体系内部质量控制体系各成员单位进行耐药监测工作时需严格执行质量控制措施。内部质量控制体系：各成员单位临床微生物室（科）要建立完善的质量管理体系，建立健全室内质量控制体系；内部质量控制体系：各成员单位临床微生物室（科）要建立完善的质外部质量控制体系：各成员单位定期参加国家或省临床检验质量控制中心的质控考核并合格。外部质量控制体系：各成员单位定期参加国家或省临床检验质量控制质量控制概念的引入

历史上，现代风险管理的概念引入实验室之后，就以质量控制的形式出现。狭义上指的是一项持续的、系统性的评估工作来确保终产品的一致性——根据可接受的程度：事先建立好的允许限度下的精确度和准确度。质量控制概念的引入

历史上，现代风险管理的概念引入实验室细菌耐药性监测的内部质量控制体系主要目标保证实验结果的准确性、可靠性和可重复性实验室应对分析前、分析中、分析后三个阶段实行全面质量管理细菌耐药性监测的内部质量控制体系标本分析前的质量控制：

微生物学特殊性——得到正确分析结果的基础标本分析前的质量控制：样本质量控制样本质量是影响细菌学实验室结果的关键环节实验室应给标本采集者提供标本采集和运送的指导手册实验室应持续监测标本采集和运送过程实验室应对标本质和量（包括体积和数量）进行监测样本质量控制样本质量是影响细菌学实验室结果的关键环节样本质量控制标本采集：采集部位、采集数量和体积、采集时机、污染…标本保存：保存条件、保存时间标本运输：防止污染标本验收：标本采集时间、标本量、标本评估标本分离接种：病理成分的选取、选择合适的分离培养基和方式样本质量控制标本采集：采集部位、采集数量和体积、采集时机、污收集和运送微生物标本的容器要求1、无菌2.

无防腐剂3.

足够大4.

安全严密5.

不易碎6.

运送培养基加强无生长因子或保持特定菌的培养基避免用木质的棉试子对细菌有毒害收集和运送微生物标本的容器要求1、无菌收集细菌实验的标本避免污染抽血前，皮肤必须经过严格消毒。如果可能，化脓性损伤应通过皮肤抽血，因为这种方法比黏膜更容易消毒液体标本比拭子标本更适合检测。抽取物用注射器送到实验室之前应先把针头去掉，注射器口用安全帽封好。开放伤口，擦去表层分泌物，防止其它细菌干扰。用拭子取伤口边缘处收集细菌实验的标本避免污染抽血前，皮肤必须经过严格消毒。运送时间及运输贮存温度运送时间-短，运输贮存温度因细菌不同而异标本因冷藏及pH改变或在氧气中暴露，可能减少很多种细菌的存活时间脑膜炎球菌，淋病奈瑟菌，流感嗜血杆菌，肺炎链球菌，布氏杆菌，沙门菌，志贺氏菌，霍乱弧菌，空肠弯曲菌及厌养菌。对环境敏感菌株在运送中数量快速减少时，如果运送时间太长，其它菌则成倍增长，这给需定量评价数的培养造成困难（尿标本），需要寻找的细菌可同其它菌一起过度生长。需进行细菌学检测的所有标本，应在收集后2小时内送到实验室

运送时间及运输贮存温度运送时间-短，运输贮存温度因细菌不同而各种标本的运送及贮存条件标本运送贮存温度血血培养瓶

室温或37℃

脓、脑脊液、胸水、心包液、腹水、关节滑液、鼻窦分泌物

短时间内运送:标本在带帽的注射器内保证厌氧条件；长时间运送：使用运送培基室温，不用培养，避免冷藏支气管肺泡灌洗液、痰，其它分泌物、便

立刻送检（2-3小时）冷藏眼、耳、嘴、咽、鼻、尿道、生殖道、直肠、伤口拭子放在运送培养基(>4小时运送时间)室温，不培养各种标本的运送及贮存条件标本运送贮存温度血血培养瓶室温或痰标本合格标准痰标本留取后应先涂片,进行革兰染色镜检合格后再接种痰标本鳞状上皮细胞白血球细菌种类合格<=10/低倍>=101-3种不合格>=25/低倍<=10>3种痰标本合格标准痰标本留取后应先涂片,进行革兰染色镜检合格后拒收标本指标•除非不能再采集的标本，否则不予检测；如果培养或检测，要对结果进行说明。书写错误容器问题干燥试子厌养菌容器无菌、无防腐剂、足够大、安全严密不易碎、运送培养基、无生长因子或保持特定菌的培养基、避免用木质的棉试子对细菌有毒害拒收标本指标•除非不能再采集的标本，否则不予检测；无菌、无细菌学实验室检测方法确认临床细菌学实验室选择的检测方法准确性和重复性好检测结果的临床相关性好更换新的检测方法应证明其准确度和精密度良好应在工作人员具备相应的操作能力和具备研判和报告结果的能力后进行细菌学实验室检测方法确认临床细菌学实验室选择的检测方法细菌学实验室检测方法确认不需确认的试验方法SFDA批准的一般试验不需进行确认试验单个试剂和培养基通过日常质控进行检测，不需进行确认试验需确认的试验方法如抗菌药物敏感试验血培养非培养的检测方法SFDA批准试验方法的改良方法未经SFDA批准的方法自己开发的方法细菌学实验室检测方法确认不需确认的试验方法细菌学实验室检测方法确认确认的内容实验室可否获得与制造商相同的检测结果非商品检测方法应与可接受的参考方法进行比较应评价方法的敏感性、特异性、准确性、精密度和预测值细菌学实验室检测方法确认确认的内容细菌学实验室检测方法确认方法确认需至少20个阳性标本和20-50个阴性标本至少检测12-15个种的50株菌与参考方法比较，新方法的敏感性和特异性应≥95%经方法学确认的试验方法，在实践中应记录其质控资料、人员能力、PT结果、仪器校准、临床相关性等资料，达到临床确认细菌学实验室检测方法确认方法确认需分析中质量控制•常规仪器和设备•成品商业培养基（诊断抗血清）、试剂分析中质量控制•常规仪器和设备设备的质量控制预防性维护与保养可保证仪器的精确性和使用寿命按照制造商的建议，有计划的定期检查可减少仪器故障和维修需要明确维护保养的责任是保障设备完好的前提商家的支持是保障设备完好的后盾设备的质量控制预防性维护与保养可保证仪器的精确性和使用寿命设备的质量控制新设备的检查，包括如安全性、配件、有无破损等新设备比对实验（与旧设备比对或与参考设备或方法比对）设备运行记录、维护保养记录、维修记录制定和执行标准操作规程培训操作人员设备的质量控制新设备的检查，包括如安全性、配件、有无破损等设备的质量控制培养箱、冰箱、水浴箱每天有温度记录二氧化碳培养箱每天检查CO2含量高压灭菌器和干热灭菌器应有温度记录装置和灭菌指示剂厌氧罐或厌氧箱美篮为指示剂，无氧时应无色生物安全柜更换滤网由专门技术人员进行细菌培养仪对每批培养瓶进行生长试验。保证在有效期内使用微生物鉴定仪及时更新系统操作软件

设备的质量控制培养箱、冰箱、水浴箱每天有温度记录使用细菌鉴定仪要注意维持比色的清洁，不要在比色板上方添加试剂；取、放鉴定条要小心，以免打翻溢出；比

色完毕即将比色板送入机体内。定期请工程师校对比色、比浊系统，也可用标准菌株作质控对照使用细菌鉴定仪要注意维持比色的清洁，不要在比色板上方添加试剂仪器设备质量控制标准设备控制标准允许范围高压灭菌器121℃

≥121℃

孵育箱35℃

±1℃

水温箱37℃

±1℃冰箱

4℃

±2℃

低温冰箱-20℃

±5℃

二氧化碳培养菌5%~10%<10%仪器设备质量控制标准设备培养基质量控制1．一般性状培养基的一般性状包括外观、厚度、pH值等液体培养基、固体培养基2．无菌试验压力蒸汽灭菌后倾注的固体培养基灭菌后无菌操作分装的液体培养基无需高压灭菌只需煮沸消毒的选择性培养基培养基质量控制1．一般性状培养基名称

质控菌株

ATCC

鉴定标准

血平板

金黄色葡萄球菌

化脓性链球菌

肺炎链球菌

大肠埃希菌

25923

19615

6305

25922

中度到大量生长

生长，β-溶血

生长，α溶血

生长

巧克力平板

流感嗜血杆菌

脑膜炎奈瑟菌

淋病奈瑟菌

10211

13090

43096

生长

生长

生长

伊红美蓝平板

鼠伤寒沙门菌

大肠埃希菌

粪肠球菌

14028

25922

29212

生长，无色到琥珀色菌落

生长，蓝黑菌落，金属光泽

部分抑制

麦康凯平板

大肠埃希菌

奇异变形杆菌

鼠伤寒沙门菌

粪肠球菌

25922

12453

14028

29212

生长，红色菌落

生长，无色菌落，迁徒现象部分抑制

生长，无色菌落

部分抑制11种常用培养基的质量鉴定质控菌株ATCC鉴定标准血平板金黄色葡萄球菌

化脓性SS平板

鼠伤寒沙门菌

福氏志贺菌

粪肠球菌

大肠埃希菌

14028

12022

29212

25922

生长，无色菌落，有或无黑心

生长，无色菌落

全部抑制

部分或全部抑制TCBS平板

霍乱弧菌

副溶血弧菌

大肠埃希菌

9459

17802

25922

生长，黄色菌落

生长，蓝色菌落

部分或全部抑制

营养琼脂平板

沙保弱平板

福氏志贺菌

白色念珠菌

大肠埃希菌

12022

10231

25922

中度到大量生长

生长

部分或全部抑制

罗氏培养基

结核分枝杆菌H37Rａ

大肠埃希菌

25177

25922

生长

部分或全部抑制

淋病选择性

培养基淋病奈瑟菌

奇异变形杆菌

表皮葡萄球菌

43096

43071

12228

生长

部分抑制

部分抑制

11种常用培养基的质量鉴定SS平板鼠伤寒沙门菌

福氏志贺菌

粪肠球菌

大肠埃希菌测定羊血琼脂平板的性能

培养基质控菌株判定标准生长试验金黄色葡萄球菌ATCC25923生长溶血反应肺炎链球菌ATCC19615生长，α溶血化脓性链球菌ATCC6305生长，β溶血杆菌肽敏感（纸片法）化脓性链球菌ATCC6305＞10mm，敏感B群链球菌＜10mm，耐药测定羊血琼脂平板的性能培养基质控菌株判定标准生长试验金黄色染色液质量控制

染色液应每周作一次质量控制。用金黄色葡萄球菌(ATCC25923)。大肠埃希菌(ATCC25922)作革兰染色液的室内质控。用结核分枝杆菌H37Ra(ATCC25177)对抗酸染色液进行质量鉴定。染色液质量控制染色液应每周作一次质量控制。用金黄色葡萄球菌试剂质控诊断血清的质控

初次使用时应注意：根据使用说明来使用和保存，冻干制品还应注明配成水溶液的日期，应用已知菌效价和特异性进行测定，合格者方可使用。贮存于4℃，每3个月对血清进行一次质控。

试剂质控细菌耐药监测的质量控制课件试剂名称

阳性对照菌种

阴性对照菌种

监控频率

凝固酶血浆

金黄色葡萄球菌

表皮葡萄球菌

每天

杆菌肽

A群链球菌

B群链球菌

每周

Optochin纸片

肺炎链球菌

每周

10%去氧胆酸钠

肺炎链球菌

每周三氯化铁

（马尿酸钠试验）

B群链球菌

A群链球菌

每次

常用试剂的质量鉴定

试剂名称监控频率凝固酶血浆金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌过氧化氢金黄金葡萄球菌

A群链球菌

每天

氧化酶

铜绿假单胞菌

大肠埃希菌

每天

甲基红试剂

雷极普罗威登斯菌

阴沟肠杆菌

每周

VP试剂

粘质沙雷菌

雷极普罗威登斯菌每周

三氯化铁

（苯丙氨酸脱氢酶试验）

雷极普罗威登斯菌阴沟肠杆菌每周

常用试剂的质量鉴定

过氧化氢金黄金葡萄球菌A群链球菌每天氧化酶铜绿假“X”因子条状物

嗜沫嗜血杆菌

副流感嗜血杆菌

每周“

V”因子条状物

副流感嗜血杆菌

流感嗜血杆菌

每周

“X+V”因子条状物

流感嗜血杆菌

副流感嗜血杆菌

每周

芽管血清

白色念珠菌

热带念珠菌

每次

常用试剂的质量鉴定

“X”因子条状物嗜沫嗜血杆菌副流感嗜血杆菌每周“抗菌药物敏感性试验

AST

目的检出细菌对抗生素的耐药性，预测临床治疗结果体外R≈体内R，对R的结果可以相信体外S≠体内S，对S的结果应持怀疑态度定义：AST是一个检测细菌耐药性的体外抑菌试验（ART）抗菌药物敏感性试验AST如果没有细菌耐药性检测治疗过度：用药不当，过度使用抗生素治疗错误：用药错误，危重患者丧失抢救时机增加不必要的副作用增加不必要的费用增加细菌的耐药性降低医疗服务的质量如果没有细菌耐药性检测（1）手工试验1.纸片扩散法（S，I，R）2.稀释法（MIC）3.Etest（MIC）（2）自动仪器Vitek，Microscan，Phoenix（3）分子试验PCR直接检测mecA基因（4）酶试验Nitrocefin、ESBL检测方法：（1）手工试验1.纸片扩散法（S，I，R）方法：纸片法最适合常规实验室使用。其特点是方便、易操作，测定的药物随意可变，灵活性强。重要的是纸片法药敏试验有一套完善的质量控制方法，结果相当可靠。纸片法唯一的不足是中度耐药的菌株会出现问题。纸片法最适合常规实验室使用。其特点是方便、易操作，测定的药物肉汤稀释法和琼脂稀释法是把抗菌药物倍比稀释在肉汤或琼脂中定量测定MIC的方法。稀释法可以精确测定一些厌氧菌及苛养菌，而对这些菌纸片扩散法是无能为力的。琼脂稀释法较肉汤稀释法精确的原因在于细菌的生长情况可查，且一套平皿可测多株细菌。这两种方法的缺点的耗时费力。肉汤稀释法和琼脂稀释法是把抗菌药物倍比稀释在肉汤或琼脂中定量自动化药敏仪目前，有Vitek系统、Microscan系统、SensstiterARIS等。但自动化仪也有一定的局限性。首先药物的选择缺乏灵活性，其次检测一些特殊菌的耐药性时有困难，尤其是快速药敏板，其可靠性不佳。

自动化药敏仪目前，有Vitek系统、Microscan系统、E-Test法是结合扩散法和稀释法的特点，长塑料条含有连续的呈指数梯度变化的抗菌药物，具有精确、可靠、稳定性好的特点，且各种耐药表型均有良好的效果，唯一的缺点是价格昂贵。

E-Test法是结合扩散法和稀释法的特点，长塑料条含有连续的药物敏感试验的质量控制纸片扩散法:每周至少一次;更换药物或培养基是要做质控常用质控菌株:金黄色葡萄球菌ATCC25923大肠埃希菌ATCC25922铜绿假单胞菌ATCC27853稀释法(手工):每周至少一次,最好每批实验标准菌株和临床分离菌同时做常用质控菌株:金黄色葡萄球菌ATCC29213大肠埃希菌ATCC25922铜绿假单胞菌ATCC27853药物敏感试验的质量控制纸片扩散法:每周至少一次;更换药物或培药物敏感试验质量控制培养基：每批做一次质控纸片：每批并每周一次菌悬液浓度标准：为1.5×108CFU／ml药物敏感试验质量控制培养基：每批做一次质控M-H琼脂平皿定量在琼脂扩散法药敏试验中，M-H琼脂厚度是严重影响纸片药敏试验结果的重要因素，琼脂培养基越厚抑菌环直径越小、反之则越大；克服的办法是要在保持水平的平台上（水平仪）定量倾注培养基，这个问题至今未被充分的重视。10cm的平皿应倾注23-25ml的培养基。

M-H琼脂平皿定量在琼脂扩散法药敏试验中，M-H琼脂厚度是严抗菌药纸片贮藏纸片失效是造成药敏结果错误的最重要的原因，必须在-20℃或更低温度的低温冰箱中保存纸片，近期使用的纸片只需放4℃冰箱，一周后弃取，更换新纸片。抗菌药纸片贮藏纸片失效是造成药敏结果错误的最重要的原因，必药物敏感试验质量控制连续质控检测1次/天共30天，获30个检测值，如：1、≤3个值超出范围，可行每周一次质控2、≥4个值超出范